RyR2相关心脏性猝死的研究进展

雷诺定受体2(ryanodine receptor 2,RyR2)是心肌细胞肌浆网上主要的钙释放通道,主要参与心肌的兴奋收缩耦联过程,其基因突变及调控异常可导致心肌舒张期钙漏引起心律失常,甚至猝死。本文重点综述RyR2基因突变及调控异常引起心脏性猝死的机制,并对以后的研究提出建议,旨在为心脏性猝死的法医学诊断提供一种新的思路。     

Genetic variability of RyR2 and CASQ2 genes in an Asian population

We analyzed the coding regions of the cardiac calcium-handling genes, ryanodine receptor 2 (RyR2) and calsequestrin 2 (CASQ2) for genetic variants in a healthy Chinese population (n = 95) and in a cohort of 28 sudden unexplained death victims. Mutations in RyR2 and CASQ2 have been shown to alter calcium homeostasis during excitation–contraction coupling and predispose individuals to fatal cardiac arrhythmias. The genetic screening was accomplished by denaturing high-performance liquid chromatography and DNA sequencing methods. Genetic analysis revealed the following non-synonymous genetic variations: two reported RyR2 polymorphisms; 5654G>A (G1885E) and 5656G>A (G1886S), two reported CASQ2 polymorphisms; 196A>G (T66A) and 226G>A (V76M) and one novel CASQ2 mutation; 529G>C (E177Q). The functional significance of the novel CASQ2 mutation has not been evaluated and characterized. This study shows that multiple genetic variations of the RyR2 and CASQ2 genes exist in the two study populations. The inter-individual genetic variability may underlie the different susceptibility of individuals to developing ventricular tachycardia. The research results will be valuable for which future work involving clinical and forensic samples can be based upon to distinguish potential disease-associated mutations from common polymorphisms.     

大鼠急性心肌缺血后肌浆网RyR2 mRNA表达变化

目的 研究大鼠急性心肌缺血后心肌肌浆网兰尼碱受体蛋白2(ryanodine receptor 2,RyR2)mRNA表达的变化.方法 将SD大鼠分为正常对照组、心肌缺血组和缺血性猝死组.采用腹腔注射垂体后叶素的方法复制大鼠急性心肌缺血和猝死模型,对心肌进行半定量荧光RT-PCR检测,观察RyR2 mRNA表达水平的变化.结果 与正常对照组相比,不同时间和不同程度的急性心肌缺血后心肌肌浆网RyR2 mRNA表达均显著降低(P<0.05).结论 心肌缺血性损伤可诱导心肌钙调控蛋白RyR2 mRNA表达下调.     

DRD3基因对精神分裂症研究的法医学意义

阐明精神分裂症的病因和发病机制是医学面临的重要挑战之一,同时也是法医司法鉴定的重要内容之一.精神分裂症的多巴胺假说认为多巴胺能系统的失调是精神分裂症的病因,DRD3基因在脑中的区域性高表达以及其与众多精神疾病的阳性关联提示其在精神分裂症中的潜在重要性.本文综述了DRD3基因在精神分裂症的群体遗传学、动物模型和在人源细胞...     

基于SIRT1/PGC-1α通路探讨电针联合丰富康复训练对脑缺血大鼠氧化应激的影响

目的探讨电针联合丰富康复训练对脑缺血大鼠急性期神经损伤的保护机制。方法随机选取15只SD大鼠为假手术组,另将模型复制成功的大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠60只随机分为模型组、电针组、丰富康复训练组(康复组)和电针联合丰富康复训练组(联合组),每组15只。假手术组和模型组不进行干预,电针组和联合组于“百会”“大椎”进行电针治疗;康复组和联合组予以丰富环境与康复训练,每次30 min,每日1次,连续治疗3 d。观察大鼠缺血侧皮质区脑血流量、组织形态学、阳性细胞率的动态变化,检测缺血侧皮质中丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;RT-PCR检测沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)及半胱氨酸蛋白酶-9(cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)mRNA的表达水平。结果分组因素对缺血侧皮质中MDA、SOD水平和SIRT1、PGC-1α、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2 mRNA表达水平的主效应均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠脑血流量,SOD水平,SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),阳性细胞率,MDA水平,Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组SOD水平,SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA表达水平显著上升(P<0.05),MDA水平和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);联合组与电针组、康复组比较,上述各指标表达水平均有统计学意义(P<0.05);电针联合丰富康复训练对缺血侧皮质MDA、SOD水平和SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平的影响具有交互作用(P<0.05),对Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2 mRNA表达水平的影响无交互作用(P>0.05)。结论电针联合丰富康复训练可通过调控SIRT1/PGC-1α通路,提高抗氧化能力,改善神经细胞损伤,发挥神经保护作用。     

用于检测盐酸克伦特罗残留的免疫传感器感受器部件的研制

为研制用于检测农产品中盐酸克伦特罗残留的免疫传感器的分子识别元件———感受器 ,用二醋酸纤维素作为载体支架结构 ,戊二醛作为交联剂 ,己二胺作为制孔剂 ,对制备载体膜的最佳方案进行了筛选 ,制备出了符合标准的载体膜。而后用效价为 1∶4 0 0的抗盐酸克伦特罗抗体包被膜与酶标抗原偶联 ,在测定体系中检测过氧化氢的减少量 ,以衡量感受器部件的灵敏度 ,并用标准品测定其最低检测限 ,同时设质控膜。结果表明 ,质控膜和测定膜的电流变化值差异显著 (P <0 .0 5 ) ,感受器部件反应灵敏 ,最低检测限达 0 .3μg/L。     

pIRES2-EGFP-LR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

为探讨层黏蛋白受体的生理功能及其在疾病发生、发展过程中的作用,以培养的SD大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层黏蛋白受体基因.将其克隆到pMD18-T载体中,经酶切纯化后再将其亚克隆到带有加强型绿色荧光蛋白报告基因的pIRES2-EGFP真核表达栽体中,对重组质粒pIRES2-EGFP-LR进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染法将重组质粒转染到293T细胞,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其表达情况.结果表明,真核表达载体plRES2-EGFP-LR构建成功并可以在293T细胞中表达.该表达载体可以作为研究层黏蛋白受体生理功能的重要工具.     

