英黄散水煎液对奶牛乳房炎致病菌的体外抑菌及抗炎效果的观察

为探讨复方中药英黄散水煎液对奶牛乳房炎致病菌的抑菌能力及抗炎效果,首先对乳房炎患牛奶中的致病菌分离鉴定,通过牛津杯法进行药敏试验,采用常量肉汤稀释法测定英黄散对不同致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度;将小鼠随机分为英黄散低、中、高剂量组,阿司匹林药物组,空白对照组,然后开展二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验、小鼠棉球致肉芽肿试验、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性变化试验,观察英黄散的抗炎作用。结果,经分离鉴定,得到3种致病菌,分别为无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌;这3种致病菌对英黄散均具有一定的敏感性;其最小抑菌浓度依次为31.25、62.5、125 mg/m L;最小杀菌浓度依次为62.5、125、250 mg/m L。抗炎试验结果显示,与空白对照组相比,英黄散高剂量组及阿司匹林药物组能明显减轻小鼠耳廓肿胀度且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05);英黄散高剂量组与阿司匹林组小鼠腹腔渗透液吸光度明显低于空白对照组且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05);英黄散低剂量组及阿司匹林组肉芽肿增重明显低于空白对照组且差异极显著(P0.01),中剂量组差异显著(P0.05)。上述结果表明,英黄散具有良好的抑菌能力及抗炎效果。     

杨树花提取物及其复方制剂的药理学试验

通过药敏试验、联合抗菌作用试验、抗细菌感染试验及抗炎试验,对杨树花提取物及其复方制剂的药理作用进行了研究.结果显示,杨树花水提液及其复方制剂对大肠杆菌、沙门氏菌标准菌和致病菌有中度抑菌活性;杨树花水提液的乙酸乙酯及正丁醇萃取物对大肠杆菌标准菌和致病菌、沙门氏菌标准菌也有中度抑菌活性,但对沙门氏菌致病菌的抑菌活性较低,杨树花与黄芩联合抗菌具有相加作用.抗细菌感染及抗炎试验结果证实,杨树花水提液及复方制剂在昆明系小白鼠体内对大肠杆菌具有抑菌作用,高、低剂量杨树花水提液可使小鼠耳肿胀度明显降低,其抑制率分别为65.0%和51.6%.结果表明,杨树花提取物及其复方制剂具有明显的抑菌、抗炎作用.     

仙人掌总黄酮抗炎作用的研究

为考察两种不同工艺(水提醇沉,超声波醇提)提取的仙人掌总黄酮的抗炎作用,通过冰醋酸致小白鼠腹腔毛细血管通透性增加,棉球致小白鼠肉芽肿以及蛋清致大白鼠足跖肿胀的炎症模型,观察两种仙人掌总黄酮对不同炎症的作用效果。结果显示,水提醇沉高剂量组和超声波醇提高剂量组的仙人掌总黄酮均能极显著抑制冰醋酸所致的小白鼠腹腔毛细血管通透性增加(P<0.01),且高剂量水提醇沉总黄酮的作用效果优于阳性药物地塞米松磷酸钠的作用效果;水提醇沉和超声波醇提总黄酮的各个剂量都能极显著抑制棉球所致小白鼠肉芽肿(P<0.01),其中水提醇沉高剂量和超声波醇提低剂量的作用效果与地塞米松磷酸钠的作用效果相近,但超声波醇提总黄酮毒性过大,不适于临床运用。水提醇沉总黄酮的各剂量均能不同程度地抑制蛋清引起的大白鼠足趾肿胀,高剂量可极显著降低肿胀率(P<0.01),作用效果与地塞米松磷酸钠接近。试验结果证明,仙人掌总黄酮对于急、慢性炎症均具有良好的抑制作用。     

