实验感染山羊伊氏锥虫病血清蛋白组份动态变化的研究

用伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)腹腔接种8只健康山羊,定期采血,分别用双缩脲法和醋酸纤维素薄膜电泳法分析血清总蛋白及其各组份的动态变化。结果表明:血清总蛋白含量感染前后及与对照组相比差异不显著(P>0.05)。而血清蛋白中的各组份的比例实验前后具有明显地变化。各组份均具有明显的动态变化;血清白蛋白(A)呈明显的下降趋势(P<0.001);β球蛋白亦呈明显的下降趋势(P<0.001);γ球蛋白呈明显的上升趋势(P<0.001)。被感染的8只山羊在57天的血液压滴镜检中未见虫体,但第33天采血接种小白鼠,可使其发病死亡,血液压滴镜检有大量锥虫。     

锥虫病和肝片吸虫病双联诊断液的研制

我们曾先后研制了锥虫病,肝片吸虫病单能诊断液,并已用于耕牛上述疾病的普查。之后根据在同一红细胞上可以附载多种抗原测定多种抗体的原理,又进行了锥虫和肝片吸虫两病双联诊断液的研制。 (一)材料与方法 1.抗原制备 (1)锥虫抗原制备:取液氮保存的锥虫,用大白鼠增殖,待虫体达高峰时放血、离心,取棕黄层细胞,过DEAE纤维素柱分离虫体。将纯净虫体冻融后超声波处理、离心,取上清液作抗原,低温保存备用。     

应用伊氏锥虫毛细管集虫直接镜检法普查牛锥虫病

前文(中国兽医科技,11,38～40,1987)报道,伊氏锥虫毛细管集虫直接镜检法(下简称集虫法)简便、快速、检出率高,既可用于临床诊断,又可用于流行病学调查。在此基础上,我们应用该法和间接血凝试验(IHA)进行牛伊氏锥虫病的普查,进一步考核和证实了其实用价值,并对镜检方法作了改进。现将结果报告如下。     

布氏锥虫伊氏亚种体外药敏试验

应用布氏锥虫伊氏亚种(Trypanosoma brucei evansi,T.b.e)体外药敏试验系统检查了国内6个T.b.e虫株和国外布氏锥虫指名亚种(T.b.b)对苏拉灭(Suramin)、贝尼尔(Berenil)、安锥赛(Antrycide)、咪唑苯脲(Imidocard)和硫胂聚氰胺(Cymelarsan)等5种抗锥虫药的敏感性。结果表明,该系统能准确测定不同虫株对各种药物的敏感性,与小鼠治疗试验结果基本相符,发现了国内抗贝尼尔和苏拉灭的T.b.e虫株。     

分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤株的建立

本试验以DEAE纤维柱层析法从感染小鼠血液中分离得纯净锥虫,再通过超声乳化,制备锥虫可溶性抗原,用其免疫BALB/c小鼠,再以此BALB/c小鼠脾细胞与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,采用Dot-ELISA和间接ELISA法筛选出7株分泌针对伊氏锥虫的单克隆抗体的杂交瘤株(IH_(10)、AE_7、EB_6、BE_5、AG_(11)、BA_5、GB_6),实验结果表明,间接ELISA和Dot-ELISA符合率良好。分泌的7种克隆抗体有5株属于IgG_1,2株属于IgG_(2a);用阴性血清封闭试验及交互抑制试验证实7株单抗都是针对伊氏锥虫的,并证明是针对不同决定簇的。     

分泌抗布氏锥虫群共同抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用DEAE-纤维素分离的布氏锥虫伊氏亚种JG克隆株虫体按Segura 氏法制备抗原,常规免疫BALB/c鼠、融合、筛选和克隆。筛选时除使用免疫抗原外,还使用按同法制备的我国不同地区分离的3株布氏锥虫伊氏亚种(JX、ZJ、GY株),1个布氏锥虫马媾疫亚种虫株和培养的1株布氏锥虫指名亚种发育前期型虫体的抗原,以及泰氏锥虫和弓形虫抗原。共获得8个杂交瘤细胞株(4A_(11)、2D_6、5C_8、2E_3、1H_8、1C_9、1F_(11)、4F_6。它们分泌的单克隆抗体与泰氏锥虫、弓形虫抗原均无反应。4A_(11)、2D_6在ELISA和间接免疫荧光试验中只与免疫克隆株抗原反应。其余6株在ELISA中不仅与免疫株抗原反应,而且与其他锥虫虫株抗原呈明显交叉反应,免疫荧光试验则全部阴性。在ID试验中,1C_9、1F_(11)腹水与上述6种抗原呈现明显沉淀线,另6株则均无反应。4A_(11)和2D_6是针对伊氏锥虫群JG克隆株特异抗原,而5C_8、2E_3、1H_8、1C_9、1F_(11)、4F_6则是抗布氏锥虫群共同抗原。     

