牦牛传染性鼻气管炎病毒85-Y株回归本动物试验

1985年12月我们从病牦牛的眼、鼻分泌物中分离到一株有致细胞病变能力的病毒,经血清学鉴定,初步认定为牛传染性鼻气管炎(IBR)病毒,并定名为85-Y毒株。为明确IBR病毒85-Y毒株对牦牛的致病性,进行了回归本动物试验。 材料与方法 (一)细胞 按常规方法制备犊牛肾(BK)继代细胞供种毒传代、毒价测定、病毒回收与鉴定。 (二)种毒 取85-Y毒株第6代冻干毒(-20℃下保存150天,毒价10~5TCID_(50)/ml)按常规方法在BK细胞上连续传4代作为种毒,经-20℃～37℃冻融3次后用于接种牦牛,同     

应用细胞培养技术测定伪狂犬病毒对不同消毒药的敏感性

有关资料介绍,伪狂犬病病毒(PrV)可适应于兔肾、鸡胚和猪肾等细胞,并致细胞发生特征性病变。据此,我们应用细胞培养技术对PrV对某些消毒药的敏感性进行了评价。同时对消毒药本身对细胞的毒性做了初步探索。 (一)试验材料: 1.毒株:系用我院余永建等(1984)分离的PrV Ncr-1株的第4代细胞毒,TCTD_(60)为10~(-7)。 2.单层细胞:应用1～5日龄乳兔原代肾细胞(BRK)。按常规法制备。 3.生长液:用日本进口的199粉,配成9.8g/1000ml,添加5～10％犊牛血清及双抗各100iu/ml制成。维持液为含2.0％犊牛血清的199液。     

猪传染性水泡病传代细胞甲醛灭能苗的研究

一、材料和方法 (一)病毒(强毒):本强毒是1974年采自漯河冷冻厂病猪水泡皮,磨碎接种乳鼠,用鼠毒五代接种传代细胞。细胞病变明显,且有规律。 (二)供生产病毒的细胞培养:我们的试验都是用IB-RS-2系猪肾传代细胞进行的。引自农林部兽医药品监察所。 1.培养液:以Hanks液加0.5％乳蛋白水解物为基础液,另加N_(16)液8％、牛血清10％、青霉素每毫升含100单位,链霉索含100微克,用灭菌碳酸氢钠调整pH为7.0左右。维持液含牛血清3％,pH为7.4左右,其他相同。     

绵羊睾丸原代细胞培养及接种羊痘弱毒后的病变观察

研究了在相同培养条件下不同培养液、不同血清和不同细胞密度对绵羊睾丸细胞生长的影响 ,并对该细胞接种羊痘弱毒后的病变情况进行了观察。结果 ,3种培养液对绵羊睾丸细胞生长的支持作用表现为MEM液 >199液 >乳汉液 ,但差异不显著 ;用犊牛血清的最适细胞密度为8.0× 10 5～ 1.0× 10 6 /mL ,用成年牛血清的最适细胞密度为 1.0× 10 6 /mL ,用绵羊血清的最适细胞密度为 8.0× 10 5/mL ;原代培养生长良好的细胞接种羊痘弱毒后出现了明显的细胞病变     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗免疫程序研究

作者用猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗(以下简称猪瘟犊睾细胞苗)750个对兔感染量(以下简称感染量),在配种前40天至配种后45天内免疫母猪,所产亲代仔猪在20～28日龄时猪瘟间接血凝滴度(IHA)4~×( )占10/32、8~×占11/32、16~×占10/32、32~×占1/32;41～43日龄时,IHA滴度4~×占11/43、8~×占21/43、16~×占9/43、32~×占2/43;在55～58日龄时,IHA滴度4~×占9/33、8~×占17/33、16~×占7/33。用600、760、900、1500个感染量分别给20～28日龄、41～43日龄、55～58日龄仔猪实施免疫,免疫后6～8个月时,监测其抗体水平,结果表明:IHA滴度16~×以上者达100％。750个感染量免疫20～28日龄仔猪组,注苗后持续6个月,IHA滴度32~×以上者达100％;8个月时32~×以上者达87.5％,16~×占12.5％。用猪瘟石门系强毒攻毒,获100％保护。试验首次发现:用猪瘟犊睾细胞苗免疫母猪所产仔猪母源抗体明显低于猪瘟乳兔苗免疫母猪所产仔猪的母源抗体。对猪瘟犊睾细胞苗免疫母猪所产亲代仔猪在20～28日龄用该苗一头剂(750个感染量)进行免疫,8个月之内能抵抗猪瘟感染或强毒攻击,突破了以往认为仔猪用猪瘟乳兔苗免疫应在45日龄以后的常规,为猪瘟犊睾细胞苗的免疫提供了新的免疫程序。     

