猪主要免疫抑制性疾病四重PCR检测方法的建立与应用

为建立一种可以快速检测猪巨细胞病毒(PCMV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细环病毒(TTV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的四重PCR检测方法,本研究设计合成了4对特异性扩增引物,在系统性地优化反应体系、反应条件的基础上,分别对其特异性和敏感性进行验证,建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法,并对1...     

腰椎骨折内固定术后自发脊髓前动脉综合征医疗损害鉴定1例

<正>1案例1.1简要案情向某,男,47岁,因“坠落伤致腰部疼痛、功能障碍4 d”就诊于某市人民医院。入院时四肢肌力、肌张力正常,诊断为“L2椎体爆裂骨折”,行L1～L3经皮有限切开椎弓根螺钉内固定术,术后约11 h出现右侧胸背部剧烈疼痛,躯体左侧乳头平面以下痛觉、温度觉消失,但触觉、本体感觉存在,左下肢肌力减退。     

长期卧床致横纹肌溶解综合征死亡1例

<正>1案例1.1简要案情某男,36岁,某年4月23日入监体检,结果显示血压15.9/9.5 k Pa(119/71 mm Hg),血、尿各生化指标基本正常,除彩色超声检查提示肝内多发占位性病变外,其余器官均未见明显异常。该男入监后长期卧床,拒绝下床活动。同年8月3日、9月7日分别送院治疗,后于9月10日经抢救无效宣布临床死亡。     

猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的安全性及效力试验

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒株能在Marc-145细胞上正常增殖,经克隆纯化后测得其毒价为107.41TCID50/mL.克隆株对乳鼠、低日龄乳猪和妊娠母猪具有很高的安全性;3日龄乳猪用10-1、10-2稀释的病毒液接种后,能抵御105.8TCID50/mL的PRRS强毒攻击;后备母猪在接种克隆株病毒后于妊娠85 d用PRRS强毒攻击,结果不发生流产;妊娠母猪接种克隆株病毒原液后,足月产仔时其后代无死产、弱仔、干尸化现象.临床应用PRRS弱毒苗12万头份,证明克隆株弱毒苗在控制仔猪呼吸道症状和母猪繁殖障碍方面安全、有效.     

针刺配合刮痧治疗颈性眩晕43例

颈性眩晕大多是由颈椎病引起的继发性眩晕,属祖国医学"眩晕”范畴,药物治疗往往难以奏效.笔者近年来采用针刺配合刮痧治疗该病,获得满意疗效,现报道如下.     

复杂颅颈交界区畸形者非典型挥鞭样损伤1例

1 案 例 1.1 简要案情和病史摘要 姜某,女,56岁,因"车祸伤致颈部疼痛伴四肢感觉活动障碍1 h"于2018年8月23日入院.1 h前患者骑电瓶车追尾前方汽车,当即感颈部剧烈疼痛并四肢无力.患者既往有间歇性头晕、四肢乏力史.专科检查:颈6平面以下感觉减退,胸1平面以下感觉消失,鞍区感觉消失;颈部活动明显受限,双上...     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展

简要介绍了国内外猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗、灭活疫苗和基因工程疫苗的研究进展,分析了猪繁殖与呼吸综合征疫苗研制中存在的问题和未来发展趋势,以便兽医药科技工作者全面了解猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研发及使用现状,进而指导临床应用.     

减蛋综合征病毒五邻体基因的原核表达及其表达蛋白的部分活性分析

通过PCR方法扩增得到减蛋综合征病毒(EDSV)结构蛋白五邻体(Penton)基因,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)的多克隆位点,构建了原核表达载体pET-30a-Penton,将其转化到感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了54.0ku的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗血清,通过血凝试验、Western-blot、血凝抑制试验、细胞中和试验进行分析,表明该融合蛋白不能引起鸡红细胞凝集,无血凝活性;可与EDSV阳性血清发生特异性反应,能够诱导机体产生中和抗体,具有良好的抗原性。     

PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR鉴别方法的建立

根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法.用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性.应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、14、21 d分别采集全血,检测结果均为阳性.证实,本试验所建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株.     

猪生殖与呼吸综合征病毒△Gp5/M/N串联基因的克隆及原核表达

采用RT-PCR方法从猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株VR2332中扩增△Gp5、M和N基因片段,通过重组PCR方法得到串联基因△Gp5/M/N,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)pLysS,筛选表达PRRSV pET-△Gp5/M/N蛋白的菌株.经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析和western-blotting.结果表明,PRRSV pET-△Gp5/M/N蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式表达,纯化后的蛋白可与PRRSV阳性血清发生特异性反应.证明原核表达系统表达的PRRSV pET-AGp5/M/N蛋白具有良好的反应原性.