苦豆籽对鸡球虫致病作用的影响

苦豆籽具有一定的杀虫作用,当饲料或饮水中苦豆籽的浓度达10.0 g/kg、10.0 mL/L时鸡体内的球虫卵囊数明显减少;但苦豆籽的毒性作用也较大,将其混于饲料或饮水中饮喂鸡即可导致鸡的生长发育迟滞,体质下降,对球虫的易感性增高,从而使鸡较早地出现各种症状.由于毒性作用对机体的影响较大,所以苦豆籽不宜在饲料或饮水中添加来预防鸡球虫病.     

厚垣普可尼亚菌胞外蛋白酶的诱导及发酵液生化性质的研究

为探讨不同培养基对厚垣普可尼亚菌胞外蛋白质的诱导效果及相应发酵液的生化性质,以更好地利用该菌对家畜寄生性线虫进行生物防治,在本实验室前期研究的基础上,设计使用3种常用真菌液体培养基对厚垣普可尼亚菌进行发酵培养,并检测发酵液的蛋白质质量浓度、蛋白酶活性,磷酸酶活性及杀虫效力等,筛选出适合该菌液体培养的最佳培养基。结果表明,在3组培养基中,LMZ培养基组的蛋白质种类最丰富,蛋白质质量浓度(2 320 mg/L±10.00 mg/L)、蛋白酶活性(2.95 U/m L±0.23 U/m L)与磷酸酶活性[1.546 U/100 m L±0.035 U/100 m L(酸性磷酸酶)和0.516 U/100 m L±0.069 U/100 m L(碱性磷酸酶)]都较高,对线虫的杀虫率也是3种培养基中最高的,可达60%,与其他各组间差异极显著(P0.01)。因此从生物防治的角度,在试验的3种培养基中,以LMZ液体培养基为最佳选择。这一发现可为今后对厚垣普可尼亚菌液体发酵培养、杀虫物质的产生以及作用机制进行深入探究提供重要基础资料。     

印楝油对兔疥螨幼虫的体外杀螨活性

将兔疥螨幼虫置于聚苯乙烯小平皿中,分别加入不同浓度的印楝油液体石蜡溶液,以天然除虫菊酯和阿维菌素为阳性对照,蒸馏水和液体石蜡为阴性对照,观察记录不同时间段的螨虫死亡数,以死亡率、半数致死时间(LT50)和半数致死浓度(LC50)为指标评价了印楝油对兔疥螨幼虫的离体杀螨活性。结果显示,未稀释的印楝油能在25 min内杀死所有幼螨,其杀螨活性显著强于500 g/L的天然除虫菊酯(825 min,P<0.01),而与25 g/L的阿维菌素无显著差异(19 min,P>0.05);500、250和125 mL/L印楝油对兔疥螨幼虫的LT50分别为1、2、5 h;24 h的LC50和LC95分别为2.908和12.018 mL/L。结果证实,印楝油对兔疥螨幼虫具有较好的离体杀螨活性。     

MTT比色分析法检测山羊白细胞介素-2方法的建立

以伴刀豆蛋白A(ConA)活化的山羊外周血单核细胞作为应答细胞,建立了检测山羊白细胞介素-2(IL-2)的MTT比色分析法.结果表明,以3 μg/mL的ConA浓度刺激,经过36 h活化所得的应答细胞活性最好;MTT的用量及作用时间分别以20μL(50 μg/μL)及4 h为最佳;IL-2与活化细胞的作用时间以18 h为最适.     

