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| 小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 杨帆,窦永喜,朱学亮,骆学农,岳城,才学鹏.小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆与原核表达[J].中国兽医科学,2009,39(6). |
| 作者姓名： | 杨帆 窦永喜 朱学亮 骆学农 岳城 才学鹏 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院,兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730046;新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052 2. 中国农业科学院,兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730046 3. 新疆农业大学动物医学学院,新疆,乌鲁木齐,830052 |
| 基金项目： | 国家农业公益性行业科研专项基金，甘肃省国际合作项目 |
| 摘 要： | 提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价.结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原.表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性. |
| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 F蛋白 克隆 原核表达 |
Cloning of F gene of peste des petits ruminants virus Nigeria75/1 strain and its expression in Escherichia coli |
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| YANG Fan,DOU Yong-xi,ZHU Xue-liang,LUO Xue-nong,YUE Cheng,CAI Xue-peng.Cloning of F gene of peste des petits ruminants virus Nigeria75/1 strain and its expression in Escherichia coli[J].Veterinary Science in China,2009,39(6). | |
| Authors: | YANG Fan DOU Yong-xi ZHU Xue-liang LUO Xue-nong YUE Cheng CAI Xue-peng |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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