印楝种仁粗提物体外抗鸭瘟病毒活性的研究

采用索氏提取法及溶剂萃取法,用950mL/L乙醇提取印楝种仁并萃取,分别得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及水层。采用细胞病变(CPE)法及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法研究三种萃取物对鸭瘟病毒(DPV)的抑制作用。结果显示,石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及水层对细胞的最大无毒浓度分别为0.007 8、0.003 9和0.125 0mg/mL;当其浓度为0.000 5、0.000 3及0.156 0mg/mL时,对DPV的抑制率各为13.23%、29.24%和11.72%。结果表明,三种萃取物对DPV均有不同程度的抑制作用,其中乙酸乙酯萃取物效果较好。     

猪圆环病毒2型感染裸鼠及BALB/c小鼠的研究

用猪圆环病毒2型(PCV2)经腹腔注射BALB/c小鼠及裸鼠各15只,每隔2周1次,共感染3次。BALB/c小鼠初次、再次感染后均未出现明显的临床症状,仅有2只小鼠出现病理变化;从血清中可检测到PCV2核酸及其ORF2抗体;同时淋巴细胞增殖反应显著增强,NK和CTL细胞杀伤率显著升高;CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞数量显著减少。裸鼠也未出现明显的临床症状,从血清中可检测到PCV2核酸,但未检测到PCV2 ORF2抗体;除NK细胞杀伤率显著升高外,其余免疫学指标无显著改变。结果表明,BALB/c小鼠比裸鼠对PCV2易感,各项免疫学指标变化与PCV2感染猪一致,但不表现临床症状,仅个别BALB/c小鼠出现病理变化,说明BALB/c小鼠对PCV2不如猪易感。     

马齿苋对热应激小鼠空肠HSP70及肝脏抗氧化能力的影响

旨在探究马齿苋水提物(aqueous extract of Portulaca oleracea L.)对热应激小鼠空肠HSP70含量及肝脏抗氧化能力的影响。选取40只昆明种小鼠,随机分为4组:空白组(C)、热应激组(HS)、马齿苋水提物组(AEP)、维生素C组(Vc),每组10只。热应激组于40℃±1℃环境下每天处理0.5 h,其余时间置于30℃±1℃条件下,C组放置于25℃±1℃,连续6 d后,将小鼠置于25℃±1℃之环境给药治疗7 d。在给药治疗开始后第3天和第7天眶窦采血,处死后采集小鼠空肠、肝脏,测定各组小鼠血清HSP70含量、肝脏SOD、MDA及GSH-Px含量及空肠黏膜HSP70 mRNA表达量的变化。结果显示,与C组比较,热应激可显著提高小鼠空肠黏膜HSP70 mRNA表达量(P<0.01),提高肝脏SOD、MDA和GSH-Px的活性水平(P<0.01)。与HS组比较,给予马齿苋水提物后,可有效降低热应激小鼠血清HSP70含量和空肠黏膜HSP70 mRNA表达量(P<0.01)及肝脏MDA的活性水平(P<0.05),但对SOD和GSH-Px的含量无显著影响(P>0.05)。结论:马齿苋水提物能够通过降低热应激小鼠的氧化应激反应,减少热应激小鼠体内HSP70的表达量,达到良好的抗热应激效果。     

苦地胆内酯类化合物的制备及其体外抑菌效果研究

为探讨中药苦地胆有效成分苦地胆内酯的抗菌效果,用浓度为800mL/L的乙醇溶液进行热回流浸提,制备苦地胆内酯的粗提物,经硅胶柱层析分离、纯化,再结晶,制得苦地胆内酯类化合物,用薄层层析法进行苦地胆内酯检测与鉴定,并进行了苦地胆内酯类化合物的体外抑菌试验。结果显示,当浓度为2.0mg/mL时,苦地胆内酯类化合物对巴氏杆菌、蜡状芽孢杆菌具有明显的抑制作用(P0.05),对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌和鸡大肠杆菌呈现极明显的抑制作用(P0.01);浓度分别为50、10mg/mL时,苦地胆内酯类化合物对5种供试菌均有极明显的抑制作用(P0.01)。苦地胆内酯类化合物对供试金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、巴氏杆菌、鸡大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为0.313、0.313、0.156、0.625mg/mL和1.25mg/mL;对蜡状芽孢杆菌的最小杀菌浓度为2.5mg/mL,对其他4种供试菌的最小杀菌浓度均为0.625mg/mL。表明,苦地胆内酯类化合物具有很好的体外抗菌效果。     

