抗鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 |
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引用本文: | 白小飞,刘红玉,陈玉环,殷秀辰,刘明,张云.抗鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J].中国兽医科学,2014(8). |
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作者姓名: | 白小飞 刘红玉 陈玉环 殷秀辰 刘明 张云 |
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作者单位: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;东北农业大学动物医学学院; |
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基金项目: | 现代农业水禽产业技术体系岗位科学家专项(CARS-43-10);国家自然科学基金资助项目(31072132);公益行业专项(201003012) |
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摘 要: | 为了制备抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜(E)蛋白的单克隆抗体,将鸭坦布苏病毒E基因进行原核表达,目的蛋白被纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规的单克隆抗体的制备技术,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA方法筛选及3次连续克隆化共获得6株能稳定分泌抗E蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,它们分别被命名为1F3、1G2、1B11、2A5、3B6和4F9。Dot-ELISA及Western-blot分析结果表明,这6株单克隆抗体均能与原核表达的E蛋白特异性结合。经间接免疫荧光(IFA)试验验证,这6株单克隆抗体均能识别鸭坦布苏病毒感染的细胞,且荧光主要位于细胞质中。结果表明,本研究成功制备了6株抗鸭坦布苏病毒E蛋白的单克隆抗体。鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备为今后鸭坦布苏病毒快速的病原学诊断以及E蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。
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关 键 词: | 鸭坦布苏病毒 E蛋白 原核表达 单克隆抗体 免疫印迹 斑点杂交 间接免疫荧光 |
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