外伤性癫痫灶中泛素与泛素激活酶的定量分析

目的 定量测定人体外伤性癫痫灶中泛素(ubiquitin,Ub)和泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme,UbE1)的表达,研究泛素蛋白酶体系在外伤性癫痫(post-traumatic epilepsy,PTE)发病机制中所起的作用,探索其在PTE鉴定中的应用价值. 方法 分别收集颅脑外伤致癫痫患者脑癫痫灶组织(外伤性癫痫组)、非颅脑外伤性癫痫灶组织(非外伤性癫痫组)和交通事故死亡者正常脑组织(非癫痫组)各15例,应用RT-PCR、Western印迹技术检测3组中Ub和UbE1的含量,并对所得数据进行统计学分析. 结果 RTPCR、Western印迹技术测定显示Ub和UbE1的mRNA和蛋白质在3组中含量为外伤性癫痫组>非外伤性癫痫组>非癫痫组,两两比较,组间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Ub和UbE1在癫痫灶组织中表达增加,且在外伤性癫痫灶组织中增加最为明显.推断泛素蛋白酶体系的活化是PTE神经元病理改变的重要机制之一.     

外伤性癫痫灶中泛素蛋白酶体系的形态学改变

目的检测泛素(ubiquitin,Ub)和泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme1,UbE1)在外伤性癫痫灶中的表达,探索其对鉴定外伤性癫痫的应用价值。方法收集脑外伤后癫痫灶皮质样本15例(外伤性癫痫组)、非脑外伤后癫痫灶皮质样本15例(非外伤性癫痫组),交通事故死亡正常脑皮质样本15例(非癫痫组),通过HE常规染色观察各组形态学改变,用免疫组化染色检测3组中Ub和UbE1的表达情况。结果常规HE染色下,与非癫痫组相比,外伤性癫痫组和非外伤性癫痫组出现神经元数量减少、神经元变性等形态学改变,外伤性癫痫改变更明显。Ub和UbE1主要表达在癫痫灶神经元细胞核、细胞质内,细胞外未见表达。图像分析显示两指标的表达量为外伤性癫痫组非外伤性癫痫组非癫痫组,差别具有统计学意义(P0.05)。结论正常神经元数量减少、神经元变性是癫痫灶的主要病理改变之一,外伤性癫痫神经元病理改变更明显。与HE染色比较,Ub和UbE1免疫组化染色更灵敏,有助于鉴别外伤性癫痫和非外伤性癫痫。     

外伤性癫痫病灶中caspase-10的表达

【摘要】目的观察凋亡基因caspase-10存外伤性癫痫病灶中的表达变化,探讨其作用机制。方法收集外伤性、非外性癫痫患者手术切除的恼皮质及交通事故死亡者脑皮质各15例,运用RT-PCR技术观察比较各实验组凋亡基因caspase-10表达水平,采用荧光免疫组织化学染色技术观察各实验组凋亡基因对应蛋白的表达情况。结果外伤性癫痫组（：aspase-10基冈和蛋白表达水平比非外伤性癫痫组和交通事故死亡组高,差异有统计学意义（P〈0．05）;非外伤性癫痫组caspase-10基因和蛋白表达水平亦显著高于交通事故死亡组（P〈0．05）。结论凋亡基因caspase－10能促进神经元凋亡,对外伤性癫痫的发病过程有促进作用。     

外伤性癫痫患者癫痫灶中GABABR1和GluR1的表达

目的探讨外伤性癫痫患者颞叶癫痫灶组织γ-氨基丁酸B受体亚单位（gamma-aminobutyric acid B receptorsubunit,GABABR1）和谷氨酸受体亚单位（glutamic acid receptor subunit,GluR1）的表达变化,以期为阐释外伤性癫痫发生机制和法医学鉴定提供依据。方法收集15例外伤性癫痫患者脑皮质（外伤性癫痫组）1、5例非外性癫痫患者脑皮质（非外伤性癫痫组）、15例交通事故死亡者脑皮质（交通事故死亡对照组）,运用荧光免疫组化技术和RT-PCR技术观察GABABR1和GluR1的表达水平。结果外伤性癫痫组GABAB R1表达水平明显低于对照组,但高于非外伤性癫痫组;外伤性癫痫组GluR1表达水平明显高于对照组,但低于非外伤性癫痫组。结论 GABABR1和GluR1的表达水平的变化在外伤性癫痫病的发病过程中起着一定的作用,可以作为区分外伤性癫痫与非外伤性癫痫的病变化指标之一。     

Bcl-2蛋白在外伤性癫痫病灶中的表达

目的观察Bcl-2蛋白在外伤性癫痫病灶中的表达变化,探讨其作用机制。方法收集外伤性癫痫、非外性癫痫患者及交通事故死亡者脑皮质各15例,采用免疫组织化学和荧光免疫组织化学技术,观察各实验组Bcl-2蛋白表达水平,测定阳性表达的灰度值,数据采用SPSS 12.0软件进行统计分析。结果外伤性及非外伤性癫痫组Bcl-2蛋白表达水平均高于交通事故死亡组（P〈0.05）;而非外伤性癫痫组表达明显高于外伤性癫痫组,差异亦具有显著统计学意义（P〈0.05）。结论 Bcl-2蛋白能抑制神经元凋亡,对外伤性癫痫的发病过程具有抑制作用。     

