| 流行性乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位区与猪细小病毒VP2真核表达质粒的构建及免疫效果 |
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| 引用本文： | 李云云,郭万柱,林华,漆信桥.流行性乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位区与猪细小病毒VP2真核表达质粒的构建及免疫效果[J].中国兽医科学,2010,40(9). |
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| 作者姓名： | 李云云 郭万柱 林华 漆信桥 |
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| 作者单位： | 四川农业大学动物生物技术中心,四川,雅安,625014 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，四川省教育厅重点实验室项目，教育部"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目 |
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| 摘 要： | 筛选了3个位于流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白上不同位置的抗原表位区基因,利用重叠PCR方法分别与猪细小病毒(PPV)VP2基因相连。将目的基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了重组质粒pcDNA3.1-EA-VP2、pcDNA3.1-EB-VP2、pcDNA3.1-EC-VP2。将重组质粒在无免疫佐剂参与的情况下免疫BALB/c小鼠,同时设空质粒接种组及PBS缓冲液接种组作为空白对照,采用ELISA法、淋巴细胞增殖试验和流式细胞仪技术分别对抗体水平、脾淋巴细胞转化功能和小鼠外周血中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞数进行检测。结果显示,重组质粒pcDNA3.1-EA-VP2、pcDNA3.1-EB-VP2、pcDNA3.1-EC-VP2接种小鼠后,都能诱导小鼠产生JEV、PPV特异性抗体,并且促进脾淋巴细胞增殖。试验组与对照组比较差异极显著(P0.01);试验组小鼠CD3+、CD4+T淋巴细胞数在首疫后第7天高于对照组(P0.01),CD8+T淋巴细胞数在首免后第14天高于对照组(P0.01)。pcDNA3.1-EB-VP2免疫组小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平均高于pcDNA3.1-EA-VP2和pcDNA3.1-EC-VP2免疫组。表明,用JEV E蛋白抗原表位区基因与PPV VP2基因构建的真核表达质粒能够诱导小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫应答。
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| 关 键 词： | 流行性乙型脑炎病毒 猪细小病毒 抗原表位 重叠聚合酶链反应 免疫原性 |
Construction of the eukaryotic expression plasmid with antigenic determinant of Japanese encephalitis virus E gene and porcine parvovirus VP2 gene and evaluation of immunogenicity of the expressed protein |
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