猪传染性水泡病陕西Ⅰ系毒全鼠灭能苗的试验

1974年7月,我们从陕西某肉联厂分离出一株猪水泡病野毒,经适应乳鼠继代和理化性能测定,证明该毒株性能较好,并定名为陕西Ⅱ系毒。之后。我们用其制作了三批全鼠灭能苗。并以新鲜苗及在4℃环境下经2个月的保存苗接种猪,进行了安全性和免疫性能的观察试验。 (一)疫苗种毒:种毒系猪水泡病陕西Ⅱ系毒ME_5,用两日龄乳鼠测得毒价为10~(-8)。 (二)疫苗制造方法:     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞旋转培养制造冻干苗的试验

为了克服用仔猪肾细胞生产猪瘟弱毒潜在致病的危险性,弥补猪瘟兔化弱毒乳兔苗大量剖杀动物成本高,不易控制污染的缺点,1981年11月我们开始把初生犊牛肾细胞用于猪瘟兔化弱毒培养试验,结果证明,猪瘟兔化弱毒可以在犊牛肾细胞上连续增值,猪兔效力平行试验效果良好,但是细胞产毒不稳定。1982年11月我们又开展了初生犊宇睾丸细胞培养猪瘟弱毒的试验,通过2年研究,解决了影响毒价的关键问题。于1984年11月,转入中试验阶段。     

液氮冻存弓形虫的试验观察

我们参照有关资料,探讨观察了长期保存弓形虫的方法,从1983～1986年将弓形虫速殖子用液氮(-196℃)冻存27个月(824天)之久,复苏后其活力和致病性均未改变。收到长期冻存的效果,改变了过去长期通过小鼠继代的繁琐程序,为科研工作提供了方便。 (一)材料和方法 1.虫种:为我们从甘肃省猪体分离出的弓形虫株(GJP株)。 2.冷冻保护剂:RPMI 1640溶液70％,小牛血清20％,3％谷氨酰胺溶液1％,二甲基亚砜(DMSO)10％。前三种溶液分别无菌过滤,临用前按比例混合,并加入二甲基亚砜溶液,用碳酸氢钠溶液调pH7.2。     

应用醛化鹅红细胞进行乙脑病毒HA和HI试验

血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验,是进行乙脑病毒(JEV)鉴定、临床诊断和流行病学调查的两种主要方法。以前使用新鲜红细胞,因其保存期短,需要不断采集进行配制,多给实验带来不便,又因来源于不同个体的红细胞敏感性不同,影响了试验结果的准确性。在乙脑诊断中,笔者采用了戊二醛化鹅红细胞,克服了上述缺点,获得满意结果。 (一)材料与方法 1.JEV血凝素:用JEV猪株SR-83毒,脑内接种5～7日龄乳鼠,以碱性溶液(pH9.0硼酸缓冲液)提取法从发病鼠脑中提取血凝素,置4℃冰箱保存备用。 2.鹅红细胞: (1)新鲜鹅红细胞:采自本研究室动物房饲养的健康鹅,以阿氏液抗凝,4℃保存(一般不超过10天)。用时以生理盐水洗涤3次,以pH5.3的磷酸盐缓冲液(PBS)配成     

带毒传代工艺在狂犬病细胞苗生产中的应用

狂犬病细胞苗的传统生产方法是取长成“ ”的BHK21 细胞单层,弃去生长液(血清含量 100mL/L),按1.5万mL细胞培养瓶每瓶 40 mL的量接毒旋转,使毒液浸润整个细胞面,37 ℃旋转吸附40~ 60 min,加入 2 000 mL 维持液(含血清 30mL/L),37℃旋转培养48 h后,调pH至7.2~7.4,继续培养至96~120 h,冻毒,收获细胞培养物。传统方法的生产成本高,劳动强度大,种毒使用量大。2004年笔者采用带毒传代工艺生产狂犬病细胞苗,效果较为满意。　　材料　毒种为中国兽医药品监察所提供的狂犬病病毒ERA 株适应株第 1 代毒,经本厂传至第 4代,经检验符合生产…     

