抗人精特异性单克隆抗体的制备及初步鉴定

用正常人精液免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP_2/O融合,得到6株分泌抗人精液单抗的杂交瘤。对其中一株命名为A_(10)C_6的杂交瘤特性,用免疫双扩散鉴定为IgG_1亚类,免疫组化证实它主要作用于人精子,ELISA(双抗体夹心法)证实它只与人精液起反应,而对牛、猪精液,人乳及A、B、O红细胞表面抗原物不起反应,证明它具有较高的特异性,有一定的应用价值。     

反向间接血凝(RPHA)法应用在血痕检验中的研究

血痕检验目前采用的方法有肉眼观察、预试验、确证试验、种属鉴别、血型检查及出血部位检验等.用免疫法制备抗人血红蛋白(Hb)的抗血清进行人血液的法医学种属鉴别已沿用很久,但国内还未见到RPHA法应用在血痕检验中的报导.本实验室建立了该法检测人粪便隐血,并对模拟血痕的检测也作了研究.认为本法对微量血痕     

用ELISA检测精液及精斑中精子抗原的研究

本实验应用单克隆抗人精子抗体和酶标记羊抗人精子抗体,采用ELISA方法确定精子抗原成份的存在。对10份新鲜精液,15份精斑进行了验测,其结果阳性率为100%。新鲜精液(精子数约10,000万个/ml)稀释100万倍,精斑浸出液稀释50万倍,均可出现阳性。对唾液斑、尿斑、乳汁斑、阴道斑、汗斑及输精管结扎的精液均为阴性。实验结果表明,本法检验精子抗原具有灵敏度高,特异性好的优点。     

应用FTIR技术对尸体内外精液留存时间的研究

目的 应用傅里叶变化红外光谱(Fourier Transform Infrared,FTIR)技术和化学计量学方法鉴定尸体内外精液(斑)的留存时间。方法 利用猪阴道模拟尸体内环境,取新鲜精液分别留存于体内外0～168 h,采集红外光光谱数据,通过化学计量学方法建立主成分分析(Principal Components Analysis, PCA)和偏最小二乘(Partial Least Squares, PLS)回归模型。结果 体内外精液(斑)红外光谱峰位随时间变化不明显,PCA结果有较好的聚类关系,在PLS回归模型中预测的偏差值为15.786 3 h,R²为0.922 4,CARS算法选取的特征波数点位于1 000～1 180、1430～1 480、1 700～1 760 cm^-1等波长段。结论 红外光谱技术对于鉴定体内外精液(斑)留存时间具有一定的可行性,体内外精液(斑)的降解趋势有所不同。     

分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。     

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。     

可疑斑迹前列腺特异性抗原检测1例

正1案例1.1简要案情某夫妻携带一张附着有可疑斑迹且潮湿的卫生纸到本鉴定中心,该卫生纸为丈夫在家里客厅垃圾桶中所捡。该夫妻要求检验卫生纸上可疑斑迹中是否有男性精液及女性成分,对其进行DNA检测,并与夫妻双方DNA分型结果进行比对。1.2检验过程及结果通过金标试剂条法对卫生纸上的斑迹进行人精液前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)检验,结果呈阳性(图1),提示该卫生纸上含有人精液或人前列腺液。     

mRNA荧光复合扩增系统鉴别正常和异常精液初探

目的构建mRNA荧光复合扩增体系,实现对不同种类精液(尤其是无精症精液)的区分鉴别。方法收集正常、少精症及无精症的精液样本,制备精斑样本后提取细胞总RNA,利用逆转录PCR技术扩增2个精子特异mRNA标记(PRM1、PRM2)、2个精浆特异mRNA标记(TGM4、SEMG1)和2个管家基因mRNA标记(TEF、UCE)。结果正常精液样本可检测到全部精液mRNA标记表达;少精症精液样本虽然可检测到全部mRNA标记表达,但精子特异mRNA标记表达量较低;无精症精液样本不能检测到精子mRNA标记,只能检测到精浆特异mRNA标记。结论利用mRNA荧光复合扩增系统可以实现对正常和无精症精液的区分,而正常精液和少精症精液相比差异无统计学意义。     

不同温度对精液(斑)中酸性磷酸酶(ACP)活性的影响

<正> 酸性磷酸酶广泛分布于人体组织,含量最高的是前列腺液和精液。精液(斑)中酸性磷酸酶的检验,是有价值的一种常规预试验,特别是对作了绝育术的人的精液(斑)鉴定时,酸性磷酸酶的检验更为     

混合斑(液)中前列腺素(PG)物质的检测

<正> 证实精液(斑)的方法虽然很多,但对无精子的、受高热作用后的以及腐败的精液(斑),酶以及蛋白质成份的检测,容易得出阴性结果。我们试图寻求一种简易、有效的方法,测定混合斑(液)中的前列腺素物质,以此判定精液(斑)     

