| 猪细小病毒1型VP2蛋白的表达与单克隆抗体的制备及应用 |
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| 引用本文： | 孙建慧,黄立平,危艳武,吴洪丽,王一平,张辉,刘丹,陈冬杰,张智慧,刘长明.猪细小病毒1型VP2蛋白的表达与单克隆抗体的制备及应用[J].中国兽医科学,2014(12). |
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| 作者姓名： | 孙建慧 黄立平 危艳武 吴洪丽 王一平 张辉 刘丹 陈冬杰 张智慧 刘长明 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室; |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA10A208);国家自然科学基金项目(31101837);公益性行业(农业)科研专项(201203039) |
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| 摘 要： | 为研制抗猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白的单克隆抗体,用重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,融合后采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验筛选抗PPV1VP2的单克隆抗体阳性细胞株,并对单克隆抗体的腹水效价、免疫反应特性及亚类进行了系统鉴定。结果显示,共获得8株阳性杂交瘤细胞株,其腹水抗体效价均达1∶51 200,其中7株的重链亚类为IgG1,另1株(4A1)为IgM;6株的轻链为κ型,另2株(8D7和4A1)为λ型。这些单克隆抗体均可与PPV1感染的猪睾丸细胞呈阳性反应;Western-blot结果显示,这些单克隆抗体可与自然PPV1VP2蛋白产生良好的免疫反应。以其中1株单克隆抗体(8E4)建立了间接ELISA,通过对重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白产物进行的动力学检测表明,第72小时蛋白表达量最高;对PPV1感染细胞增殖规律的测定结果显示,接种后第16小时可检测到病毒感染的阳性细胞,说明该病毒复制周期小于24h。本研究获得的单克隆抗体可用于重组VP2蛋白抗原的检测及病毒繁殖规律的研究。
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| 关 键 词： | 猪细小病毒型 VP蛋白 单克隆抗体 |
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