山羊实验性瘤胃酸中毒血气动态变化的研究

本实验对14头山羊投服蔗糖,复制实验性瘤胃酸中毒,分析了山羊实验性瘤胃酸中毒时血液pH、PO_2、PCO_2、HCO_3~-以及Hb、PCV的动态变化,同时观察了临症表现。结果表明,健康山羊颈静脉血液pH值为7.42、PO_2为46.94mmHg,PCO_2为50.36mmHg、HCO_3~-含量为31.65mEq/L,Hb为98g/L,PCV为0.425L/L;按每公斤体重15g剂量投服蔗糖后约20小时,pH值和HCO_3~-含量分别下降为7.11和16.31mEq/L,Hb和PCV分别上升为144g/L和0.624L/L,以后,pH值和HCO_3~-含量逐步回升,Hb和PCV逐步下降,而PO_2和PCO_2的变化规律不明显。本实验为进一步研究反刍动物瘤胃酸中毒提供了实验模型,并对瘤胃酸中毒的发生机理和防治措施进行了讨论。     

山羊组织中硝唑尼特代谢产物的液相色谱-串联质谱检测

以替唑尼特为检测对象,建立了一种检测山羊组织中替唑尼特残留的液相色谱-串联质谱分析方法。样品经正己烷脱脂、乙腈提取,收集提取液于60℃水浴氮气吹干,乙腈溶解,经0.22μm微孔滤膜过滤后,采用多反应监测模式进行分析。结果显示,对于肝样品,替唑尼特在0.25～25μg/kg范围内线性关系良好(r20.99),检测限和定量限分别为0.1μg/kg和0.25μg/kg;对于肾、肌肉、脂肪样品,替唑尼特在0.1～25μg/kg范围内线性关系良好(r20.99),检测限和定量限依次为0.05μg/kg,0.1μg/kg;0.025μg/kg,0.05μg/kg;0.025μg/kg,0.05μg/kg。结果表明,该方法操作简单,灵敏度高,适用于山羊组织中替唑尼特残留量的检测。     

过硫酸氢钾复合粉的杀菌效果试验

为考察过硫酸氢钾复合粉的体外杀菌活性及有机物、pH值、温度对其杀菌效果的影响,采用悬液定量杀菌试验进行了实验室观察。结果显示,0.312 5～2.5 g/L的过硫酸氢钾复合粉消毒液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、多杀性巴氏杆菌和猪链球菌均有杀灭作用,2.5 g/L过硫酸氢钾复合粉消毒液与试验菌作用5 min,杀菌率均为100%。能量试验结果显示,过硫酸氢钾复合粉对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低合格浓度为5 g/L,对多杀性巴氏杆菌和猪链球菌的最低合格浓度为1 g/L;较高温度和酸性环境可以显著增强过硫酸氢钾复合粉的杀菌效果,而高含量的小牛血清可以在一定程度上抑制消毒剂的杀菌活性。结果表明,过硫酸氢钾复合粉具有极强的杀菌效果,提高过硫酸氢钾复合粉的浓度和作用温度、延长作用时间或降低pH值可以增强其杀菌作用。     

菌威克对鸡大肠杆菌病的预防和治疗试验

用硫酸庆大霉素和硫酸黏杆菌素混合制剂菌威克对试验性鸡大肠杆菌病进行了预防与治疗试验。硫酸庆大霉素和硫酸黏杆菌素对鸡大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度分别为 7.5× 10 - 4mg/L和 5 .9× 10 - 5mg/L ,最小杀菌浓度分别为 1.5× 10 - 3mg/L和 1.2× 10 - 4mg/L。在成本相近的情况下 ,以杀菌效果最佳比例配制的菌威克制剂的疗效要高于单独使用任何一种药物。预防与治疗试验结果表明 ,大剂量与中剂量菌威克对鸡大肠杆菌病的预防与治疗效果高于低剂量菌威克与单独应用硫酸庆大霉素和硫酸黏杆菌素的效果 (P <0 .0 5 )。     

捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans胞外蛋白质的产生及其杀虫作用的研究

将捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans接入含有不同诱导物的LMZ培养基和枸橼酸液体培养基中,然后进行为期6d的培养并收集发酵液,进而测定其中蛋白质的质量浓度和蛋白酶活性及磷酸酶活性,并用发酵液进行杀虫试验。结果显示,动物寄生性线虫诱导的枸橼酸培养基发酵液中蛋白质的质量浓度最高可达381.4mg/mL,蛋白酶和磷酸酶比活性最高,分别为9.48U/mL±0.03U/mL和38.30U/L±0.04U/L,对线虫的致死率为50.11%±11.8%,均明显高于相应的对照组;同时发现,D.flagrans发酵液对蝇蛆的致死率最高,可达40.56%±0.13%。结果表明,在D.flagrans发酵液中含有杀虫物质。研究结果为以后研究捕食线虫性真菌的化学杀虫机理提供了重要依据。     

