分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。     

分泌抗人精子单克隆抗体的鼠—鼠杂交瘤

<正> 为了获得可用于检验性犯罪案件中人类精斑所需的特异性抗人精液血清,我们建立了生产抗人精子单克隆抗体(SMAB)的杂交瘤技术。将BALB/C小鼠的Sp2/o-Ag14骨髓瘤细胞与用洗涤人精子免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合。192个融合孔中,171孔有杂交瘤细胞生     

分泌抗人精子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

建立两株分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株G_8与E_(10),采用洗涤人精子免疫Balb/c小鼠,取免疫脾与Balb/c小鼠的Sp2/0骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞诱生腹水的方法。Elisa,IIF或酶标抗体免疫组化法结果发现,G_8与E_(10)单抗与人精子(射出精子、睾丸、副睾管及输精管中的精子)及睾丸各级生殖细胞均发生反应;与人甲状腺上皮细胞、肾小管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞以及胰岛均发生不同程度的交叉反应,与其他33种人体正常组织、9种人体液与分泌液、8种不同种族的动物精子均不发生交叉反应,说明在一般情况下这两种抗体可用于鉴定人类的精液斑以及精液与阴道分泌液的混合斑。两种单抗与人精子的顶体部、赤道部、后核帽、颈部及中段结合,证明精子特异性表面抗原分布于这几个区域。两种抗体均属IgG_1,G_8与E_(10)抗体的效价分别为1:512与1:1024。     

巴比妥单克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的建立抗巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗巴比妥单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法将巴比妥分子环状丙二酰脲环上氨基引入活性羧基,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,得到完全抗原BAR-KLH和BAR-BSA,并用紫外分光光度计鉴定。用BAR-KLH免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗巴比妥单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备巴比妥单克隆抗体,饱和硫酸铵法、亲和层析法纯化,并进行免疫学特性鉴定。结果完全抗原偶联成功,其偶联率为30∶1;筛选出1株杂交瘤细胞命名为5C6,其产生的单抗效价为1∶6.4×104,属于IgG1/kappa,抗体亲和力常数为2.27×108L/moL。纯化后的巴比妥单克隆抗体用ELISA法检测其灵敏度为130ng/mL,并与其他7种镇静催眠类药物交叉反应率小于1%。结论本研究制备的杂交瘤细胞株5C6分泌的抗体具有高特异性和灵敏度。     

高特异性三唑仑代谢物单克隆抗体的制备

目的建立分泌抗三唑仑代谢物α-羟基三唑仑单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备高特异性的三唑仑代谢物单克隆抗体,为三唑仑及其代谢物免疫分析方法的开发奠定基础。方法在三唑仑分子的6位苯环对位上引入活性氨基基团,然后通过缩合反应分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)相偶联形成完全抗原。以三唑仑-KLH免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,筛选等杂交瘤技术建立稳定的分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。纯化后的单克隆抗体,分别用SDS-PAGE电泳法、间接ELISA法和胶体金免疫层析法对其纯度、效价及灵敏度和特异性进行测定。结果获得3株能稳定分泌三唑仑代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G4,4B2和5H6。2G4和4B2抗体只与三唑仑代谢物α-羟基三唑仑有反应,灵敏度分别为500ng/mL和750ng/mL。与其他参试物无交叉反应。因5H6抗体为IgM,考虑到纯化难度和实际应用的限制,暂未做深入研究。结论本研究制备的2G4和4B2单克隆抗体仅识别三唑仑代谢物α-羟基三唑仑,具有高度特异性和灵敏度。     

抗人N单克隆抗体的制备及其特性的研究

用ON型人红细胞免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌IgM类抗人N单克隆抗体杂交瘤细胞株(ON_1D_3)。其培养上清液抗体效价为128～256,诱生小鼠腹水的抗体效价为8192;与Panel A红细胞反应呈抗N特异性;检测273名成人红细胞,只特异性凝集N(?)MN型人红细胞,不凝集M型红细胞。与猴等9种动物红细胞无交叉反应;酶修饰试验结果表明,ON_1D_3识别的抗原决定簇是唾液酸依赖性的。     

