| 禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 童桂香,谢芝勋,黄琦,文艳玲,谢丽基,庞耀珊,刘加波,邓显文.禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J].中国兽医科学,2007,37(9):767-771. |
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| 作者姓名： | 童桂香 谢芝勋 黄琦 文艳玲 谢丽基 庞耀珊 刘加波 邓显文 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学,动物科技学院,广西,南宁,530005
2. 广西兽医研究所,广西,南宁,530001 |
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| 基金项目： | 广西留学回国人员科学基金;广西自然科学基金 |
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| 摘 要： | 为建立禽呼肠孤病毒(ARV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定、SalⅠ单酶切,得到线性化转录模板DNA,将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板,用于标准曲线的制定。根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物,以体外转录的RNA作为标准品,应用SYBR GreenⅠ染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,制作的标准曲线定量浓度范围宽,比常规的RT-PCR敏感1×103倍,可检测到5.2×102个拷贝的标准品RNA,与NDVI、BDV、MG均不反应;从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒,病毒含量为1×105~1×107个拷贝/μL。表明,建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于ARV的检测。
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| 关 键 词： | 禽呼肠孤病毒 体外转录 SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR |
| 文章编号： | 1673-4696(2007)09-0767-05 |
| 修稿时间： | 2007年6月15日 |
Development of real-time fluorescent quantitative RT-PCR for detection of avian reovirus |
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| TONG Gui-xiang,XIE Zhi-xun,HUANG Qi,WEN Yan-ling,XIE Li-ji,PANG Yao-shan,LIU Jia-bo,DENG Xian-wen.Development of real-time fluorescent quantitative RT-PCR for detection of avian reovirus[J].Veterinary Science in China,2007,37(9):767-771. |
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| Authors: | TONG Gui-xiang XIE Zhi-xun HUANG Qi WEN Yan-ling XIE Li-ji PANG Yao-shan LIU Jia-bo DENG Xian-wen |
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| Institution: | TONG Gui-xiang1,XIE Zhi-xun2,HUANG Qi1,WEN Yan-ling1,XIE Li-ji2,PANG Yao-shan2,LIU Jia-bo2,DENG Xian-wen2 |
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