应用微量中和试验检测进口奶牛血清中牛流行热病毒抗体

我国已将牛流行热(Bovine Ephemeral Fever,BEF)列为必检的一种进口动物病。但目前对本病尚无统一的检测方法。作者采用微量血清中和试验,对由广州口岸入境的来自澳大利亚等5个国家的7批奶牛中的部分牛只进行了BEF血清学检测。 (一)材料和方法 1.种毒:牛流行热标准毒株BB7721(由澳大利亚农业部兽医研究所ATTWOOD实验室提供),在本所经Vero传代细胞系(美国8703)连续传代两次,常规方法测毒后,用Karber法计算其毒价作为10~(4.1)TCID_(50)/0.05ml,保存于-70℃。以100TCID_(50)作为本次试验用抗原。细胞培养用的生长液为Eagle’sMEM(美国CAT NO 410—1500),其中加5～10％经56℃灭活30分钟的犊牛血清,并加青霉素,链霉素各100单位/ml配制而成(pH7.2±0.1);维持液除减少血清用量(加1～2％)外,其余均同生长培养液。     

ClassⅠ新城疫病毒强毒株主要结构蛋白特异性抗体的研制

以新城疫病毒(NDV)ClassⅠ强毒分离株9a5b尿囊液、原核表达的NP、P、M、HN、F五种蛋白为免疫原,接种6周龄BALB/c小鼠制备抗体,用血凝抑制试验(HI)、间接免疫荧光试验(IFA)、细胞中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western-blot方法共同检测所获得的各类抗体。结果显示,成功制备获得了NDV各结构蛋白多抗及12株NDV特异性单抗。免疫特性鉴定结果表明,在获得的12株单抗中,3H7和3H9株单抗为抗ClassⅠHN特异性单抗,仅具有IFA和HI效价,而2A8株单抗却无HI效价;其他单抗均与ClassⅡ毒株存在交叉反应。     

温度对猪传染性水泡病病毒的杀灭试验

利用不同温度的加温方法,为探求猪水泡病病毒的热致死点,我们进行了本项试验。将试验情况报告如下。 一、材料和方法 (一)试验材料 1.第一次试验:将猪水泡病病毒株湘3号F_(4～6)鼠毒(系第四代、第五代和第六代鼠毒之混合物,每代取死鼠2～3只)做成1:10的无菌浸出液,接种乳鼠。 2.第二次试验:以湘3号毒株F_(5～7)鼠毒(系第五代、第六代和第七代鼠毒之混合物,每代取死鼠2～3只)做成1:20的无菌浸出液,接种乳鼠。     

猪传染性水泡病免疫血清的研制

一、种毒 制造猪水泡病血清抗原的种毒对血清质量有很大关系,种毒毒力强,才能获得较好的免疫性能。我们所使用的种毒系我厂猪水泡病爆发高潮中,采取数头典型病状猪之水泡皮材料,经过乳鼠继代培育而成。通过近几年来实践证明,种毒毒力强(毒价在10~(-9)～10~(-10)),抗原性能好,乳鼠反应规律而稳定,完全合乎制造血清抗原的种毒要求和标准。     

貂传染性肠炎的研究——细胞培养灭活疫苗研制

利用NLFK细胞增殖培养MEV-S_1株病毒,无论静置培养或转瓶培养均可在接毒后72～96小时产生50％～75％CPE时收毒,对50％CPE的培养瓶在换液后继续培养至120～148小时时可收2次毒。然而,转瓶培养毒液的HA价要比静置培养的高。利用NLFK细胞增殖的MEV-S_1株毒制备的BEI灭活苗,对动物安全,免疫水貂30～60天后血清HI抗体滴度增加1～8个滴度,油乳剂苗增长的幅度更大,最高HI抗体价可达2~(10)以上。同时对NLFK细胞在MEV-S_1株增殖培养上的优点作了评论。     

