测定mRNA含量推断死亡时间

目前推断死亡时间的方法有很多,随着分子生物学的发展和检测技术的更新,通过测定组织细胞mRNA的含量的变化规律来推断死亡时间逐渐引起人们的注意。本文就组织mRNA的含量的测定方法,变化规律及存在的问题加以论述。     

组织细胞DNA含量变化与死亡时间的相关性研究

目的研究人死后各器官组织细胞DNA降解变化规律,探讨其在推断死亡时间方面的应用价值,为推断死亡时间提供科学依据。方法已知死亡时间人尸体的心、肝、脾、肾,按死后6,12,24和48h四个时间段取材,制成石蜡切片,经Feulgen染色并图像分析;同时将各器官组织按不同时间段取材,制成单细胞悬液,应用流式细胞仪检测DNA含量。结果(1)人体各器官组织细胞经FCM检测,脾细胞核DNA随死亡时间延长呈现较好的下降梯度,而心、肝、肾,则由于自溶较快,死后6h细胞核DNA含量已很低,其变化情况与死亡时间的相关性不佳;(2)各器官组织细胞核DNA染色强度指数均随死亡时间的延长而下降。结论(1)机体死亡后,各器官组织细胞核DNA含量随死亡时间延长逐渐减少,具有一定的变化规律,其中以脾细胞核DNA含量的变化趋势与死亡时间最具相关性,肝、肾次之,而心最差;(2)方法学分析,图像分析技术(IAT)与流式细胞术(FCM)两种检测方法在研究组织细胞DNA含量变化方面,各有利弊,可互补不足。     

大鼠死后组织细胞DNA含量变化与死亡时间的相关性研究

目的应用流式细胞术研究大鼠死后组织细胞DNA含量变化与死亡时间的相关性。方法SD大鼠断颈处死后于不同时间段取心、肝、脾、肾器官组织,经胰蛋白酶消化等处理后制成单细胞悬液,应用流式细胞术,在620nm波长处检测各组不同器官组织细胞DNA含量,观察其变化规律。结果大鼠各器官组织细胞DNA含量随死亡时间延长均呈下降趋势。其中以脾组织细胞DNA含量变化趋势与死亡时间最具相关性,肝、肾次之,而心最差;死后48h,各器官组织细胞仅存微量完整的细胞核DNA。结论机体死亡后,各器官组织细胞核DNA含量随死亡时间的延长逐渐减少,具有一定的变化规律,可应用组织细胞DNA含量变化来推断死亡时间。     

大鼠死后心肌细胞DNA含量与死亡时间关系的进一步研究

目的研究机体的细胞核内DNA含量与死亡时间的关系。方法本实验通过计算机图像系统,选择核面积、积分光密度等7种参数,研究了15只大鼠心肌细胞在死后25～49h细胞核DNA含量的变化规律。结果心肌细胞DNA含量测定适合相对较长死亡时间的推断。结论应用计算机图像分析技术测量机体死后心肌细胞DNA含量将有可能成为推断死亡时间精确、客观的新方法。     

核酸与死亡时间的相关性及其检测方法

准确推断死亡时间一直是法医学研究的热点和难点。躯体死后组织细胞自溶,核酸（DNA和RNA）降解,在一定时间内其含量呈下降趋势并与死亡时间有线性关系。文章就核酸降解与死亡时间的相关性及核酸含量的检测方法进行综述,以获得对该技术的全面了解,并对解决死亡时间推断这一法医学难题的应用前景进行初步探讨。     

DNA降解与腐败尸体死亡时间的相关性

目的探讨骨髓细胞核DNA含量变化与腐败尸体死亡时间的关系。方法应用DNA高度特异性染色方法Feulgen改良法结合计算机图像分析技术对死后不同时间(0～14d)胸骨骨髓细胞核DNA含量变化进行分析。结果胸骨骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈缓慢而规律下降,直至死后两周仍未完全降解。结论死后DNA降解速率与死亡时间呈线性关系,测定死后骨髓细胞核DNA含量可望成为腐败尸体死亡时间推断的新方法。     

DNA定量技术在死亡时间推断中的研究进展

死亡时间推断是法医病理学研究的热点及难点之一.随着分子生物学技术的发展,DNA的定量已广泛应用于死亡时间推断的研究.本文主要对机体死后不同组织和器官中DNA含量随时间的降解情况,以及单细胞凝胶电泳、Feulgen染色图像分析技术、流式细胞仪等近年来新的DNA定量技术应用于死亡时间推断研究中的进展进行了综述.     

