染色混合精斑涂片DNA检验方法的研究

建立了染色混合精斑涂片DNA的提取方法,通过两步扩增的技术与垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染色法,成功检测了3个STR位点.结果显示,所有染色涂片DNA分型均与对照血样一致,苏木素-伊红(HE)染色比酸性复红-美蓝(Baecchi)染色对DNA的降解作用要小;涂片灵敏度检验可达到少于10个精子,且室温保存一年以内的涂片其灵敏度光显著差异.该方法简单、快速、可靠,为染色混合精斑涂片的PCR分析提供了新方法.     

酸性复红美蓝精子染色法的改进

物证精斑确证试验目前广泛首选精子检出法。检精子的方法较多,实践中大多采用酸性复红美蓝染色法,因其是一种混合染色液的复染法,操作简单,效果较好。但如遇油脂杂质较多或阴道上皮细胞较多的情况,精子着色较淡,易被掩盖,不易检出。本文介绍一种改进方法可避免上述干扰,且配制、操作简单。     

DNA指纹图在法医学鉴定中应用的研究(Ⅲ)——应用“Myo”DNA探针进行混合斑中精液的个体认定

本文利用蛋白酶K、SDS对精液和阴道液、精液和血液的混合斑进行前处理,除去女性阴道脱落上皮细胞和血液细胞成份获得精子。提取精子DNA,用“Myo”小卫星DNA探针杂交进行DNA指纹检验,获得了高度多态性的精子DNA指纹图谱,与同一个体血液DNA指纹图谱比较完全一致,实现了混合斑中精液来源的个体认定。在对20多起强奸案例混合斑的实际应用中,成功地认定了强奸罪犯。     

应用免疫酶组化法测定混合斑中精子ABO型

应用免疫酶组化法测定混合斑中精子ＡＢＯ型李荣华，吴梅筠华西医科大学法医血清学教研室（６１００４１）精液与阴道液混合斑的检验，一直是强奸案件中的棘手问题之一。传统的中和试验由于不能排除阴道分泌物中ＡＢＨ物质对精液ＡＢＯ血型测定结果的干扰，个人识别能力有...     

用免疫酶组化法测定混合斑中精子ABO血型的案例分析

精液与阴道液混合斑的检测,一直是强奸案件中的棘手问题之一。传统的中和试验由于不能排除阴道分泌物中ABH物质对精液ABO血型测定结果的干扰,个人识别能力有限。国内外学者用多种方法研究证实了人类精子上含ABH物质。欧炯文等采用酶标抗体免疫组化法直接测出了混合斑中精子的ABO型,我们用该法对各市、县公安局送检的12例强奸案混合斑中精子的ABO型进行了测定,供个人识别之用,结果见表、图1、图2。     

Differex~(TM)系统在混合斑精子DNA分离提取中的应用

叶某,女,7岁。某日放学途中被诱骗奸杀,3日后发现其尸体,且已高度腐败。提取阴道内容物送检。阴道拭子浸出液沉淀经涂片,检见少量精子和阴道上皮细胞。用传统差异裂解法[1]分离提取混合斑精子DNA,扩增分型效果不佳(照片1)。本文作者应用D ifferexTM系统分离提取混合斑精子DNA,取得扩增分型的满意结果。现报道如下。1 D ifferexTM系统分离提取精子DNA1.1主要仪器与试剂D ifferexTM试剂盒(含消化缓冲液、分离液、无核酸酶水)、DNA IQTM纯化系统、PowerPlexTM16试剂盒为美国Promega公司产品;金牌酶、AB I3100遗传分析仪、9700PC…     

精液和阴道液混合斑中异常B型物质的检验

精液和阴道分泌液混合斑ABO血型的检验多采用中和法与热解离法同时检验，通过两种方法互相印证，有利于正确判定混合斑中的精斑血型。在检验O型或A型阴道分泌液与A型精液的混合斑时，偶而出现异常的B型物质，这一现象在国外已有报道[1、2]。本人在检案中见到三例，现将检验情况报道如下：材料与方法一、混合斑检林本室1984～1993年检验的已确证血型为O型或A型精液和阴道分泌液混合斑擦拭纱布43例。其中O型女子与A型男子的混合斑13例，A型女子与A型男子的混合斑15例，A型女子与O型男子的混合斑9例，O型女子与O型男子的混合斑6例。二、…     

