猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达

为验证siRNAs对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的抑制效果,构建了猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因与增强型绿色荧光蛋白基因GFP的融合表达质粒,并在Marc145细胞中进行了表达。通过RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因,将其克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染Marc145细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和NSP9基因转录水平。结果显示,经双酶切及PCR鉴定,目的基因的大小与预期相符。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有NSP9基因的转录。本研究成功构建的猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9基因GFP融合表达质粒,为在细胞水平快速筛选有效的siRNAs提供了工具。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒Myanmar株全基因序列的测定与遗传变异分析

2010年首次从缅甸某发病猪场采集的疑似猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and re-spiratory syndrome,PRRS)病料中分离到一株PRRSV,命名为PRRSV Myanmar株。应用RT-PCR方法分段扩增出Myanmar株的各基因片段,并将扩增产物分别连接到pEASY-T3载体并进行测序。序列测定结果表明,Myanmar株基因组全长15 411bp(不包括PolyA尾),包含10个开放阅读框,5′UTR长189nt,3′UTR长151nt。全基因序列与经典PRRSV VR2332株核苷酸序列的一致性为99.3%,与高致病性PRRSV NVDC-JXA1株核苷酸序列的一致性为89.5%。在非结构蛋白Nsp2区域并未出现特征性的30个氨基酸的缺失,而与欧洲型标准毒株(LV)核苷酸序列的一致性为54.6%。上述结果说明Myanmar株在基因型上属于经典美洲型。同时,遗传进化树分析显示,Myanmar株与PRRSV 01NP1.2株、RespMLV株、BJ-4株及PL97-1株的亲缘关系最近。     

褪黑素对内毒素血症山羊肝细胞线粒体呼吸功能的影响

将48只健康山羊随机分为4组:对照组(A组)、内毒素(LPS)组(B组)、内毒素+褪黑素(LPS+MT)组(C组)、褪黑素(MT)组(D组),在处理后第3 h和6 h提取肝细胞线粒体,采用Clark氧电极技术测定线粒体呼吸控制率(RCR)、磷氧比值(P/O)、氧化磷酸化效率(OPR)的变化,探讨了MT对LPS诱导的山羊内毒素血症机体线粒体呼吸功能的影响。结果显示,内毒素组山羊在第3 h和6 h的RCR、P/O、OPR显著低于对照组(P<0.05);应用褪黑素后,即内毒素+褪黑素组第3 h的肝细胞线粒体RCR、P/O、OPR明显升高(P<0.05);褪黑素组第3 h的RCR明显高于对照组(P<0.05),而褪黑素组第3 h的P/O、OPR与对照组差异不显著(P>0.05)。证实,山羊内毒素血症时线粒体的呼吸功能明显下降,褪黑素对肝细胞线粒体呼吸功能具有一定的保护作用。     

941方对衰老大鼠肝线粒体酶活性的影响

目的：通过检测衰老大鼠肝组织细胞线粒体呼吸链氧化功能。探讨大鼠衰老时肝组织细胞线粒体呼吸甸氧化功能的变化规律及941方延缓衰老的作用机制。方法：分别从4月龄（青年组）、24月龄（老龄组）和941方组大鼠的肝组织分离出线粒体,并用双缩脲法测定单位组织的线粒体蛋白,用Clark氧电极极谱法分别测定线粒体呼吸链3个氧化酶活性：NADH氧化酶（NADHOX）、琥珀酸氧化酶（SUCOX）和细胞色素氧化酶（CYTOX）。用差光谱法（联二亚硫酸钠还原减正铁氢化钾氧化的消化值）获得细胞色素a、b、c和c1含量（Cyta、Cytb、Cytc和Cytc1)。结果：与青年组大鼠比较,老年组大鼠的肝组织细胞线粒体含理有一定下和,百3个氧化酶活性却显增加,同时细胞色素含量尤其是Cytb和Cytc显升高,941方组大鼠肝组织细胞线粒体上述指标皆显高于青年组和老年组。结论：衰老大鼠肝组织线粒体酶活性与青年组有显不同,表明衰老过程中肝细胞通过某种反馈机制使残存完好的线粒体氧功能代偿性增强;９４１方使这种作用进一步增强。     

平凡不必伟大

左玉树前,我对高反是没有具体概念的。中转的飞机落在海拔2000多米的西宁时,我还毫无反应。当再次起飞的飞机下落时,伴随着一阵猛烈的气流颠簸,我开始晕机、呕吐为了缓解眩晕,我开始用力大口呼吸,没想到,立刻导致了缺氧。     

健康睡眠 远离鼾症

一、打呼噜也是病吗?形容一个人睡得很香,人们往往用"鼾声如雷",认为打呼噜打得越响睡眠越沉。其实不然,专家指出,打呼噜响亮,不仅不是意味着睡得香,而且里面还蕴含着极大的危险。世界鼾症技术专家Noel Role医学博士权威指出,全世界鼾症患者约有2.3亿人患有睡眠呼吸暂停综合症,全世界每天因打呼噜引起呼吸暂停导致直接或间接死亡的人数约4000多人,打鼾己成为人类健康的第一杀手。中国呼吸疾病专家钟南山院士也     

大鼠急性斑蝥中毒血流动力学研究

大鼠急性斑蝥中毒的血流动力学研究结果显示,灌胃后,大鼠左心室舒张末压(LVEDP)呈下降趋势,左心室内压(LVP)和左室压最大变化速率(±dp/dt max)变化不明显;心率(HR)在低剂量组加快,而大剂量组减慢;心电图(EKG)无明显改变;呼吸频率(RR)先快后慢,大鼠死亡时,呼吸比心跳早停止几分钟。提示斑蝥中毒死亡较快时,呼吸抑制作用是一个不容忽视的因素。     

浅谈舞蹈中的"呼吸"

呼吸是舞蹈表演中的一个重要组成部分,它贯穿其中,决定着舞者肢体的表现力.本文从芭蕾、现代、古典、民间不同风格的舞种中阐述了呼吸的作用.     

猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的PRRSV保守基因序列设计合成了引物和探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。同时用建立的检测方法对组织病料进行了检测,并与常规RT-PCR做了对比。结果显示,所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、增城、湛江等地的猪血清和多种组织样品进行了检测。结果,该方法与常规RT-PCR检测方法的阳性符合率为100%。用该方法对3份不同的组织样品进行了重复检测,结果表明,该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需要。