猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——牛肾细胞培养及其生物学性状的观察

用牛肾上皮细胞培养猪瘟兔化弱毒,生长繁殖良好,并不断从细胞中释放出来,猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,不引起肉眼可见病变,用免疫荧光法可在接毒后6小时从胞浆中发现特异性荧光,接毒后18小时,可用家兔在细胞培养物中检出病毒。用带毒细胞传代,能促进兔毒在牛肾细胞上的适应能力,细胞传代后经3个多月培养,其间多次换液,不接毒,细胞收液的病毒滴度可稳定的达到1:20000,用盖玻片作带毒传代细胞单层培养,用姬姆萨染色镜检,可在许多细胞浆中发现原生小体样紫色颗粒,用H·E染色,可在胞浆中发现嗜伊红包涵体样颗粒,初步认为猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上培养,可产生包涵体。用牛肾细胞大瓶旋转培养猪瘟兔化弱毒,能生产疫苗,并可多次接毒、收毒,收毒次数达20余次,疫苗毒价可达1:50000,少数批次可达1:100000,对猪有良好免疫力,本试验1987年10月在云南生药厂已完成中试生产,先后冻干疫苗5批,一次效检50000倍合格的占80％,20000倍合格的占20％,各项检验指标符合规程要求,区域试验注射各种猪只40000余头,证明安全有效,疫苗在-18～-20℃保存1年,未见毒价下降。     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——以免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒在牛肾细胞上繁殖释放过程观察

文献记载,猪瘟病毒的自然感染谱只限于猪属动物。在实验条件下能使不同家畜和实验动物感染,并能在多种动物细胞中繁殖,但在牛肾细胞上的繁殖、释放情况未见报告。设想如能用牛肾细胞培养猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒),并掌握其繁殖释放过程,对研究猪瘟牛肾细胞疫苗将具有重要     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——猪瘟病毒在牛肾细胞上的培养及影响毒价因素的观察

用免疫荧光法对猪瘟兔化弱毒(以下简称兔毒)在牛肾细胞上繁殖释放过程的研究证明,兔毒虽然能够在牛肾细胞上繁殖释放,但接毒后96小时,感染细胞量仅50％,培养物中毒价甚低。为此,我们对猪瘟兔毒在牛肾细胞上的培养及提高其毒价和影响毒价的因素进行了探讨。     

口蹄疫A型细胞组织培养弱毒疫苗、细胞组织培养兔体反应弱毒疫苗的研究——1972年工作总结

对6个半月～7个月及8个半月的免疫持续期试验,我们采用仔猪肾上皮细胞毒120代(病毒滴度=10~(-7.5))又连续适应3～4日龄乳兔三代,乳兔在接种后36～40小时出现典型口蹄疫症状,规律死亡。取其乳兔肌肉组织毒,制10％含毒量的甘油苗(病毒滴度=10~(-7.0)),该疫苗(7102批)在甘肃省成县红川公社、南康公社进行区域实验(该地区从1962年至今未发生过口蹄疫,也未注射过口蹄疫疫苗)。注射黄牛670余头,注苗6个半月～7个月及8个半月分别运回试验牛只,进行强毒攻击。所用强毒为牛源强毒A型44代,病毒滴度=10~(-7.0)     

猪瘟兔化弱毒牛肾细胞疫苗的研究——带毒细胞传代及其适应能力的观察

前报试验结果表明:猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,能大量释放病毒,收液含毒滴度的高低与种毒的质量和用量有密切关系,接入大量良好的种毒,毒价可稳定地达到20000～50000倍合格的要求,降低种毒质量和用量,毒价随之下降,毒价的起伏,似乎又说明猪瘟病毒在牛肾细胞上培养,并未完全适应。为了了解病毒在牛肾细胞上的适应情况,提高病毒的适应能力,我们试图通过带毒细胞传代进行观察,同时探索带毒细胞培养及产毒能力。鉴于8305批等几批细胞经过长期离体培养和多次接毒、收毒,仍能正常繁殖,所以选用8305批细胞(以下简8305)进行了上述试验观察,其结果报告如下。     

猪传染性水泡病细胞毒灭能疫苗的研制

在猪水泡病仔猪脏器灭能苗试制成功的基础上,我们开展了细胞毒灭能苗的研制工作现对前一阶段工作作一简单的小结。 一、细胞系的选择 (一)用猪水泡病资阳系乳猪30代毒(ZYP_(30))接种PK-15和IB-RS-2两个猪肾传代细胞系的单层细胞,连续适应3代后,获得了在PK-15细胞系上适应3代的ZYP_(30)PK_3和在IB-RS-2细胞系上适应3代的2YP_(30)RS_3两个细胞毒。分别用同源细胞测定这两个     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞旋转培养制造冻干苗的试验