外伤后大脑癫痫灶中SLIT-2的表达变化

目的通过测定人体大脑外伤后癫痫灶中轴突再生调控因子SLIT-2的表达情况,探讨其在外伤后癫痫鉴定中的应用意义。方法 75例人大脑皮质样本分为3组:①实验组:为脑外伤后癫痫患者(30例),②对照组1:为非外伤性癫痫患者(30例),③对照组2:为车祸致颅脑损伤死亡者(15例)。实验组和对照组1样本来源于癫痫手术所切除的脑皮质(患者或其近亲属知情,自愿提供);对照组2样本来源于尸体解剖的大脑皮质。通过HE染色、免疫组化染色、westernblot和图像分析技术,观察、检测上述样本SLIT-2的表达情况,所得数据经统计学处理分析。结果 SLIT-2在实验组与对照组1癫痫灶皮质的神经细胞膜上呈阳性表达,在对照组2中仅有微量表达。实验组SLIT-2的表达高于对照组1,两组间的差异具有显著性意义(P0.05);显著高于对照组2,两组间的差异具有显著性意义(P0.05)。结论 SLIT-2有望作为区别外伤后癫痫与非外伤性癫痫的病理指标之一,通过进一步研究,逐步运用到法医学的鉴定实践之中,为外伤后癫痫的法医病理学鉴定提供客观依据。     

大鼠急性肾缺血再灌注损伤早期的基因表达

目的研究急性肾缺血再灌注损伤早期的差异基因表达,探索其潜在的分子机制。方法通过单纯夹闭大鼠肾动脉制备肾缺血再灌注模型,进行基因表达芯片检测和生物信息学分析,筛选急性肾损伤早期的差异基因表达及其所涉及的细胞活动和信号通路。同时,通过构建差异表达基因的生物网络来寻找与急性肾损伤关系密切的分子,并进行荧光定量PCR验证。结果在检测出的151个差异表达基因中,132个基因显著上调,19个基因显著下调,GO与KEGG通路富集分析结果显示主要与细胞增殖、细胞因子介导的信号通路和免疫反应等有关。荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,挑选出的3个与急性肾损伤高度相关的基因(ANXA1、PHLDA1、KLF6)在疾病早期具有显著的表达差异,上升倍数与芯片检测出的倍数基本一致。结论本研究揭示了急性肾损伤早期的差异基因表达特征以及所涉及的生物学过程和信号通路,其中ANXA1、PHLDA1、KLF6可能在急性肾损伤的发病机制中起到一定作用。     

大鼠外伤性癫痫模型皮层SPP1蛋白的表达

目的检测分泌型焦磷酸蛋白1 (Secreted phosphoprotein 1,SPP1)在外伤性癫痫(post-traumaticepilepsy,PTE)大鼠皮层脑组织中的表达变化,探讨其与外伤性癫痫的关联。方法随机将18只大鼠分为正常对照组、生理盐水组和实验组。建立外伤性癫痫模型。采用免疫组化法检测GFAP蛋白,采用Western blot法检测SPP1蛋白。结果大鼠行为学平均评分为4分;EEG显示明显痫性放电;免疫组化结果显示,实验组大鼠脑组织GFAP阳性细胞与正常对照组和生理盐水组比较,显著增高(P <0.05);生理盐水组GFAP阳性细胞与正常对照组比较,差异不具有统计学意义(P> 0.05),以上结果综合表明成功建立了大鼠外伤性癫痫模型。Western blot结果显示,实验组SPP1蛋白表达量较正常对照组和生理盐水组显著增高(P <0.01);生理盐水组SPP1蛋白表达量较正常对照组不显著,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 SPP1在外伤性癫痫大鼠皮层脑组织中表达显著上调,外伤性癫痫的发生机制可能与SPP1的表达异常增高有关。     

外伤性癫痫灶β-折叠蛋白的FTIR-mapping研究

目的研究外伤性癫痫致痫灶β-折叠蛋白的红外光谱改变。方法利用傅里叶红外光谱面扫描成像技术对大鼠外伤性癫痫脑组织标本进行检测,获得β-折叠蛋白结构的光谱数据,绘制致痫灶的红外光谱图像。结果致痫灶可见明显的β-折叠蛋白结构高吸收区,高吸收区色差、吸收度与低吸收区存在明显不同。结论外伤性癫痫致痫灶广泛存在β-折叠结构跨膜蛋白的改变,具有β-折叠结构的跨膜蛋白广泛参与了外伤性癫痫的发生。     

闭合性脑损伤后血清和海马的蛋白质表达

目的 研究大鼠脑损伤后血清和海马中蛋白质表达的差异.方法 用雄性SD大鼠制造脑损伤模型,应用弱阳离子交换(WCX2)芯片和铜离子结合(IMAC-Cu)芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术,分析大鼠闭合性脑损伤后不同时间血清和海马中蛋白质表达谱的变化.结果 WCX2芯片在血清和海马样本中分别捕获436个和364个...     