骆驼伊氏锥虫的超低温保存

骆驼伊氏锥虫在液氮中(-196℃)超低温冷冻保存国内尚未见有报道。伊氏锥虫通过实验动物(豚鼠、大白鼠、小白鼠、狗等)继代保虫,病原性有逐渐表现增强或减弱的趋向(郑策平:家畜锥虫病,上海科技出版社,1965年)。根据我们连续通过小白鼠继代10个月的观察,觉得毒力略有增强。为了避免长期连续传代使虫体毒力发生变异,节约人力、物力和时间,根据冷冻保存不会导致遗传突变和染色体损伤这一原理,我们进行了伊氏锥虫液氮内的冷冻保存试验。     

应用离子交换捕捉电镜技术观察动物类冠病毒

(一)材料和方法 1.样品处理:把采自腹泻牛、猪及貉子的粪便,制成10～20％悬液,低速离心,将其上清液直接滴附在碳-福尔马(Formvar)膜或取其上清液1ml,加4滴磷酸氢钙饱和液吸附,低速离心,弃上清,取沉淀,加1μl乙二胺四乙酸二钠(EDTA)饱和液,使磷酸氢钙溶解,将其溶解液滴附在碳-福尔马膜上,用2％磷钨酸(PTA)负染,电镜观察。     

伊氏锥虫同工酶的研究

本文对我国5株伊氏锥虫的5种同工酶进行了初步研究。应用琼脂糖凝胶电泳技术检测了5株伊氏锥虫的苹果酸脱氢酶(MDH)、L-苹果酸辅酶Ⅱ氧化还原酶(ME)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、葡萄糖磷酸异构酶(GPI)和已糖激酶(HK)。5株伊氏锥虫的MDHME同工酶谱均相同,而G6PD、GPI和HK的同工酶谱显示出差别。分析表明,尽管某些同工酶谱存在着差异,但从总体水平分析,这些伊氏锥虫同工酶谱仍具有较高的相同性,属同源种群。     

唾传锥虫脊椎动物型的体外培养

(一)研究历史 唾传锥虫体外培养技术的发展可分为三个阶段。从1903年Novy和MacNeal首次培养布氏锥虫指名亚种(Trypanosomabru-cei brucei,T.b)至1976年,为第一阶段;此期间只能培养T.b和刚果锥虫(T.con-golense,T.con)无感染性的前循环型。1977～1985年为第二阶段。1977年Hirumi等以有哺乳动物细胞滋养层的培养系统培养T.b.脊椎动物型取得成功,这一突破是唾传锥虫体外培养进入迅速发     

伊氏锥虫 布氏锥虫和马媾疫锥虫对锥46的药敏试验

在我国,伊氏锥虫病流行 极广,达二十多个省区,对畜牧业生产危害极大。长期以来,伊氏锥虫病的治疗主要依赖为数甚少的几种药物,导致抗药虫株的产生,从而给该病的防治带来新的困难(沈杰等,1991;方元等,1992),急待高效新药产生。为了解决这一问题,上海家畜寄生虫病研究所与上海医药工业研究院合作,成功地合成、筛选了一种抗锥虫新药——雄46(T46)。确定伊氏锥虫对其的药敏性,为锥46的临床应用奠定合理的用药理论基础是十分必要的。本试验通过体内(小鼠治疗)和体外(人工培养)的方法检测了伊氏锥虫布氏锥虫和马媾疫锥虫对锥46的敏感性。     

猪锥虫病

在北美洲,至今还没有报道过来自猪体的致病的锥虫(Trypar osomes)。五种锥虫已发现于其他国家,主要是非洲、南美洲及印度。对于这些锥虫的传播媒介和储存宿主的考察,证实这五种锥虫在北美洲是存有的,防止这些锥虫通过传播带入猪体是很重要的。 形态学 猪锥虫病是由锥虫属(Trypanosma)的一些锥虫所引起的一种疾病。这些锥虫扁平而细长,二端逐渐变细,一根长的鞭毛长在靠近虫体的后端,沿着体表向前延伸,形成一种波动膜并继续延伸超出虫体的前端成为游离的鞭毛。锥虫的体长因种而异,其范围是9     