三种不同寄生部位隐孢子虫卵囊体外脱囊条件的比较

为研究不同寄生宿主及不同寄生部位隐孢子虫的生物学特性,以安氏隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫和人隐孢子虫为研究对象,分别选择在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中水浴脱囊的方法比较上述4种隐孢子虫卵囊脱囊率,并进一步比较贝氏隐孢子虫卵囊在不同温度及脱囊液中的脱囊率。结果显示,胃腺寄生类群安氏隐孢子虫在37℃PBS中即有较高脱囊率,与在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中相比差异不显著(P0.05)。肠道寄生类群微小隐孢子虫和人隐孢子虫在37℃PBS中脱囊率极低,而在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中脱囊率显著升高(P0.01)。贝氏隐孢子虫在37℃PBS中有一定脱囊率,与在37℃7.5g/L胆酸盐溶液中的脱囊率接近(P0.05),提高脱囊温度至40℃,则脱囊率显著升高,并且在PBS和7.5g/L胆酸盐溶液中脱囊率差异显著(P0.05),但增加胆酸盐浓度不能提高其脱囊率(P0.05)。结果表明,胃腺寄生类群在合适温度即有较高脱囊率,而肠道寄生类群则不仅需要合适的温度还需要合适的脱囊液。贝氏隐孢子虫卵囊对脱囊条件要求更接近于胃腺寄生类群,这对进一步了解隐孢子虫生物学特性及体外培养研究有借鉴意义。     

氟对山羊成骨细胞增殖分化及钙化功能的调节

为探讨氟化物对反刍动物骨骼代谢的影响及对成骨细胞的作用机理,以初生山羊股骨骨膜为材料,采用半消化组织块培养法分离成骨细胞,进行传代培养,并通过形态观察、扫描电镜、碱性磷酸酶(AKP)和矿化结节染色进行鉴定。通过噻唑蓝(MTT)染色、AKP活性测定和钙化结节计数,研究不同浓度的氟对山羊成骨细胞增殖、分化及钙化的影响。结果表明,加氟48 h和96 h后,1.0×10-7~1.0×10-5mol/L氟可促进成骨细胞增殖,其中1.0×10-7及1.0×10-6mol/L氟与对照组差异极显著(P<0.01),高浓度氟(1.0×10-3mol/L)则抑制成骨细胞增殖(P<0.01);而1.0×10-4及5.0×10-4mol/L氟作用48 h对成骨细胞增殖无影响,作用96 h转而抑制成骨细胞增殖(P<0.01)。1.0×10-7~1.0×10-5mol/L氟能显著增强成骨细胞AKP活性及钙化能力(P<0.01),但氟浓度高于5.0×10-4mol/L时,AKP活性及钙化能力明显下降(P<0.01)。证实,低剂量氟能促进体外培养的山羊成骨细胞增殖分化及钙化,高剂量的氟则表现抑制作用。     

口疮病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

为建立检测口疮病毒(orf virus,ORFV)抗体的间接ELISA方法,原核表达口疮病毒B2L蛋白与6×组氨酸标签的重组蛋白;对纯化复性后的重组B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的重组B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测ORFV抗体的间接ELISA,并进行特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用所建立的间接ELISA对来自四川部分地区的384份山羊血清样品进行检测。结果显示,成功原核表达出42 ku的重组ORFV B2L蛋白。Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的抗原反应性。间接ELISA最佳反应条件为:包被抗原质量浓度为5μg/m L,1∶100稀释血清作用2 h,酶标二抗以1∶2000稀释作用30 min,TMB显色时间为15 min。在该优化条件下,D450≥0.31为阳性。该方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性。临床样品的间接ELISA检测结果显示,总阳性率为66.67%(256/384),其中未接种过疫苗的羊只抗体阳性率为34.81%(55/158)。上述结果表明,建立的间接ELISA可用于ORFV抗体的检测,四川部分地区山羊场羊只感染野毒的概率较大,疫苗免疫效果不佳。     

