| 比格犬α7干扰素成熟肽基因的原核表达及表达产物活性的分析 |
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| 引用本文： | 潘福星,朱梅胜,冯培祥,王冬冬,范丹丹,齐娟,王祖荣,尹燕博.比格犬α7干扰素成熟肽基因的原核表达及表达产物活性的分析[J].中国兽医科学,2014(3). |
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| 作者姓名： | 潘福星 朱梅胜 冯培祥 王冬冬 范丹丹 齐娟 王祖荣 尹燕博 |
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| 作者单位： | 青岛农业大学动物科技学院;青岛澳兰百特生物工程有限公司;青岛博隆实验动物有限公司; |
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| 基金项目： | “十二五”农村领域国家科技计划项目(2012AA101303) |
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| 摘 要： | 从比格犬的脾中提取基因组DNA,采用RT-PCR方法扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因。将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,PCR检测及测序鉴定结果表明,克隆的目的基因为比格犬α7干扰素成熟肽,与GenBank中登录的犬干扰素序列(NM001006654)的同源性达到100%。在此基础上构建重组原核表达质粒pET-32a-CaIFN-α7,并转化至表达宿主BL21(DE3)中。该工程菌在37℃经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约38.4ku处出现了目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在。经Bandscan软件分析,表达产物约占菌体总蛋白的48.5%。用Protein Refolding Kit对包涵体进行纯化复性,重组CaIFN-α7在犬肾细胞(MDCK)上具有较高的抗病毒活性。
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| 关 键 词： | 比格犬 α干扰素成熟肽基因 克隆 原核表达 抗病毒活性 |
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