口蹄疫病毒3D基因的真核表达及其表达产物的功能分析

利用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,经测序确认后将其克隆到真核表达质粒载体pcDNA3.1( )中,重组质粒pcDNA3.1( )-3D经HindⅢ、XbaⅠ双酶切后转染至BHK-21细胞,用纯化的目的蛋白进行Western-blotting鉴定,并预测该3D基因表达产物的三级结构。结果显示,获得分子质量约55 ku的单一3D基因表达产物,其三级结构较为保守。利用RNA细胞内复制体系和荧光定量RT-PCR技术,证明3D基因表达产物在细胞内可促进口蹄疫病毒基因组的复制。     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ），其抗体感作时间Ⅰ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法     

小儿心内膜弹力纤维增生症并室间隔缺损猝死1例

心内膜弹力纤维增生症(endocardial fibroelastosis,EFE)是一种少见的心内膜心肌病,是婴幼儿心脏猝死的常见原因。临床上常突然发病,多因心力衰     

甲基安非他明单克隆抗体及金标剂

一、课题的重要性 纤维具有质轻，易转移等特点，因而有色纤维是盗窃、命案、爆炸及纵火等刑事案件和交通肇事现场上出现几率较大的微量物证。纤维的种类很多，有棉纤维、毛纤维、蚕丝纤维及各种合成纤维等．不同种类的纤维必须用不同类型的染料进行染色。因此同种纤维可以由不同种类的染料染成相同的颜色：也可以由不同配比的相同染料染成相同的颜色。所以为了准确可靠的对有色纤维进行鉴定，除了应对纤维的种类进行检验外，必须对纤维上的染料及染料的相对含量进行鉴定。鉴于此，本课题组开展对常见有色纤维（棉、毛、涤纶、锦纶、腈纶纤维及棉／涤、毛，涤等混纺纤维）上染料的系统分析方法的研究，建立了各种有色纤维上染料的综合检测方法。     

绵羊血浆阿维菌素荧光高效液相色谱检测法的建立

建立了一种绵羊血浆中阿维菌素 (AVM )荧光高效液相色谱 (HPLC)检测法。用甲醇提取绵羊血浆中的AVM ,并用ODS C18固相萃取法进行纯化 ,纯化后的AVM经干燥处理后 ,用三氟乙酸酐和N 甲基咪唑对其进行荧光衍生化 ,用荧光HPLC进行检测。本方法的最低检测限为 0 .1ng/mL ,在血浆AVM含量 2 .5～ 5 0 .0ng/mL范围内 ,标准曲线方程为Y =2 72 12x -10 412 (r =0 .9995 ) ,样品的平均回收率为 92 .0 2 %± 6.3 3 %。批内变异系数 1.98%～ 6.2 2 % ,批间变异系数 2 .3 1%～ 8.94%。检测结果显示 ,本方法灵敏度高 ,干扰少 ,重复性好。     

血手印的荧光显现

从血液的组成入手 ,以实验为基础 ,阐明了血手印荧光显现的原理 ,介绍了采用蛋白染色技术荧光显现血手印的方法。     

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86 mRNA转录的影响

用猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪圆环病毒2型(PCV2)共感染40日龄健康大白仔猪,利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞(PAM)共刺激分子CD80-CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明,在感染后第3 d和第7 d CD80与CD86 mRNA转录显著下调(P<0.05),感染后第14 d CD86 mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80 mRNA转录水平在第14 d和第28 d高于对照组,CD86 mRNA转录水平在第28 d高于对照组,两者在第42 d均高于对照组,但无显著差异。证实,PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制,PAM的抗原呈递能力受到影响。     

猪瘟病毒荧光RT-PCR快速检测方法的建立

以猪瘟病毒5′端非编码区为靶核酸序列设计引物和探针,建立了一步法荧光RT-PCR检测猪瘟病毒。荧光RT-PCR仅检测出猪瘟C株、T株,未能检测出牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪呼吸系统冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、PK-15细胞和牛睾丸原代细胞;对猪瘟病毒T株的扩增反应产物进行了测序分析,与预期序列相符。荧光RT-PCR的检测极限可达到1 TCID50/mL,整个试验流程只需2 h。采用荧光RT-PCR和抗原捕获ELISA同时检测临床病料、猪副产品共207份样本,两种方法的检出率分别为17.4%和13.5%,两者符合率为95.7%(198/207);荧光RT-PCR的检出率高于ELISA,两者差异显著。结果表明,建立的荧光RT-PCR可用于猪产品、临床病料中猪瘟病毒的快速检测。     

沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用

根据沙门菌保守的fimY基因序列设计合成了引物和TaqMan探针,建立了快速检测沙门茵的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。通过对临床样品的检测,该试剂盒的检测灵敏度达4．5 CFU(25μL反应体系),比常规PCR高100倍,而且稳定性良好,至少可以冷冻保存9个月。结果表明,所建立的沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,适于大量样品的检测。     

迟发性外伤性脑内血肿脑组织GFAP、S-100和NSE的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ABC法和S－P法，对6例伤后1．5天至2年发生的迟发性外伤性脑内血肿（DTICH）脑组织标本进行神经胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、S－100蛋白（S－100）和神经元细胞内特异性烯醇化酶（NSE）变化和应用价值的研究。尸检和组织学检查发现有脑挫伤等病变。6例DTICH脑组织挫伤及周围区均有明显的GFAP、S－100阳性的细胞变化，细胞数目增多，胞体肥大、增生，免疫组化反应产物增多、深染；神经元细胞NSE免疫组化染色均呈阴性改变。结果表明：6例DTICH脑组织中GFAP、S－100的NSE的免疫组织化学变化是有一定时间间隔的外伤性陈旧性改变，在DTICH的病理诊断上具有重要价值，可作为DTICH法医学鉴定的一个辅助手段。