抗丁丙诺啡单克隆抗体的制备

目的建立抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备高特异性的丁丙诺啡单克隆抗体，并对其免疫学特性进行鉴定。方法在丁丙诺啡的分子上连接活性羧基基团，通过缩合反应将丁丙诺啡半抗原连接于血蓝蛋白（KLH）和小牛血清白蛋白（BSA），形成完全抗原。以完全抗原免疫Balb／c小鼠，通过细胞融合，筛选等杂交瘤技术，建立稳定的分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过腹腔注射杂交瘤细胞，诱导小鼠产生含有单抗的腹水。用辛酸-硫酸铵加亲和层析法纯化抗丁丙诺啡单克隆抗体。采用酶联免疫反应和胶体金膜层析实验测定丁丙诺啡单抗的特异性以及免疫反应动力学参数。结果共获得3株分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为7E6，6G4和3C2。7E6，6G4抗体灵敏度为10．0ng／ml，3C2抗体灵敏度为20．0ng／ml。7E6，6CA和3C2抗体的亲和常数分别为3．6×10^-9 mol／L，4．3×10^-9 mol／L和6．3×10^-9 mol／L。特异性测试结果表明7E6和6G4抗体与40种药物、毒品无任何交叉反应，而3C2抗体与吗啡有交叉反应。结论杂交瘤细胞株7E6和6G4产生的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有很高的特异性和灵敏度。     

抗人精单克隆抗体A_(10)C_6特异性的研究

用作者实验室生产的单克隆抗体A_(10)C_6建立了反向间接血液试验(RPHA)方法。经检测人精液标本,发现其对人精液有100％的阳性反应,而对猪精液、牛精液、人乳汁、人阴道分泌物、人唾液等均呈阴性反应,证明了它对人精液较高的特异性。RPHA方法简便、灵敏、可靠,所用检材量少,有较高的应用价值,特别适于基层应用。     

人类A、B抗原单克隆抗体的研制和初步应用

作者用人类A、B型红细胞及A、B型分泌型唾液免疫8周龄的BALB/C小鼠,用经免疫的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,用血凝法筛选出分泌抗A抗体和抗B抗体的细胞株各3株。经一年多的传代,仍然能稳定地分泌抗A、抗B抗体,抗体特异性专一,培养上清液效价能达到2048倍,并初步应用于血液及体液(斑)的检验。     

分泌抗人红细胞膜单克隆抗体细胞株的建立

以人的红细胞膜为抗原，采用选择性免疫抑制的程序，免疫BALB／C小鼠。经免疫的小鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝法筛选出3株分泌抗人红细胞膜种属特异性单克隆抗体的杂交瘤，即M1A7C4．M3A5B7和M3D9F1。连续传代2个月及复苏冻存半年的杂交瘤，仍能稳定地分泌抗人红细胞膜单克隆抗体。初步鉴定证明：该抗体具有稳定的种属特异性，可鉴别人与其它动物，特别是猴的红细胞，不与己知的血型特异性成分交叉，可凝集成人及脐带血的红细胞。     

抗人精液血清特异性的研究

确证精斑常用抗人精液血清作沉淀反应。这种抗血清特异性差,常与人类某些体液发生交叉反应,以致精斑确证试验结果不可靠,影响鉴定结果的准确性。作者用人类精子、精浆、精液与人类精浆特异性抗原p30分别免疫家兔,制备各种抗血清,用环状沉淀、琼脂双向扩散及免疫电泳等技术对这些抗血清的特异性进行了研究,报道如下。     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研制及初步应用

本研究在用人A型红细胞悬液免疫BaIb/C小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞融合屡次失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株:3B_2、2H_2、8C_3细胞株。这些杂交瘤细胞可持续分泌抗A单克隆IgM类抗体。     