阴道液斑的检验近况

在强奸案的法医物证检验中,过去多只注重检验遗留在被害人的衣、物、身体和现场上的精斑及型物质证实犯罪,但有时可能检不出精斑,而在嫌疑人的衣服和身体上却可能有阴道液斑,或者遗留的斑迹系精液-阴道液混合斑(以下简称混合精斑),因而阴道液斑的检验有时有其重要意义。现将阴道液斑检验概况作一概述。 1 阴道液的成分 阴道液是阴道粘膜的漏出液、分泌液、脱落上皮细胞及卵管、宫内膜、宫颈粘液、阴道正常菌群代谢产物等组成的混合物,阴道脱落上皮细胞随月经周期呈周期性变化,分泌液的性状及量也     

用单克隆抗体进行混合斑ABO血型的研究

本文用TNE缓冲液浸泡提取混合斑中的精子和阴道上皮细胞,用高效价单克隆抗A、抗B血清进行吸附,加入含2.5％鸡白蛋白的红细胞指示悬液进行红细胞粘连试验。结果,精子和阴道上皮细胞能与相应的红细胞粘连,可同时判定混合斑中精子和阴道上皮细胞的血型。     

实验性大鼠急性心肌缺血的组织化学和扫描电镜观察

本文报告40只大鼠结扎左冠状动脉所致实验性心肌梗死早期（缺血1～8h）的病理形态学变化。结果发现苏木素-碱性复红-苦味酸（HBFP）和吖啶橙荧光染色诊断早期心肌缺血较敏感，氯化-2，3，5-三苯基四氮唑（TTc）大体染色法显示缺血境界鲜明可靠。此三种方法不受室温（15～20℃）死后自溶12～48h的影响。酸性复红染色（AF）对早期缺血组织较敏感，但受死后自溶影响，妨碍认定缺血区。扫描电镜（SEM）观察心肌缺血改变基本与透射电镜（TEM）相同，与早期自溶改变难以区别。     

广泛软组织挫伤的病理分析

广泛软组织挫伤严重者可在较短时间内导致死亡。但由于文献中对这方面的研究报道较少,故对其所引起的全身病理改变和较详细的死亡机理尚知之不多,为此,作者将本教研室历年来遇到的五例尸体检查材料重新进行了观察分析。五例都作了全身尸体解剖,主要脏器经石蜡包埋切片,苏木素伊红染色,有的还作了磷钨酸苏木素染色。     

第七讲 常见法医学物证检验(续)

<正> 三、血液之外的其它体液检验血液之外的其他体液,如精液、尿液、汗液、唾液等在犯罪现场也可出现,其中尤以精液最为常见,因此我们着重介绍精液检验。(一)精液(斑)检验精液是精子和前列腺、精襄等分沁液的混合物。精子是精液的主要成份(病症和手术除     

PCR扩增STR位点在强奸案中的应用

利用Chelcx－100、PK、SDS、DTT对精液和阴道液、精液和血液混合班进行处理，除去女性阴道上皮细胞和血细胞获得精于细胞，提取DNA，经扩增STR位点[1]，获得高度多态性l‘ISTR位点分型图，与同一个体血液DNA的STR位点分型比较计算其概率，达到个体认定的作用．对强奸致孕案，由于STh位点等位基因按孟德尔遗传规律由亲代向子代传递，在母亲是肯定的情况下，可把STR位点分型与嫌疑父亲进行对比，计算其RCP父权相对机会）值认定嫌疑父亲为生物学父亲．通过对多起强奸案混合斑和强奸致孕案的实际应用，成功地排除或认定了罪犯，现…     

女尸内衣斑迹在厕池浸泡16天检出精子

<正> 某县学生,女,16岁,某年2月16日失踪。3月3日在厕池发现一具女尸,系失踪者。衣服经清水漂净,见女内衣有斑迹,晾干作精斑检验。检验方法:取多处斑迹各1平方厘米,分别用生理盐水浸泡,离心,取其上清液作抗人精(效价2000倍)沉淀环反应,结果为阳性。沉渣作涂片,用苏木素伊红染色,检出一个精子头部,另一个精子头部连接颈部。破案后犯罪分子交代:作案后将其女学生内衣脱掉;强奸后用力反复擦拭阴部及阴茎。将死者衣服连同尸体装入麻袋,包扎后扔下厕池,上面再用稻草盖好。     