早期死亡时间研究进展

死亡时间(postmortem interval,PMI)推断是法医病理学研究的重点内容。近些年,利用尸温、玻璃体液成分、早期尸体现象以及生化指标等推断早期PMI的有关研究在认识、数据和方法上取得了新进展,本文加以综述以供参考。     

早期死亡时间推断研究进展

死亡时间推断在判断案件的性质、划定侦查范围及锁定嫌疑人等方面至关重要,一直是法医病理学工作的重点和难点。早期死亡时间,即指死后24 h以内,由于距离案发时间更短,对其准确推断能促进案件的成功侦破,具有重要的法医学意义。近年来,国内外法医学者运用一系列新方法和新技术对早期死亡时间推断进行了大量研究。本文对体液生物化学、超生反应、代谢组学、影像学、遗传物质降解规律等方面的研究进展进行综述,以期为早期死亡时间推断的研究和应用提供新的思路。     

测定DNA含量推断死亡时间——图像分析技术的标准化探讨

死亡时间 (PostmortemInterval ,PMI)的推断一直是法医学领域最重要且复杂的课题 ,为此人们应用各种手段做了大量的研究 ,也取得了一定进展。近年来 ,随着技术手段的发展和日益成熟 ,通过测定死亡后组织细胞DNA含量的变化来推断PMI ,有望成为一种更准确、可靠的方法。死后组织细胞DNA含量随PMI的延长而呈下降趋势 ,已被众多学者所证实[1,2 ] 。 2 0 0 0年刘良等[3 -5] 首次利用计算机图像分析技术 (ImageAnalysisTechnique ,IAT) ,对大鼠死后组织细胞DNA含量变化与PMI的关系进行了一系列研究 ,确立了建立多参数、多脏器、多元回…     

Standard 28-cycle amplification of X/Y-FISH labelled epithelial cells for DNA profiling

The examination of sexual assault evidence frequently involves the analysis of samples that comprise mixtures of male and female cells. Separating male and female cells benefits analysis as the results are more likely to be simplified into profiles from single contributors. Some separation methods have focussed on separation of sperm from epithelial cells, but samples without sperm also require separation (vasectomised males, licked skin, etc.). X/Y chromosome FISH labelling when combined with laser micro-dissection (LMD) is a reliable method to separate male and female epithelial cells, but has mostly been combined with increased cycle PCR to create DNA profiles, limiting its use in many forensic laboratories. This study aimed to determine the limits of cell numbers collected by LMD for standard 28-cycle DNA profiling, and to test the effects, if any, on stochastic variation normally caused by sampling effects. Male and female epithelial cells were stained using the Vysis CEP X/Y DNA Probe kits, and collected using a Leica LMD6000. DNA was extracted and amplified by the ESR in-house one-tube method, using standard 28-cycle PCR with the AmpFISTR Identifiler™ (Applied Biosystems) multiplex kit. Full IdentifilerTM DNA profiles were produced using standard 28-cycle PCR, and partial profiles suitable for submission were produced from even relatively low numbers of cells collected. Profiling results were compared with low-copy number PCR on low numbers of cells stained and collected in the same manner, and the observed effects on heterozygote balance are discussed.     

激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究

目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。     

SNP分型方法及在法医学等领域的应用

随着单倍型图的产生,SNP越来越受到关注。不仅仅在Y染色体和线粒体,常染色体和X染色体上的SNPs的应用潜能也将被发现。SNPs具有比较低的突变率和适合于降解DNA分析的特点,在法医学领域也受到关注。本文综合介绍了SNPs和X-SNPs的一般特性、分型方法及其在法医学的应用。     

激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞

目的 评估激光捕获显微切割(laser capture microdissection.LCM)技术在分离混合斑中少量精子细胞的应用价值.方法 配制不同比例的精液-阴道上皮细胞混合液.分别用差异裂解法和LCM法分离精子细胞,用磁珠法提取精子细胞DNA,并用IdentifilerTM试剂盒进行STR基因型检测.结果 LC...     