电针对功能性消化不良大鼠十二指肠CRHR2、NLRP6表达的影响

目的 观察电针对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）大鼠十二指肠促肾上腺皮质激素释放激素受体2（corticotropin-releasing hormone receptor 2,CRHR2）及NOD样受体家族pyrin结构域蛋白6（NOD-like receptor family pyrin domain containing 6,NLRP6）表达水平的影响。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组10只。模型组和电针组均选用多因素干预法复制FD大鼠模型,空白组进行常规饲养。模型复制结束后,电针组大鼠电针“印堂”“内关”“足三里”,每次30 min,每日1次,连续14 d。观察各组大鼠干预前后的一般状态及体质量变化;干预结束后,采用半固体糊灌胃法检测各组大鼠胃排空率及小肠推进率;苏木精—伊红染色法观察大鼠胃窦组织形态变化;蛋白免疫印迹法检测大鼠十二指肠CRHR2、NLRP6蛋白表达水平;阿利新蓝染色法观察大鼠十二指肠形态变化。结果 与空白组比较,模型组大鼠精神欠佳,体质量、胃排空率及小肠推进率明显降低(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠活泼好动,体质量、胃排空率及小肠推进率明显增加(P<0.05)。模型组大鼠胃窦黏膜排列疏松,有轻度水肿,存在少量淋巴细胞,十二指肠绒毛上皮细胞间隙增宽,肠绒毛结构破碎,可见散在分布的上皮细胞;电针组大鼠胃窦组织结构完整,固有层排列紧密,无明显炎症反应及病理改变,十二指肠绒毛上皮细胞间隙清晰,排列紧密,组织结构完整。与空白组比较,模型组大鼠十二指肠CRHR2、NLRP6蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,电针组CRHR2、NLRP6蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论 电针可改善FD大鼠消化不良症状,提高FD大鼠胃肠动力,降低FD大鼠十二指肠黏膜通透性,减轻大鼠胃肠炎症反应,其机制可能与提升十二指肠CRHR2、NLRP6蛋白表达水平有关。     

平喘宁调节TRPM8通道相关蛋白干预寒性哮喘大鼠气道炎症的机制研究

目的 探究冷刺激对哮喘大鼠气道炎症的影响以及平喘宁对寒性哮喘大鼠气道炎症的治疗作用及机制。方法 将72只大鼠随机分成正常组,卵清蛋白（ovalbumin,OVA）组,模型组（OVA+冷刺激）,平喘宁低、中、高剂量组,桂龙咳喘宁组以及地塞米松组,每组9只。除正常组外,其余各组大鼠采用OVA或OVA联合冷刺激建立哮喘及寒性哮喘大鼠模型,模型复制完成后,分别给予生理盐水及对应药液灌胃21 d。观察记录各组大鼠的一般行为学情况;采用HE染色检测大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin,TSLP）水平;Western blot法检测瞬时受体电位美拉塔素8（transient receptor potential melastatin subtype 8,TRPM8）、粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（granule macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF）、TSLP蛋白表达水平。结果 与正常组比较,OVA组、模型组大鼠均出现呼吸急促、腹部收缩明显等行为学表现;病理结果显示支气管管壁增厚、肺组织及支气管周围可见大量炎症细胞浸润;BALF中IL-1β、IL-6、TSLP水平显著升高（P＜0.05）;肺组织TRPM8、GM-CSF、TSLP蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,平喘宁可改善大鼠的行为学表现,减轻支气管管壁增厚、肺组织及支气管周围炎症细胞浸润,显著降低大鼠BALF中IL-1β、IL-6、TSLP水平（P＜0.05）,显著降低肺组织TRPM8、GM-CSF、TSLP蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 冷刺激会加重哮喘大鼠气道炎症反应,平喘宁可能通过调控寒性哮喘大鼠TRPM8及相关蛋白表达水平,减轻寒性哮喘大鼠气道炎症反应,进而达到治疗哮喘的作用。     

电针对ApoE-/-小鼠肝脏PPARα与TNF-α蛋白表达的影响

目的 探讨电针对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠肝脏过氧化物酶体增殖剂激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha, PPARα)、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）蛋白表达的影响。方法 将30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、药物组及电针组,每组10只。采用高脂饲料喂养14周的方法复制高脂血症模型。电针组小鼠接受单侧神门、内关、足三里、三阴交电针,药物组小鼠每日接受40 mg/kg辛伐他汀灌胃。免疫组织化学法检测肝脏中PPARα、TNF-α的表达,采用Western blot检测肝脏PPARα的蛋白表达。结果 电针组小鼠肝脏中PPARα的蛋白表达水平高于模型组,但差异无统计学意义（P>0.05）,肝脏TNF-α表达水平显著低于模型组（P<0.05）。与模型组比较,电针组小鼠肝细胞内小颗粒脂滴减少,肝细胞凋亡和坏死减少,且肝细胞保存相对完整。结论 电针通过抑制炎性因子的表达而减少脂质沉积,治疗动脉硬化。