实时定量PCR检测大鼠脑挫伤后HIF-1α mRNA的表达

目的研究大鼠脑挫伤后挫伤部位脑组织HIF-1α mRNA的表达随损伤时间变化的规律及其在脑损伤时间推断中的应用。方法以Feeney法建立大鼠闭合性脑挫伤模型,应用实时荧光定量PCR技术检测脑挫伤部位HIF-1α mRNA的表达,采用2-△△Ct法比较实验组与对照组脑组织HIF-1α mRNA表达的倍数关系。结果与对照组相比,HIF-1α mRNA的表达在伤后1h即达到高峰,随后下降,伤后24h出现一次较小高峰,3～14d逐渐恢复至对照组水平。结论脑挫伤后HIF-1α mRNA的表达随损伤时间的变化呈现出一定规律性,可作为推断早期脑挫伤经过时间的生物学指标之一。     

OTS-2．2S基因芯片对人脑挫伤后基因表达差异的初步研究

目的利用基因芯片技术,研究人挫伤脑组织中基因表达差异。方法从脑组织提取mRNA,通过OTS-2.2S基因芯片,研究脑挫伤组织与对照脑组织细胞原癌及抑癌相关基因特异性表达差异。结果发现在挫伤脑组织中,HoJ-1和KIAAOO65基因表达水平显著下降,而p107mRNA表达水平显著升高。结论在脑挫伤中仅发现3条基因的表达有显著性差异;本研究是对脑损伤后基因表达水平及其法医学意义进行的探索性研究。     

外伤性癫痫的法医学鉴定21例分析

为了探讨颅脑损伤后癫痫的法医学鉴定要点,对 21例颅脑损伤后癫痫出现发作者进行了现病史、既往史调查,并结合临床脑电图（ EEG）及 X线片、 CT片、 MRI片等影像学资料。结果发现外伤后癫痫常继发于严重的颅脑损伤,多以晚期发作为主,其发作性质决定于颅脑损伤的部位和程度,头皮 EEG和 24小时动态 EEG证实有异常癫痫样波存在,影像学检查有助于定性分析。结果提示：外伤性癫痫法医学鉴定必须以掌握外伤史及既往史为基础,结合 EEG、 CT、 MRI等检查方可作出正确鉴定。     

ARP-SP基因表达谱芯片对脑损伤的初步研究

目的研究脑挫伤后ARP-SRP基因表达谱差异及其法医学意义。方法从脑组织提取mRNA,应用ARP-SRP-1.0S基因芯片,研究脑挫伤组织与对照脑组织细胞凋亡蛋白和应激反应蛋白相关基因特异性表达差异。结果基因芯片杂交结果中,发现人类溶酶体的胃蛋白酶抑制剂不敏感蛋白酶基因(CLN2)表达水平显著下降。结论CLN2基因与一种婴儿致死性神经变性疾病LINCL有关,但CLN2基因在脑损伤中的作用尚有待进一步研究;基因芯片在研究脑损伤后相关基因的改变具有快速、高通量、高敏度等特点。     

Validation study of endogenous reference genes for normalization of quantitative real time PCR data in post mortem skin tissue

Gene expression profiling may provide insights into the molecular mechanisms underlying wound skin repair contributing to applications in the field of post mortem forensic wound age estimation. Quantitative real-time PCR (qPCR) is the most sensitive technique for gene expression studies but represents a complex procedure with several requirements for accurate data analysis. One of the major pre-requisites is the selection and validation of appropriate endogenous control genes for normalization in a given set of samples. In this study, the gene expression stabilities of ten endogenous controls ACTß, ß2M, PPIA, GAPDH, HPRT1, PGK1, SDHA, TBP, UBC, and YWHAZ were evaluated in two sets of samples: post mortem human wounded and unwounded skin tissue aimed for subsequent wound age estimation studies. The most stable genes were determined by calculating a gene expression normalization factor for each sample based on the geometric mean of the ten selected genes using the reference gene validation software, geNorm. In uninjured skin, the most stable endogenous controls were YWAZ, with the highest stability, followed by PGK1 and GAPDH. In the wounded samples, GAPDH was the most stable gene followed by PGK1, ACTß and HPRT1. Both groups revealed some differences relative to reference gene expression stabilities, nevertheless, PGK1 and GAPDH could serve as two possible common reference genes for qPCR data normalization as both were identified as stable genes in wounded and unwounded skin tissues. The differences of expression stabilities of the reference genes identified in both groups support the need for accurate normalization of gene-expression levels previous to qPCR studies.