四类遗传标记的检测用于混合精斑的个人识别

目的探讨综合应用常染色体STR与Y-STR、X-STR、mtDNA高变区Ⅰ序列检测四类遗传标记,提高两男性混合精液样品的个人识别率。方法使用商品化试剂盒检测混合精液样品的常染色体与X、Y染色体STR,应用单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)法分离两男性混合精液样品的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)高变区Ⅰ序列,并进行序列分析。结果混合精液样品比例超过1:10(高组分所占比例继续增加而低组分所占比例继续减少)时可以确定高拷贝者的全部四类遗传标记系统的分型。比例接近时,通过与嫌疑人检测结果的比较可获得排除或基本认定的意见。结论四类遗传标记系统的联合检测有助于提高两男性混合精液样品的个人识别率。     

应用SNaPshot技术检测精液特异性cSNP遗传标记

目的 探讨基于SNaPshot技术的精液特异性编码区单核苷酸多态性（codingregionsinglenucleotidepolymorphism,cSNP）遗传标记检测在精液（斑）溯源及混合体液（斑）鉴定中的可行性。方法 制备16例精液斑和11例精液-静脉血混合斑样本,提取其基因组DNA(genomicDNA,gDNA)和总RNA,并将总RNA逆转录为互补DNA(complementaryDNA,cDNA)。在已验证的精液特异性mRNA编码基因上筛选cSNP遗传标记。基于SNaPshot技术构建cSNP复合检测体系并通过CE对样本进行基因分型。结果 成功构建了包含5个精液特异性cSNP的复合检测体系。在16例精液样本中,除了位于TGM4基因上的cSNP在cDNA的检测结果中出现等位基因丢失外,其余cSNP的gDNA和cDNA分型结果高度一致。检测精液-静脉血混合斑时,检出的cSNP分型结果均与精液提供者的基因型一致,未受到静脉血提供者基因型的干扰。结论应用SNaPshot技术检测精液特异性cSNP的方法可以应用于法医学精液（斑）的基因分型,并为混合体液（斑）中精液来源个体的判定提供...     

人类精浆特异性抗原P_(30)的研究进展

<正> 在受理强奸案件和其他性犯罪案件时,常需检验精液斑。由于精液斑的确证试验尚有不足之处,法医学者一直在探索建立更好的检验方法。近年来,国外学者报道人类精液中含有一种被称之为 P~(30)的精浆特异性抗原,其抗血清可用于检验人类精液斑。现将讨论 P~(30)的有关文献综述于后。     

单克隆抗体酶联免疫吸附抑制试验测定精斑G2m（n）因子

人类免疫球蛋白同种异型(human immunoglobulin allotypes)包括Gm、Km及Am等系统.在法医学实践中可用于个人识别和亲子鉴定.关于人精液中同种异型因子的检测报道极少,我们应用抗G2m(n)因子的检测国内外均未见报道,我     

单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞的研制及应用

<正> 本文报道根据反向间接血凝(RPHA)原理,用单克隆抗A、抗B、抗H抗体分别在合适的pH值醋酸盐缓冲液中,致敏醛化人“O”型红细胞,制得单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞。用来检验人体液斑的ABH血型物质。单克隆抗A、抗B、抗H指示红细胞对相应分泌型人唾液的凝集效价为8192倍、4096倍     

异源人工授精(AID)法律问题之研究

人工授精是指用人工的方法将精液直接输入子宫,使精子与卵子相会,导致妇女怀孕的非自然生殖技术。具体可分为:同源(同质)人工授精,即使用丈夫的精液(AIH)和异源(异质)人工授精,即使用非丈夫的精液(下称AID)。利用AID是因为男子不育,有严重的遗传病或精子缺乏等。AID技术对人类生殖领域的冲击、无疑具有革命性的意义,它的出现将人类的自身生产分裂为用技术繁殖和自然生殖两大类。但问题的复杂性不仅仅在于此,而是AID引起的一系列法律后果。     

第七讲 常见法医学物证检验(续)

<正> 三、血液之外的其它体液检验血液之外的其他体液,如精液、尿液、汗液、唾液等在犯罪现场也可出现,其中尤以精液最为常见,因此我们着重介绍精液检验。(一)精液(斑)检验精液是精子和前列腺、精襄等分沁液的混合物。精子是精液的主要成份(病症和手术除     

阴道斑型物质特性初探

<正> 目前,在性犯罪的两性分泌物中,对精液(斑)的研究及理化特性已有一定的揭示,但对阴道分泌物(斑)的研究至今报道甚少。作者应用凝胶层析方法,对阴道分泌物中型物质的某些特性作了些探索,并与精斑、混合精斑进行比较。现报道如下。     

胶乳凝集试验及其在精斑检验中的应用

<正> 精斑检验在鉴定法医学性犯罪案件中有很重要的作用,精斑确证试验的方法主要有:形态学方法、化学方法、生物化学方法及免疫学方法。这些方法各有其优点和一定的局限性,目前仍较多地采用精子检出法和抗人精液血清琼脂双扩,而输精管结扎术者及精子缺乏症者其精斑中无精子,抗人精液血清特异性不够好便难以检出。近几年来用特异性抗-P30血清作     

100例健康人精液中P30含量的检测

<正> P30是人精浆中的一种特异蛋白,是由前列腺分泌随精液排出体外的一种糖蛋白,分子量约30,000。P30具有良好的种属和人体器官的特异性,仅存在于人精液中,所以近年来国外已把检出 P30做为确定人精液的一种可靠的方法。P30在人精液中的含量国外已有报道,但中国人精液中的含量至今未见