NF-κB受体激活因子配体的表达及其多克隆抗体的制备

为获取猪源NF-k B受体激活因子配体(RANKL)及其抗体,根据GenBank中猪源RANKL的序列设计引物,将合成的RANKL基因克隆至pMAL-C4x表达载体,转化到大肠杆菌DH5α。经PCR和双酶切鉴定后测序分析,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21后通过IPTG诱导表达。优化表达条件,确定是包涵体表达,蛋白大小为78.1 ku。使用纯化的RANKL为抗原免疫兔制备多克隆抗体。构建重组质粒pCMV-RANKL,表达目的蛋白并使其与多克隆血清反应。经ELISA、Western-blot和IFA鉴定,证实抗RANKL多克隆抗体有良好的抗原特异性,为后续黏膜免疫的研究奠定了基础。     

西尼罗病毒E蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

利用PCR技术扩增西尼罗病毒(WNV)E蛋白基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-WNV-E,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导目的蛋白表达,对诱导条件进行优化,利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,纯化后的蛋白经SDS-PAGE与Westernblot鉴定正确后,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行间接免疫荧光鉴定。结果显示:WNV E蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式被成功表达,蛋白最佳诱导条件为37℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5 h,经间接免疫荧光鉴定多克隆抗体能特异性识别WNV E蛋白。本研究成功表达并纯化了WNV E蛋白,证明该蛋白具有良好的免疫原性,为WNV抗原、抗体检测方法的建立和新型疫苗的研发及相关研究奠定了基础。     

基于分子克隆方法制备标准分子量片段混合物

目的制备标准分子量DNA片段混合物。方法选取pMD18-T载体部分序列作为插入片段,设计引物,制备包含不同大小的标准分子量片段的克隆。大量培养细菌提取质粒,用双酶切、连接荧光接头的方法制备不同大小的带有荧光的标准分子量片段,混合,纯化,最终获得标准分子量片段混合物(内标)。结果用分子克隆方法制备出具有实用性的标准分子量片段混合物,其单个标准分子量片段大小分别为80bp、124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp、454bp。并且这些标准分子量片段混合物可以准确地对DNATyper15试剂盒的扩增产物进行检测。结论应用该方法制备了能满足研究和实验室要求的标准分子量片段混合物,为DNA分子量标准物标准品的制作提供了一种新的方法。     

小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析

根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因(msg1)序列设计引物,对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增,获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因(mpg1)并进行测序和分析,研究其遗传变异特点。结果显示,共获得了11条小附红细胞体mpg1基因序列,序列长度均为1 011bp。同源性分析显示,所获得的11条小附红细胞体mpg1基因序列之间的相似性为96.8%~99.9%,预测氨基酸序列的相似性在97.9%~100%之间;与GenBank中公布的猪附红细胞体msg1基因核苷酸序列相似性在96.6%~98.2%之间,氨基酸序列的相似性为98.2%~99.1%。系统进化分析表明,msg1基因与mpg1基因共同构成每个聚簇。     

简析古典诗词英译中的意境“克隆”——转译法的应用

意境是诗词之眼,是诗词精髓所在、神韵所属,有着独有的特征。意境有四个特征,即寄生性、模糊性、延展性、不可计量性。转译法是翻译中常用的一种变通手段,是突破原文词、句格局,化阻滞通行文的重要方法,对中国古典诗词英译中的意境"克隆"起到至关重要的作用。     

“克隆”轿车运营

前不久．家住风阳县府城镇的邓某与朋友在一起吃饭时，有朋友告诉他，在凤阳县刘府镇街头偶然发现一辆和邓某车牌车型都一模一样的小车。这让邓某很是郁闷。3月14日上午。当邓某开车从淮南市办完事情往回赶时正好路过刘府镇．便有意减速注意搜寻是否能发现“孪生兄弟”。待其行至刘府镇三岔路朝北200米处时，     

牛黄“粘”住异域巨骗

五名韩国人通过“服装样品”夹带各种类型的信用卡来沪，然后刷卡虚假消费，套取大量现金，上海警方循迹追踪，苦战20天，将其一网打尽，并一举查获用于作案的信用卡457张，上海首起跨国信用卡诈骗案成功告破。事隔半年，一伙马来西亚人携带经过“克隆”的信用卡悄然潜来上海，刷卡狂购名贵药材和高档日用品，犯罪活动刚刚露头，即被高度警觉的群众识破。     

西伯利亚发现猛犸象活细胞有望克隆复活

一个国际科研团队在俄罗斯东部雅库特一个永久冻土猛犸象墓地中发现了一副独特的猛犸象残骸。这支考察队的负责人、雅库茨克市东北联邦大学猛犸象博物馆馆长塞米扬·吉利古尔耶夫表示:"8月份的发现还包括这头猛犸象柔软的脂肪组织、毛发和骨髓等。"更重要的是,据说该发现包括"活"细胞,这在猛犸象研究领域尚属首次发现。通常情况下,在冰冻细胞中DNA被毁坏。所以,从雅库特猛犸象体内发现的这些细胞对科学家来说具有巨大用途。科学家要获得一只猛犸象完     

麋鹿朊蛋白全基因的克隆及序列分析

为获得中国麋鹿朊蛋白(PRNP)的全基因,并利用DNAStar软件与已报道的其他动物的朊蛋白全基因序列进行同源性分析,根据GenBank中马鹿朊蛋白基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从提取的总基因组中扩增得到麋鹿PRNP基因;将其连接到pGEM-T Easy载体中,获得克隆产物并测序。结果,成功扩增出了中国麋鹿PRNP基因,构建了重组质粒pGEM-T-ML;对克隆产物的序列分析表明,麋鹿PRNP基因的开放阅读框包含771bp,编码256个氨基酸的前体蛋白,前体蛋白的分子质量约为28 200u;与已报道的其他鹿科动物朊蛋白全基因的核苷酸及氨基酸序列的同源性均在98.8%以上,与几种非鹿科动物的同源性在96.5%～98.4%之间。结果表明,麋鹿PRNP基因的核苷酸和编码蛋白的氨基酸序列与其他鹿科动物的序列具有高度保守性,而与几种非鹿科动物间的同源性也较高,说明朊蛋白是一种古老的高度保守的蛋白。