鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定 |
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引用本文: | 张凡庆,谭磊,包世俊,任峰,陆凤,费荣梅,丁铲.鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基单克隆抗体的制备和鉴定[J].中国兽医科学,2014(7). |
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作者姓名: | 张凡庆 谭磊 包世俊 任峰 陆凤 费荣梅 丁铲 |
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作者单位: | 南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所; |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(30871883);公益性行业(农业)科研专项(201303044) |
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摘 要: | 为制备鸡毒支原体丙酮酸脱氢酶E1β亚基(PDHB)的单克隆抗体,将鸡毒支原体Rlow株的pdhb基因进行克隆和原核表达。表达产物纯化后作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗鸡毒支原体PDHB抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为2D11、3B5和4D9。ELISA检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,小鼠腹水的抗体效价为1∶12 800~1∶25 600。单克隆抗体特异性试验显示,获得的腹水单克隆抗体均能与鸡毒支原体各菌株发生反应,而不与其他禽类病原发生反应。3株单克隆抗体的抗体亚型均为IgG1,轻链均为κ链。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。鸡毒支原体PDHB单克隆抗体的成功制备,为研究丙酮酸脱氢酶的生物学功能和进一步建立检测方法奠定了基础。
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关 键 词: | 鸡毒支原体 丙酮酸脱氢酶Eβ亚基 单克隆抗体 |
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