ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证,并初步应用于临床样品的检测。结果显示,该方法可在45 min内完成对ASFV、PRRSV及猪源β-actin基因的特异性扩增;对ASFV、PRRSV及猪源β-actin标准品模板的最低检测拷贝数分别为7.87×10¹ copies/μL、1.19×10² copies/μL和5.99×103copies/μL,同一模板的3次重复试验的组内及组间变异系数均小于2%;用该方法检测92份临床样品,未检出ASFV,检出19份PRRSV阳性样品。结果表明,本研究建立了一种可快速鉴别检测ASFV及PRRSV的多重荧光定量PCR方法,较普通PCR敏感性高10³倍,可应用于ASFV和PR...     

PRRSV中和表位串联Fc分子的表达与免疫原性鉴定

为融合表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）中和表位和Fc分子,首先合成PRRSVGP3和GP5的串联B细胞中和表位与鼠Ig G1-Fc的m Fc-GP35-Bp基因片段,将其克隆到pFastBac载体上,构建重组质粒pFastBac-m Fc-GP35-Bp,经蓝白斑筛选出重组杆粒Bacmid-m Fc-GP35-Bp,并转染昆虫Sf9细胞,获得重组杆状病毒rBV-m Fc-GP35-Bp。通过Western-blot分析重组蛋白的反应原性,免疫小鼠后,通过间接ELISA检验其免疫原性,病毒中和试验检测中和抗体水平。结果显示,m Fc-GP35-Bp蛋白在昆虫Sf9细胞中获得表达,且可分泌至上清;用m Fc-GP35-Bp蛋白免疫小鼠后,ELISA测定抗体效价可达1∶100 000,三免后第4周仍可检测到较高抗体水平;中和抗体效价介于1∶40和1∶80之间。结果表明,表达的重组m Fc-GP35-Bp蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,可刺激机体产生中和抗体,与Fc分子融合表达延长了抗体在血清中存在的时间,本试验为PRRSV中和表位疫苗的研发奠定了基础。     

烧骨残片种属鉴定的研究

为了找出常见动物骨骼焚烧残片的种属鉴定方法,笔者对猪、羊,股骨及肱骨的断端,猪、羊、牛颅骨的残片(额顶部),焚烧后进行了观察及测量,并与人类股骨、肱骨及焚烧的颅骨残片进行了比较.结果发现,长骨滋养孔的位置,骨干骨壁厚度,以及颅骨厚度,颅缝形态及内板表面特征等方面,是鉴定骨骼残片种属的有价值的特征.根据对常见动物长骨及颅骨残片的现察及研究,提出了骨骼残片种属鉴定的方法.     

唐氏综合征胎儿缺陷出生医疗纠纷鉴定两例

缺陷出生医疗纠纷近几年引发热议。本文从法医学鉴定角度对两例涉及唐氏综合征胎儿缺陷出生案件进行分析,通过对诊疗过程中病史资料进行回顾性分析,探讨医疗机构存在的医疗过错、患者损害后果及其因果关系和原因力大小,以供司法鉴定实务参考,尽可能减少此类医疗损害的发生。     

新冠肺炎尸检:法医工作者面临的挑战与对策

新型冠状病毒肺炎(简称"新冠肺炎")病例于2019年12月出现,疫情在短时间内蔓延,已导致数千名患者死亡。目前我们对新冠肺炎的致病、转归、致死的病理学机制了解甚少,尽早开展新冠肺炎死亡病例的尸体检验尤为重要,这给法医工作者带来了挑战。新冠肺炎尸检应在可以维持负压的独立解剖室进行,检验人员应严格按照三级防护标准穿戴防护用具,注重环境、器械、耗材的消毒以及废液废弃物处理。解剖及检验过程应规范、谨慎,尽量减少切割操作,并避免体液流出或组织飞溅导致病毒传播。本文将就法医工作者面临新冠肺炎尸检的挑战与对策做一述评。     

低温及L-精氨酸对肉用鸡腹水综合征的影响

用高能日粮饲养400只1日龄AA肉用鸡,14日龄时保优淘弱,随机分为3组,其中100只为常温(20℃)对照组;150只为低温(11℃)试验组;100只为低温(11℃)及日粮添加10 g/kg L-精氨酸试验组.用单因子低温诱发肉用鸡腹水综合征,并于不同时间用红细胞压积、腹水心脏指数和腹水阳性率作为常规指标来判定肉用鸡腹水综合征a结果表明,低温组复制出肉鸡腹水综合征动物模型,其发病率为9.33%,对照组为3.00%,与低温组比较差异极显著(P＜0.01);L-精氨酸组腹水综合征发病率为3.00%,与低温组比较差异极显著(P＜0.01).     

PRRS病毒M蛋白在大肠埃希氏菌中的高效表达

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF6基因从pGEM-T-ORF6重组质粒中亚克隆到pET-5a原核表达载体上,成功构建重组表达质粒pET5-ORF6.将其转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导表达,其细菌裂解物经SDS-PAGE可检测到分子质量约为19 ku的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的26.8%,采用重组菌裂解物作为包被抗原进行ELISA检测,结果表明表达的蛋白显示特异性.     

猪生殖与呼吸综合征甘肃株的分离鉴定

在对甘肃省某规模化养猪场发生的繁殖障碍和仔猪大量死亡的疫情诊断中,首次在甘肃省分离到1株猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了初步鉴定.证实猪生殖与呼吸综合征(PRRS)已在甘肃省存在,并在个别猪场暴发流行.     

微电流对山羊骨痂钙含量与骨折愈合的作用

对试验组山羊人工制造非开放性全骨折后,用自制治疗仪以20μA电流治疗,至骨折愈合后取愈合处骨痂,测定骨痂钙含量.结果,试验组山羊骨痂钙含量明显高于对照组山羊,前者比后者骨折愈合时间提前12 d,即骨钙含量与骨愈合时间呈明显正相关.用偏振原子分光光度计法(AAS)测析骨折山羊骨痂钙含量显示,微电流能明显提高山羊骨痂钙含量,加快骨折愈合,证明骨痂钙含量与骨折愈合呈明显正相关.提示,用20 μA电流及其在骨折处形成的微电场,能提高钙离子浓度,并在其他微量元素配合下,通过一系列生化反应,刺激成骨细胞等产生多种生长因子,加快骨细胞增殖进程,缩短山羊骨折愈合时间.     

浅议兴奋谵妄综合征的法医学意义

兴奋谵妄综合征是国外学者提出的一种类似谵妄的病理症候,以行为怪异、脾气暴躁、富有攻击性等为突出特征,偶可见猝死,常见于行政、刑事约束、急救滥用毒品者或精神病患者的过程中,虽发生率不高,却极易引起社会关注,成为舆论焦点。笔者查阅了相关国外文献,对该综合征进行了简要论述,希望能够引起一线执法人员重视,为公安法医处置此类非正常死亡提供参考。