鸡毒霉形体弱毒疫苗的研究——鸡毒霉形体弱毒F株免疫效力测定

以点眼的方法,用鸡毒霉形体F株的培养物对1、3和20日龄鸡进行了免疫接种试验,经过致病性株R株的攻击,根据气囊损伤保护率计算,免疫接种鸡可获得85％以上的保护,在攻击后14天内,免疫接种鸡比对照鸡体重增加明显。免疫力持续至少7个半月以上。F株的冻干培养物仍保持着良好的免疫作用。试验结果表明:鸡毒霉形体F株是个优良的疫苗株,可用于生产鸡毒霉形体活疫苗。     

奶牛隐性型乳房炎乳汁某些成分病理变化初步分析

作者对某奶牛场三个队74头临床健康奶牛泌乳期乳汁(前乳)进行了细胞计数、pH、氯化物以及电导值的测定。282个乳区的前乳样品经加里福尼亚乳房炎试验(California Mastitis Test简称CMT),确定为乳房炎阴性(包括可疑反应)者204个乳区(占72.3％),乳房炎阳性乳区78个(占27.7％),并依据CMT反应等级标准确定为健康或乳房炎乳区。上述各项指标检查表明,健康(CMT阴性)乳区的乳汁细胞数为90000/毫升,pH为6.6,氯化物为0.19克/100毫升,电导值为0.41～0.42×10~4μs厘米。隐性型乳房炎(CMT阳性)乳区乳汁细胞数在515000/毫升以上,pH为6.70～7.02,氯化物为0.21～0.30克/100毫升,电导值为0.44～0.53 ×10~4μs/厘米。健康乳区与隐性型乳房炎乳区乳汁测定值比较结果差异显著。本文报道的意义在于为乳房炎的进一步研究提供基础资料。     

日本牛爆发异常分娩病(Chuzan病毒病)

(一)流行情况 据日本农林水产省1985年11月至1986年3月调查,全国29个县(都、道、府)均有发生。其中鹿儿岛、熊本、大分、宫崎及岩手等县发病严重;鹿儿岛发病1644头(其中乳用牛11头,肉用牛1633头),熊本发病109头(其中乳用牛15头,肉用牛94头),大分发病150头(其中乳用牛17头,肉用牛133头),宫崎发病222头(其中乳用牛15头,肉用牛207头)。本病严重影响着养牛业的发展。 (二)病原调查 自1985年以来,日本家畜卫生试验场九州分场用HmLu细胞从病牛血液中分离到19株病毒,从牛库蠓中分离到2株病毒,从鸡库蠓中分离到4株病毒。以其中从犊牛分离到的2株病毒及从牛舍捕获的牛库蠓、鸡库蠓分离到的3株病毒进行了中和试验测定。结果:从犊牛分离到的2株病毒及从牛库蠓分离到的2株病毒,中和了未摄取初乳病犊体内的血清抗体(24例),其血清中和抗体价在8～256倍     

猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的安全性及效力试验

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒株能在Marc-145细胞上正常增殖,经克隆纯化后测得其毒价为107.41TCID50/mL.克隆株对乳鼠、低日龄乳猪和妊娠母猪具有很高的安全性;3日龄乳猪用10-1、10-2稀释的病毒液接种后,能抵御105.8TCID50/mL的PRRS强毒攻击;后备母猪在接种克隆株病毒后于妊娠85 d用PRRS强毒攻击,结果不发生流产;妊娠母猪接种克隆株病毒原液后,足月产仔时其后代无死产、弱仔、干尸化现象.临床应用PRRS弱毒苗12万头份,证明克隆株弱毒苗在控制仔猪呼吸道症状和母猪繁殖障碍方面安全、有效.     

猪传染性水泡病组织培养弱毒疫苗的研究

材料与方法 (一)毒株: 1.口岸毒(简称“C”),采自江苏省口岸镇生猪转运站病猪水泡皮,在猪体传13代,将13代发病猪的肌肉毒通过乳鼠,取第四代乳鼠的肌肉、肝、脾磨碎作种毒。 2.安徽毒(简称“A”),系安徽省送检的病猪水泡液及水泡皮,通过乳鼠1代,取死亡乳鼠肌肉、肝、脾作种毒。 3.吉林毒(简称“J”),系吉林省送检的病猪水泡皮。 4.口岸乳鼠毒,取口岸系乳鼠17代的肌肉、肝、脾磨碎作种毒。