DEAE纤维素纯化犬伊氏锥虫

从实验感染伊氏锥虫的犬颈动脉采得的虫血,经2500～3000rpm离心15～20分钟,所得的虫膜中混有大量红细胞、白细胞、血小板等,这些血液的有形成分严重影响着锥虫抗原的纯度。我们采用DEAE纤维素层析法分离出较纯净的锥虫,用于制备间接血凝诊断液,提高了血清学试验的特异性。     

细菌活体染色法

通常用悬滴标本镜检法、暗视野标本镜检法及压滴检查法,来观察某些细菌的固有运动、直进和蛇形运动,但用这些方法只能看到细菌的运动,而看不清菌体的形态。作者多年来应用活菌染色法清晰地观察到某些细菌的运动和形态,认为此法对诊断有一定帮助。 (一)染色液的配制 取硷性复红7克、美蓝5克、结晶紫9克,三种色素分别加无水酒     

酶标记和间接血凝法对锥虫病牛循环抗体消长的测定

伊氏锥虫病的诊断过去主要依靠末稍血液内虫体的镜检方法,但伊氏锥虫在末稍血液中时隐时现,出没无常,除急性病例外,对亚急性、慢性及带虫者的诊断是较困难的。近年来随着免疫学研究的进展,对伊氏锥虫病的诊断也取得了很大的成绩。如沉淀试验(Bansal和Pathank 1971)、凝胶扩散(Draper 1976)、补体结合反应(Sabanshiev 1973)和荧光抗体技术(Kagan 1974)等法相继建立,均有一定的诊断价值。然而寻求一种更新的特异性     

Trypaidium对马伊氏锥虫病药效试验

Trypaidium是法国罗纳梅里厄公司研究生产的一种抗锥虫药物,据报道欧、亚、非洲许多国家已用于治疗牛、骆驼、羊伊氏锥虫病,疗效甚佳。为考察该药对马伊氏锥虫病的疗效,特进行了本试验。 (一)材料和方法 1.动物:马12匹,系湖北省钟祥县柴胡区当地品种,体重184～317kg,伊氏锥虫血清学检查阴性,未用过任何抗锥虫药物。购回后用左旋味唑驱虫,观察1周皮下接种京山县畜     

分泌锥虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其抗体的专一性分析

当前,锥虫病免疫诊断方法较多,但其特异性仍不够理想。为了提高免疫诊断特异性,Khler和Milstein(1975)首先创立了杂交瘤技术,为寄生虫病免疫诊断提供了新的手段。本文应用这一技术,筛选出11株能分泌稳定的锥虫单克隆抗体细胞株,并对其中1株的抗体专一性进行了分析。     

犬瘟热病的电镜诊断

我们采用电镜技术,对兰州市一例病犬的病料进行了观察,确诊了该犬患犬瘟热病。病料的处理 选取病变小肠一段,刮取肠粘膜约1g左右置乳钵中,加少量玻璃砂,充份研磨,在低温冰箱冻融2次,用0.1mol PBS液使其成20％的悬液,充份搅匀,用2000r/min离心20分钟,取上清液,再以3500r/min离心1小时,弃去上清液,将沉淀物用1～2滴双蒸水悬浮起。并将其滴附在有Formvar膜的载网上,吸附1分钟,以1％磷钨酸负染1分钟,再用泸纸条吸干多余的水份,干燥后电镜观察、     

浙、滇、皖伊氏锥虫株蛋白质及其抗原性的比较研究

应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernb-lot)对伊氏锥虫浙江株、云南株和安徽株的蛋白质及其抗原性进行了比较分析。研究结果显示三个锥虫株在蛋白质分子量、抗原性方面存在着较明显的差异。提示长期的地理隔离已使伊氏锥虫蛋白质抗原发生不同程度的变化。     

F-2毒素检测方法研究——离心薄层层析法检测

采用离心薄层层析仪分离真菌毒素,国内外尚未见报道。我们试用离心薄层层析法分离真菌毒素F-2,以便探索新的真菌毒素检测方法。材料与方法(一)仪器 ①LBC-I型离心层层析仪;②紫外线分析仪。(二)洗脱展开系统 ①甲苯:三氯甲烷:丙酮(To:TC:A 3:15:1 V/V/V);②三氯甲烷:甲基异丁酮(TC:MIBK 5:1 V/V)。