猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定 |
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引用本文: | 杨莘,周艳君,姜一峰,童武,郭亦非,刘飞,童光志.猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定[J].中国兽医科学,2014(9). |
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作者姓名: | 杨莘 周艳君 姜一峰 童武 郭亦非 刘飞 童光志 |
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作者单位: | 中国农业科学院上海兽医研究所; |
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基金项目: | 国家重点基础研究发展计划(973)项目(2014CB542700);国家自然科学基金项目(31100121,31302098);国家生猪现代产业技术体系建设项目(NYCYTX-009);上海市重点基础研究项目(11JC1415200) |
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摘 要: | 为制备具有广谱反应性的SAMHD1单克隆抗体,通过提取Marc-145细胞的总RNA,采用RTPCR将SAMHD1全长编码基因定向克隆至pCold-TF原核表达载体中,成功构建了重组质粒pColdmSAMHD1。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,经IPTG诱导表达并通过纯化获得了可溶性的重组SAMHD1蛋白。以纯化的重组SAMHD1蛋白为抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA和5次杂交瘤细胞亚克隆,筛选出1株针对SAMHD1蛋白的单克隆抗体,遂被命名为M2D9。Western-blot分析显示,M2D9能够与SAMHD1真核表达蛋白以及细胞内源性SAMHD1蛋白发生特异性反应,且具有很好的免疫沉淀效价。交叉反应性鉴定结果显示,M2D9抗体能够与人、鼠源细胞内SAMHD1蛋白发生特异反应。本研究成功获得了具有特异性和广谱反应性的猴源SAMHD1单克隆抗体,可用于ELISA检测、Western-blot分析和免疫沉淀试验,为SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。
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关 键 词: | SAMHD蛋白 单克隆抗体 广谱反应性 |
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