用改良MASSON三色法鉴别生前死后的皮肤压痕

本实验用改良ｍａｓｓｏｎ三色染新技术，即固绿ＦＣＦ－丽春红Ｓ酸性品红一铁苏木素染色对６０只小白鼠的生前和死后颈部皮肤压痕进行实验研究，发现生前组３０只小白鼠均显示压痕处皮下肌肉呈深红染而死后组３０只小鼠深红染阴性２３只，可疑４只，假阳性３只。结果表明用固绿ＦＣＦ－丽春红Ｓ酸性品红一铁苏木素染色，以光学显微镜检查鉴别生前和死后的皮肤压痕有一定价值。     

国外论文文摘

用聚合酶链反应法对精子阳性涂片进行HLADQ_α分型[刊,德]/Potsch L.…//德国法医学杂志,-1993,3(2),-54～58 此研究说明,以PCR法对精子阳性涂片进行HLADQ_α分型测定个体特征的可能性。以分级溶解来分离男性和女性DNA是直接在显微镜载玻片上进行的。按照DNA的萃取和扩增测定男性HLA DQ_α-型的阳性结果,至少需要20个精子。对一般使用的定影方法和染色程序以及涂片制备的实用效果进行了实验研究。以AAS载玻片用于阴道混合物的涂片比较好,因为蛋白酶K-消化后还会粘附在上面,对男性和女性细胞中的DNA能够完全分离。     

碘化碘钾法检验精斑150例

1 150例精斑检验结果的概况 (1)102例是案发后1个月内的斑迹,均出现多量的碘化碘钾结晶阳性反应,镜下(40×15倍)容易发现精子。 (2)23例是案发后2～3个月的斑迹,均出现多量的碘化碘钾结晶阳性反应,镜下皆发现精子。 (3)25例是用棉签蘸取被奸人尸体的阴道内液斑,在案发后1个月内进行试验,也都出现碘化碘钾结晶的阳性反应,同时发现精子。另用无精液的阴道液斑,作空白对照试验,均呈阴性结果。 2 陈旧的精斑检材和配制不同时间碘化碘钾试剂的实验情况     

双面胶带法快速检验精斑

精液及精斑是常见的生物物证,精斑的确证主要有3大类方法:形态学检查、免疫学检验及生化分析,而形态学检查是认定精斑存在最简便、可靠的方法[1]。在实际检案中,笔者总结了一种简单实用的精子快速检出方法———双面胶带法。介绍如下:1设备与材料1.1器材双面胶带,载玻片,盖玻片,分离针,吹风机。1.2试剂染色Ⅰ液(酸性品红液):将媒染剂硫酸铝5g溶解于100ml煮沸的蒸馏水中,再加0.1g酸品红于溶液中进行搅拌,使之充分溶解。染色Ⅱ液(苦酸靛蓝胭脂红液):取靛蓝胭脂红1g,置于饱和苦味酸溶液300ml中进行溶解,过滤后使用。1%的盐酸溶液,95%乙醇溶液,…     

根据阴道液中蛋白的SDS-PAGGE谱型鉴定阴道液斑及混合斑

根据阴道液蛋白 SDS-PAGGE 谱型的器官特异性,认定了保存于—30℃、4℃达3年及室温达9年的阴道液斑和保存于室温2个月的混合斑,初步应用于案例鉴定。     

用ELISA检测精液及精斑中精子抗原的研究

本实验应用单克隆抗人精子抗体和酶标记羊抗人精子抗体,采用ELISA方法确定精子抗原成份的存在。对10份新鲜精液,15份精斑进行了验测,其结果阳性率为100%。新鲜精液(精子数约10,000万个/ml)稀释100万倍,精斑浸出液稀释50万倍,均可出现阳性。对唾液斑、尿斑、乳汁斑、阴道斑、汗斑及输精管结扎的精液均为阴性。实验结果表明,本法检验精子抗原具有灵敏度高,特异性好的优点。