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。     

H2O2诱导PC12细胞凋亡前后miRNA的变化及探讨

目的用微小RNA(miRNA)基因芯片技术检测H2O2诱导凋亡的PC12细胞和正常PC12细胞miR-NA的表达谱差异。方法分别以不同浓度的H2O2处理PC12细胞12h,用MTT和流式细胞仪检测处理后细胞的生长活力和凋亡情况;分别提取A(0浓度H2O2处理组)和B(400nmol/LH2O2处理组)PC12细胞的miRNA做miRNA基因芯片检测。结果以A组作为对照,30、50、100、200、400nmol/L的H2O2处理的PC12细胞生存率分别为(92±9.80)%、(90±14.70)%、(80±13.85)%、(54±12.33)%、(22±7.35)%(P<0.01);0、30、50、100、200和400nmol/L的H2O2处理的PC12细胞早期凋亡率分别为2.6%、5.2%、7.2%、10.4%、16.6%、72.2%;在样品A中共筛选出68个有效表达的miRNA分子数据,在样品B中筛选出46个有效表达的miRNA分子数据,两者样品中均检测到有效表达的miRNA分子有39个,其中与样品A相比,在样品B中显著性下调表达的有6个。结论为脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡的机制和治疗的研究提供了理论依据和新的研究思路。     

单克隆抗M、抗N抗体的制备和应用

<正> 把用生理盐水洗涤5次的新鲜人ON型红细胞和纯化的血型糖蛋白A分别免疫BALB/C小鼠,用免疫的脾细胞同SPZ/O骨髓瘤细胞进行融合。37℃培养10～15天后,用ON型和OM型红细胞检测每个培养孔里培养基上清的凝集情况,建立了分泌高特异性和高效价的抗M和     

ABO基因分型与多重STR联合检测在法医学中的应用

目的建立ABO基因型和Goldeneye16A试剂盒联合检测的方法,并评价其在法医学实践中的应用价值。方法将6种ABO基因型(A/A,A/O,B/B,B/O,A/B,O/O)的序列特异性引物(PCR-SSP)检测方法与Goldeneye16A试剂盒相整合进行同步分型。通过对460份男性个体血痕样本、9947A DNA及90份案件样本进行检测,考察方法的一致性、灵敏度及对法庭科学检材的适用性。结果应用本文方法可同时检出6种ABO基因型和15个常染色体STR基因座及性别决定基因座,检测灵敏度为125pg,其中ABO基因检测灵敏度达63pg。460份男性血痕和90份案件检材证实该联合分型方法用于各类检材结果准确、稳定。结论本文ABO基因分型与多重STR联合检测方法,适用于各类含有核细胞的生物检材,在法庭科学DNA鉴定中有较好的应用前景。     

分泌抗人类血型-H抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株建立及初步应用

应用杂交瘤技术,建立了两株分泌抗 H 的单克隆抗体细胞株 H_(2-6)H_8和 B_(2-5)D_9。经体外培养半年以上,生物学性状稳定。两株细胞分泌的抗体属 IgM 类,特异性识别 H 型物质,与几种常见动物的红细胞无交叉反应。培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达1024倍和1.28×10~5倍,可用在中和试验、免疫斑点法中,在实际办案中应用理想。     

用等电聚焦酶免疫技术检测人精液（斑）的ORM表型

作者用等电聚焦酶免疫技术从人精液(斑)中检出了 ORM 表型。10份精液的 ORM 表型分别与其配对血清表型一致。4℃存放50天的精斑全部能正确定型,室温存放的精斑100%正确分型的最长时限为30天。本研究为法医学性犯罪案件精斑个人识别提供了新手段。     

制备抗人精液特异蛋白P30血清的研究

作者以精浆特异蛋白P30为抗原免疫新西兰白兔、豚鼠和鸡三种实验动物,制备了抗P30血清。用双向琼脂扩散法检测兔和豚鼠的抗 P30血清,其特异性和敏感性均达到目前国外同类产品的水平。抗 P30血清与阴道分泌物,血清、唾液、尿液、初乳以及羊精液、鸡精液均不出现交叉反应。用抗 P30血清检测混合的人精浆,其抗原效价为1:160;P30含量可测到12.5ug/ml。在三种动物的抗血清中,豚鼠抗 P30血清的抗体效价最高。以不同浓度的 P30测豚鼠、兔和鸡抗 P30血清抗体效价豚鼠平均滴度可达52.50,兔次之,鸡的抗 P30血清最差。经作者制备的抗 P30血清可用来确证精液。     

免疫酶斑点法同步检测人精液中P30及ABH物质的研究及其应用

本文用免疫酶斑点法同步检测人精液中前列腺特异性抗原P30及ABO血型,并与常规的精子检出法和中和法进行比较。结果表明用免疫酶斑点法同步检测人精液申特异蛋白P30和ABO血型,可以替代常规的精子检出法和中和法在实际检案中应用。