灭虫素和杀虫素对牦牛线虫螨虱的驱杀效果试验

灭虫素和杀虫素对牦牛线虫螨虱的驱杀效果试验周婉丽蒋学良王泽洲（四川省畜牧兽医研究所成都６１００６６）余家富雷德林（阿坝州兽医站）王明贵陈先华兰海燕程翠萍（小金县畜牧局）目前国内市场上兽用驱杀寄生虫药物较多，灭虫素针剂和杀虫素片剂系四川长征制药股份有限...     

高原鼢鼠肌肉抗缺氧成分的筛选

为了筛选高原鼢鼠体内抗缺氧的有效成分 ,以高原鼢鼠肌肉为原料 ,通过超临界萃取 ,75 0mL/L乙醇提取和沸水提取 ,依次提出了其中相应的成分。接着通过给小鼠连续口服不同浓度的提取物进行常压缺氧试验。结果表明 ,高原鼢鼠肌肉超临界萃取物和乙醇提取物具有明显的抗缺氧效果 ,并具有量效关系 ;在浓度为 10 0mL/L时 ,超临界萃取物抗缺氧效果优于同浓度的乙醇提取物和 2 0 0 g/L的红景天胶囊 ;高原鼢鼠肌肉水提物没有抗缺氧效果。     

山羊关节炎-脑炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,采用PCR方法扩增山羊关节炎-脑炎病毒CA蛋白编码基因序列,然后克隆至原核表达载体pET-28a(+),诱导含有重组载体pET-28a(+)-CA的大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白rHis-CA。采用Ni柱亲和层析方法纯化重组蛋白rHisCA,并以纯化的rHis-CA为包被抗原建立检测山羊关节炎-脑炎血清抗体的间接ELISA方法。结果表明重组蛋白rHis-CA以包涵体形式表达,具有良好的反应原性。所建立的rHis-CA间接ELISA方法的最适抗原包被质量浓度和血清稀释度分别为0.4 μg/mL和1∶100,血清阴阳性的D_(450)临界值为0.45。该方法仅与山羊关节炎-脑炎病毒阳性血清发生特异性反应,不与山羊痘病毒、蓝舌病病毒和口蹄疫病毒阳性血清发生交叉反应。对来自陕西地区的48份山羊血清进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA和琼脂凝胶免疫扩散试验的阳性检出率分别为35.41%(17/48)和31.25%(15/48)。对来自天津地区2个山羊场的240份山羊血清样本进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA方法和琼脂凝胶免疫扩散试验的检测结果均为阴性。     

林丹治疗兔耳螨

兔耳螨是由痒螨属的兔痒螨寄生于家兔的耳部或外耳道的一种寄生虫病,以剧烈骚痒为特征。1984年1月,我们用林丹进行了离体螨的杀虫试验和临床治疗试验,取得了较满意的效果。 (一)材料和方法 1.试验药品:20％林丹乳油,新疆烧碱厂产;精制敌百虫粉,上海农药厂产,批号796010;碘甘油,乌鲁木齐市医药站分装;5％糖盐水,新疆制药厂产,批号77630-3。 2.药品配制及浓度:取20％林丹乳油原液0.25、0.3、0.4、0.5、1ml,分别加常水99.75、99.7、99.5、99ml,即为有效浓度0.05％、0.06％、0.08％、0.1％、0.2％的林丹溶液。取敌百虫2克加常水至100ml,即为2％敌百虫溶液。3％碘甘油。 3.离体螨的杀灭试验;     

