传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp10单克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 雷静,凌吉飞,周继勇,廖敏.传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp10单克隆抗体的制备[J].中国兽医科学,2014(8). |
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作者姓名: | 雷静 凌吉飞 周继勇 廖敏 |
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作者单位: | 浙江大学农业部动物病毒学重点实验室; |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31302104);现代农业产业技术体系岗位专家项目(CARS-41-11);浙江省创新团队项目(2012R10031) |
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摘 要: | 为了体外获得大量表达的传染性支气管炎病毒(IBV)的非结构蛋白10(nsp10)并制备其单克隆抗体,通过RT-PCR扩增获得了IBV nsp10基因,并将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组载体pET-28a(+)-nsp10转化的表达宿主菌在1mmol/L IPTG诱导5h获得高效表达。用纯化的重组蛋白Hisnsp10免疫小鼠制备单克隆抗体,采用有限稀释法经过3轮筛选和鉴定最终获得了2株分泌抗nsp10单克隆抗体的细胞株1G2和3G7。2株单克隆抗体在Western-blot分析中均与重组His-nsp10蛋白反应,并通过间接免疫荧光试验识别了4种不同毒株感染的DF-1细胞。IBV nsp10单克隆抗体的成功制备为IBV的检测和nsp10蛋白功能的研究奠定了基础。
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关 键 词: | 传染性支气管炎病毒(IBV) 非结构蛋白(nsp) 单克隆抗体 |
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