Cell free DNA as a component of forensic evidence recovered from touched surfaces

In the course of a criminal investigation, DNA is often recovered from items that have been handled by an individual. Whilst there have been studies investigating the propensity of different individuals to deposit DNA, little is known about the factors involved in the transference of DNA through touch. This investigation seeks to clarify some of the underlying processes involved in DNA transfer, as to better understand the significance of so-called “touch DNA” evidence (tDNA). It was shown that an average yield of 11.5 ng of DNA could be recovered from 1 mL cell-free sweat samples leading to the hypothesis that cell-free nucleic acids (CNAs) of a suitable length for standard DNA profiling are transferred during handling/touching items. A method of standardization of tDNA deposition was developed to overcome the significant sample to sample variability in DNA levels characteristic of tDNA samples. The glass bead method allowed the creation of identical tDNA sample sets, thus permitting direct comparisons to be made in the efficiency of various extraction methods. Extraction methods designed to optimize CNA recovery from touched articles resulted in comparable yields in a general population study, however the methods resulted in a twofold increase in DNA yields from touched items touched by individuals with sweaty hands. These results suggest that the CNA component of touched surfaces should be included to maximize profiling success of tDNA.     

图像分析技术在测定细胞DNA含量推断死亡时间中的若干问题

图像分析技术为法医学早期死亡时间推断提供了一种新的方法,但目前仍有许多局限,本文将重点讨论标本的取材及固定、涂片或切片的选择、细胞群聚和重叠的处理、参考细胞核及门槛问题,以及个体差异对图像分析的影响及相应的解决方法。     

牙髓细胞DNA含量与死后经过时间的相关性

目的探讨死后不同环境温度下离体牙的牙髓细胞平均DNA含量变化与死后时间(PM I)的相关性。方法采用细胞图像分析系统(PIPS-2020),测定离体即刻至15d牙齿在低温环境(10~15℃)和高温(30~35℃)环境下牙髓细胞DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果在不同的环境温度下,牙髓细胞DNA降解的速度有所不同,温度的升高有加速牙髓细胞DNA降解的趋势,且DNA降解存在一个平台期。低温组牙髓细胞平均DNA含量与PM I之间的相关系数r=0.953,相关指数R2=0.917;高温组的相关系数r=0.991,相关指数R2=0.971。结论牙髓细胞平均DNA含量与PM I之间具有高度相关性,测定牙髓细胞的DNA变化情况对推断3d(高温环境)或6d(低温环境)后的PM I有参考价值。     

不同分型方法的STR分型差异

目的调查不同的STR分型系统之间分型的一致性。方法 10 0例不同个体的DNA样本分别用单位点聚丙烯酰胺凝胶银染法和PowerPlex16System试剂盒对 13个法医学常用STR位点进行基因分型 ,并比较两种不同分型系统间的分型结果。结果 1例样本在D8S1179位点出现了分型不一致的结果 :银染法的基因型为 12 / 14 ,而用PowerPlex16System试剂盒的分型则为 12 / 15。结论不同的STR分型系统可导致不同的基因分型     

甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量与死亡时间的相关性

目的探讨甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化与死亡时间(PMI)的相关性。方法采用甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术,测定尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量随死后经过时间的延长而加速降解。平均DNA含量各指标(平均灰度、目标面积、目标面积比)与PMI之间的决定系数R2分别为0.960、0.987、0.988和0.990(P<0.001)。结论尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量与PMI之间具有明显相关性,甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术测定在研究甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量变化方面具有一定优势。     

灌服毒鼠强诱导大鼠细胞DNA的损伤研究

目的研究毒鼠强体内染毒后,毒鼠强对大鼠脑细胞、心肌细胞、淋巴细胞DNA的损伤作用。方法选择健康Sprague-Dawley大白鼠20只,分成5组,每组4只,采用灌胃方法使大鼠毒鼠强体内染毒,按0.2,0.1,0.05,0.01mg·kg-1制作大鼠毒鼠强中毒模型,并以灌服生理盐水的健康大鼠为对照,分离实验大鼠的淋巴细胞、心肌细胞和脑细胞,用彗星电泳的方法测定不同浓度毒鼠强中毒后的细胞DNA损伤。结果0.2,0.1,0.05,0.01mg·kg-1剂量组的毒鼠强均可引起大鼠的淋巴细胞、心肌细胞和脑细胞DNA损伤,均与对照组差异有显著性(P<0.01)。结论毒鼠强诱导体内细胞DNA损伤可能是毒鼠强毒性作用机制之一。