为了克服用仔猪肾细胞生产猪瘟弱毒潜在致病的危险性,弥补猪瘟兔化弱毒乳兔苗大量剖杀动物成本高,不易控制污染的缺点,1981年11月我们开始把初生犊牛肾细胞用于猪瘟兔化弱毒培养试验,结果证明,猪瘟兔化弱毒可以在犊牛肾细胞上连续增值,猪兔效力平行试验效果良好,但是细胞产毒不稳定。1982年11月我们又开展了初生犊宇睾丸细胞培养猪瘟弱毒的试验,通过2年研究,解决了影响毒价的关键问题。于1984年11月,转入中试验阶段。     

猪传染性水泡病组织培养弱毒疫苗的初步研究——第二报

猪传染性水泡病(简称水泡病,下同)上海北新泾系地鼠肾组织培养弱毒疫苗,室内外安全与效力试验结果表明,虽然对猪有一定的免疫力,但安全性不够稳定,细胞毒某些代数对猪的反应率较大并发生同居感染。为解决弱毒苗的安全性问题,我们将水泡病秦皇岛系猪蹄部水泡皮毒适应2～3日龄小白鼠,连续传代致弱,待鼠毒对猪失去致病力后,再将鼠毒在仔猪肾上皮细胞中传代,试制组织培养弱毒疫苗。     

猪瘟免疫抗体监测报告

为证实猪瘟疫苗免疫后实有抗体,将猪瘟兔化弱毒乳兔苗(下称乳兔苗)及猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗(下称细胞苗),用中和试验(SN)及猪瘟间接血凝试验(IHA)监测,结果报告如下。(一)材料与方法1.用农业部成都药械厂(下称本厂)生产的乳兔苗,在母猪空怀时以4头剂(600个免疫量)免疫,其所产亲代仔猪,于50～60日龄时,再以细胞苗750个对兔感染量(即部颁规程1头剂)免疫接种,俟免疫持续期至6～10个月,取血清作SN及IHA测定。     

猪传染性水泡病细胞弱毒疫苗试制试用

猪传染性水泡病在我国流行至今没能彻底控制。根据农林部提出用组织培养法生产疫苗的科研任务,我们在学习推广上海龙华四系鼠化弱毒疫苗的基础上,1974年底开展用国外引进的IB-RS-2猪肾传代细胞制取龙华毒细胞弱毒苗的研究。两年来,通过一系列试验,在北京郊区试用,1975年和甘肃省兽药厂协作,在大生产条件下,取得用大转瓶旋转培养试制     

口蹄疫A型细胞组织培养弱毒疫苗、细胞组织培养兔体反应弱毒疫苗的研究——对黄牛安全及效力试验

A型细胞组织培养弱毒(即APK弱毒株),在培育过程中,曾先后多次用猪作过安全和免疫试验;根据注射同批苗对乳猪的试验(13日龄哺乳猪),接种2.0毫升,其中2头各三蹄出现水泡,观察14天,没有发现死亡。将细胞毒通过乳兔造苗(含毒10％)接种带仔母猪,剂量为6.0毫升,在观察14天中,鼻镜、上唇、四蹄、乳房均无反应。对50～60天的     

口蹄疫单层细胞组织培养疫苗的研究——仔猪肾上皮细胞组织培养疫苗(对仔猪二)

(一)种毒:适应仔猪肾上皮细胞的A型35代细胞毒。TCID_()50=10~(7.25) (二)疫苗:制铝胶苗及甘油苗两种,病毒含量为50％,方法见第一报。 (三)安全性、免疫性试验:所用疫苗为APKF_(35)铝胶苗及APKF_(35)甘油苗,测其安全性、免疫性及保存期,供试验的猪只从宁夏买来,健康,50天左右,猪只大小不等营养状况不均。     

牛口蹄疫Asia Ⅰ型灭活疫苗研究--疫苗效力、免疫持续期及安全性等检验

用选出的制苗用种毒AsiaⅠ L/96的不同代次BHK-21细胞传代毒试制疫苗3批,共13.1 L,在室内用健康牛进行了效力试验,保护率均达100%(5/5、5/5、5/5),对照牛全部发病(3/3、3/3、3/3);免疫持续期测定2批次,免疫后6个月的牛血清中和抗体效价为120-1120,8个月为18-160,经强毒攻击保护率达65%;保存期效力试验2批次,在2-8℃保存1 a,对该疫苗的效力无影响;最小免疫剂量为每头3 mL,注射免疫牛2322头,安全性良好,无不良反应.     