阿维菌素对体外培养王鸽神经细胞内游离钙离子浓度及CaM mRNA表达的影响

提取美国王鸽8～9日龄鸽胚脑神经细胞进行体外培养,按照阿维菌素(AVM)染毒的剂量分成4组,分别为0ìg/L(Ⅰ组)、2.5 ìg/L(Ⅱ组)、5 ìg/L(Ⅲ组)和10 ìg/L(Ⅳ组),染毒24 h后,用MTT法进行细胞活性检测,应用荧光探针法检测细胞内游离Ca2+浓度,应用半定量RT-PCR法检测细胞内CaM mRNA的表达水平.结果显示,AVM能够引起王鸽神经细胞内游离Ca2+浓度升高,CaM mRNA表达水平下降.表明AVM能影响王鸽体外培养神经细胞内的钙稳态.     

伊维菌素干混悬剂对绵羊寄生虫的驱杀效果与安全性研究

选择1.5~2.0岁自然感染线虫和外寄生虫绵羊150只,分别按体重0.1、0.2、0.3mg/kg剂量口服伊维菌素干混悬剂,同时设口服伊维菌素片剂对照。结果显示,口服伊维菌素干混悬剂0.2、0.3 mg/kg组绵羊的消化道线虫虫卵转阴率分别为93.3%和100%,减少率分别为99.2%和100%;原圆科线虫幼虫转阴率分别为90.0%和100%,减少率分别为94.5%和100%;平均驱虫率分别为98.4%和99.9%;绵羊颚虱、绵羊足颚虱全部被杀死,羊蜱蝇的转阴率分别为83.3%和87.5%。口服0.1 mg/kg组绵羊的线虫虫卵(幼虫)转阴率、减少率、驱虫率均次于0.2、0.3 mg/kg剂量组,对绵羊颚虱、羊蜱蝇的杀虫率较低。绵羊口服0.5 mg/kg伊维菌素干混悬剂未出现明显异常反应。表明伊维菌素干混悬剂与片剂有同等的驱虫效果与安全性。     

猪传染性胃肠炎病毒间接免疫荧光检测方法的建立

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)直观、特异和快速的检测方法,将TGEV接种PK-15细胞后,以抗TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,荧光素FITC标记的山羊抗小鼠Ig G为二抗,建立了TGEV的间接免疫荧光(IFA)检测方法。结果显示,TGEV的最佳接种效价为1×102TCID50,培养时间为24 h,细胞最佳固定液为40 m L/L多聚甲醛,最佳封闭条件为10 g/L BSA 37℃封闭30 min,一抗的最佳使用浓度为1 ng/L,二抗的最佳稀释度为1∶100。对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性。结果表明,建立的检测方法对TGEV具有良好的特异性。本研究建立的方法为TGEV的实验室诊断及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供了有效的检测手段。     

乳香提取物对NIH-3T3细胞增殖及ERK1/2信号通路蛋白表达的影响

为研究乳香提取物对NIH-3T3细胞的增殖、细胞周期和ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2蛋白表达的影响,将NIH-3T3细胞传代后,随机分为药物干预组和空白对照组。在药物干预组向NIH-3T3细胞中加入不同浓度的乳香提取物并培养24h,利用CCK-8法检测细胞的增殖率,利用流式细胞术检测细胞周期比例,利用Western-blot检测ERK1/2蛋白及p-ERK1/2蛋白的表达。结果,分别用4×10-1 g/L和8×10-2 g/L乳香提取物干预细胞24h,吸光度较对照组差异极显著(P0.01)。用流式细胞术检测细胞周期,乳香提取物质量浓度为4×10-1 g/L、8×10-2 g/L和1.6×10-2 g/L时,S期比例较对照组差异极显著(P0.01),且随着乳香提取物质量浓度的降低,细胞周期中S期百分比降低,呈现出剂量依赖性。Western-blot结果显示,ERK1/2蛋白与对照组相比没有发生明显变化;但p-ERK1/2与对照组相比,随着乳香提取物的质量浓度升高,p-ERK1/2增高,且呈剂量依赖性。结果表明,乳香提取物通过激活ERK1/2信号通路促进NIH-3T3细胞的增殖。