冬虫夏草菌丝水提液对SP2/0细胞凋亡的影响

在冬虫夏草菌丝水提液诱导下,采用Hoechst33342荧光染色、MTT、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法,观察和分析了SP2/0细胞的凋亡情况。结果显示,冬虫夏草菌丝水提液可抑制SP2/0细胞增殖,在荧光显微镜下,凋亡细胞呈亮绿色,DNA琼脂糖电泳可见典型的“阶梯状”条带,Annexin-V-FITC和碘化丙啶(PI)双染后流式细胞仪分析显示,细胞凋亡数量明显增多。表明,冬虫夏草菌丝水提液对SP2/0细胞增殖的抑制作用可能与诱导其凋亡有关。     

猪2型圆环病毒核酸疫苗的研制及其对小白鼠的免疫效果

为研制猪2型圆环病毒(PCV2)新型核酸疫苗,以pcDNA3为载体,与PCV2的ORF2及其高变区V1、V2、V3、V1-V2连接,分别成功构建了真核表达质粒pcDNA3-ORF2、pcDNA3-V1、pcDNA3-V2、pcDNA3-V3和pcDNA3-V1-V2。对阳性真核表达质粒大量生产并纯化后,以每只小白鼠0.2 mg免疫5周龄左右的雌性小白鼠,然后用ELISA检测免疫小白鼠血清中抗体的产生情况。结果显示,这5种真核表达质粒均能刺激小白鼠产生特异性抗体,但相比之下,真核表达质粒pcDNA3-V1-V2诱导小白鼠产生的抗体水平更高,维持的时间更久。表明质粒pcDNA3-V1-V2的免疫效果较好,有望成为防制猪2型圆环病毒的候选疫苗。     

猪泛素基因与PRRSV GP5基因融合表达质粒的构建及其免疫效果

构建了泛素(ubiquitin,Ub)基因与密码子优化的PRRSV GP5蛋白(optiGP5)基因融合表达质粒pIR-Ub-optiGP5。间接免疫荧光和Western-blot分析表明,重组质粒转染293T细胞后能够瞬时表达。将pIR-optiGP5和pIR-Ub-optiGP5两种质粒DNA肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,分别检测小鼠血清中抗GP5抗体、T淋巴细胞的增殖能力以及CTL活性。结果显示,pIR-optiGP5质粒免疫组在二免后可以检测到荧光抗体,而pIR-Ub-optiGP5质粒免疫组一直未检测到抗GP5抗体,但该免疫组的T淋巴细胞增殖指数及针对GP5的特异性CTL反应数值明显高于pIR-optiGP5质粒免疫组。这表明泛素与GP5的融合表达可增强细胞免疫反应。     

列当的安全性评价试验

为进一步确定列当(Orobanche cumana)的实际效用以及是否可以在成为肉苁蓉的替代品方面有其相应的价值,对小鼠进行半数致死量测定和最大给药量测定的急性毒性试验、SD大鼠进行30 d灌胃的亚慢性毒性试验,观察列当水煎液的毒性作用。急性毒性试验结果表明,当列当水煎液的最大给药剂量为40 g/kg时,小鼠并无不适反应,体征一切正常,7 d内所有小鼠无死亡。亚慢性毒性试验期间,试验组大鼠的临床体征正常,血常规及血清生化指标均在正常范围内,剖检未见异常,在心、肝、肾组织学观察中均未见明显的病理变化。列当水煎液急性毒性试验及亚慢性毒性试验均说明列当水煎液实际无毒。