轮状病毒弱毒疫苗田间效力试验

1981年,我们在乌兰县从剖检3～7日龄下痢羔羊采集肠道及其内容物,进行细胞培养分离,获得了引起初生羔羊腹泻的轮状病毒,后经犊牛肾初代细胞培养高代次低温致弱,获得了轮状病毒弱毒株,用于制备弱毒疫苗。1988～1989年,用该疫苗在乌兰县赛什克乡进行田间效力试验,取得了较好效果。(-)材料     

疫苗用犬瘟热弱毒株毒力返祖试验

以10代犬瘟热病毒(CDV-XN112)弱毒株第5代细胞种毒接种30日龄健康犬,对其遗传稳定性、安全性进行试验.结果表明,CDV-XN112毒株连传3代,接种犬临床无任何异常,精神、食欲、体温均正常;解剖后检查,肺门淋巴结、肝、肾、心、脾、肠也无组织病理学变化,血样电镜观察到较多典型CDV病毒粒子,TCID50达10-4.5,用此病毒接种MA-104Vero细胞单层,产生典型细胞病变(CPE).     

猪水泡病、猪瘟二联苗研究报告

猪传染性水泡病、猪瘟均为病毒性急性传染病,是国家规划要求防制的重点和消灭对象。采用猪水泡病鼠化弱毒疫苗(以下简称猪水泡病鼠化苗)和猪瘟兔化弱毒疫苗(以下简称 瘟兔化苗)预防免疫亦经科学实验和防疫实践证明是安全、有效的防制措施。我省推广猪水泡病鼠化苗以来对防制猪水泡病起了显著作用,但又出现与其他猪病的预防注射(如猪瘟,猪丹毒、猪肺疫等)争时间、争人力、争物力的矛盾,广大贫下中农,基层兽医迫切要求改     

牦牛传染性鼻气管炎病毒85-Y株回归本动物试验

1985年12月我们从病牦牛的眼、鼻分泌物中分离到一株有致细胞病变能力的病毒,经血清学鉴定,初步认定为牛传染性鼻气管炎(IBR)病毒,并定名为85-Y毒株。为明确IBR病毒85-Y毒株对牦牛的致病性,进行了回归本动物试验。 材料与方法 (一)细胞 按常规方法制备犊牛肾(BK)继代细胞供种毒传代、毒价测定、病毒回收与鉴定。 (二)种毒 取85-Y毒株第6代冻干毒(-20℃下保存150天,毒价10~5TCID_(50)/ml)按常规方法在BK细胞上连续传4代作为种毒,经-20℃～37℃冻融3次后用于接种牦牛,同     

新型猪瘟疫苗的研究和应用前景

猪瘟 (ｓｌａｓｓｉｃａｌｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ,ＣＳＦ)以出血和发热为主要特征 ,呈急性或慢性经过 ,是一种对猪危害性极大的传染病[1] ,被国际兽疫局 (ＯｆｆｉｃｅｏｆＩｎｔｅｒｎａ ｔｉｏｎａｌｄｅｓＥ’ｐｉｚｏｏｔｉｅｓ,ＯＩＥ)列为Ａ类动物传染病。在世界许多国家和地区 ,传统疫苗接种是控制猪瘟的重要手段。目前使用的弱毒疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本ＧＰＥ疫苗和法国的Ｔｈｉｒｅｖａｌ疫苗[2 ] 。我国的猪瘟兔化弱毒疫苗性能稳定、安全、免疫效果好 ,且无残留能力 ,是国际公认的唯一安全有效的弱毒疫苗 ,亦是国内…     

口蹄疫A型细胞组织培养弱毒疫苗,细胞组织培养兔体反应弱毒疫苗的研究——对黄牛安全、效力和对纯种奶牛安全试验

(一)疫苗制造:用细胞组织培养弱毒(即APK弱毒)60代制苗,病毒滴度10~(-6.5),含病毒50％,甘油40％,汉克氏液及1％硫柳汞10％,pH=7.6～7.8,疫苗经无菌检查合格(厌气肝汤、普通肉汤、琼脂斜面培养5天无细菌生长),疫苗注射成年小白鼠(皮下接种0.3毫升,腹腔接种0.3毫升各3只),成年家兔2只皮下接种3.0毫升,观察7天,均无死亡为合格。注射剂量为成年黄牛臀部肌肉注射2.0毫升,1～2岁犊牛臀部肌肉注射1.0毫升。     

同一份组培细胞繁殖(复制)两种病毒的研究

用同一份仔猪肾组培细胞先繁殖猪瘟病毒(中国猪瘟兔化弱毒),再繁殖口蹄疫O型病毒,猪瘟组培细胞毒兔检可达5 ×10~4ID/1毫升。O型口蹄疫细胞毒鼠测毒价可高达≥10~(8·5)“MLD_50/0.1毫升。 被猪瘟病毒感染后的细胞不发生细胞病变(cpe),大量繁殖猪瘟病毒后的细胞(即3～5次收毒后的细胞),再感染口蹄疫O型病毒,细胞病变率几乎达100％。从而说明猪瘟病毒与口蹄疫O型病毒是可以先后在同一份细胞内复制的。