丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列,设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR,建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种(Mycoplasma mycoidessubsp.capri,Mmc)的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法只能对Mmc扩增出195 bp的片段,而对其他病原菌不能扩增出任何条带,它最低能够检测出10 pg的Mmc DNA,说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示,对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段,表明,该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。     

猪胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因的克隆及其原核表达

参照GenBank上登录的猪胸膜肺炎放线杆菌血清5 型菌株(AF363361)的apxⅠA基因序列设计了1对特异性引物,用PCR法扩增apxⅠA基因,获得了3 069 bp的片段,将其克隆到pMD 18 T载体,经酶切、PCR鉴定和序列分析,表明克隆是成功的。再将长为1 149 bp的apxⅠA基因的部分片段(编码ApxⅠ的N 端的片段)插入到原核表达载体pET 28(a)中,构建了重组表达质粒pET apxⅠA,转化大肠埃希氏菌JM109(DE3),在IPTG 诱导下获得了高效表达,经SDS PAGE检测,证实表达产物大小约为41 ku。     

猪传染性胸膜肺炎诊断与防治

１９９８年,兰州近郊某猪场先后两次发生猪疑似传染性胸膜肺炎,经过对发病情况调查、病理剖检、实验室诊断,确诊为嗜血杆菌和巴氏杆菌混合感染引起的猪传染性胸膜肺炎。１　发病情况该场共饲养不同年龄的猪３００多头,１９９８年１０月有３～９月龄猪３０余头突然出现呼吸困难、咳嗽、体温升高、食欲减少或废绝等临床症状,５ｄ内死亡４头。同年１２月,该场又有２５头中图分类号　Ｓ８５８．２８５．１　　收稿日期　１９９９－０１－２７猪发病,其临床症状与上次相同,１周内死亡６头。２　临床症状急性型：发病较急,体温４０．０…     

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法.通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL;37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1:320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1:15 000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min.待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性.特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查.     

胸膜肺炎放线杆菌APXⅡA基因的克隆及序列测定

用PCR法从胸膜肺炎放线杆菌 (APP) 7型的DNA提取物中扩增出大小为 2 873bp的APXⅡA基因片段 ;将PCR产物重组到质粒载体 pMD 18 T中 ,并对重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果表明 ,克隆片段为完整的目的基因 ,该片段的核苷酸序列与国外分离株M 30 6 0 2的同源性达 99.7%。     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (APP)外膜脂蛋白基因序列 ,设计合成了 1对特异性引物。经PCR扩增 ,APP 110标准血清型菌株均能扩增出大小为 980bp的DNA片段 ,而大肠埃希氏菌、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结果均为阴性。该方法检测APPDNA的敏感性可达 2pg。表明 ,此PCR方法特异性好 ,敏感性高 ,可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断。     

F-2毒素的检测方法研究——薄层层析法的定性

近几年我们用薄层层析法对饲料中F-2毒素进行了分离鉴定,结果表明,它具有灵敏度高,分辨能力强,设备简单,操作方便,便于推广等优点。材料与方法(一)器材 紫外分析仪(2537(?)、3650(?)),层析槽(内径25.3×6.3×3.3cm),层析板(5×20cm),微量进样器,分液漏斗,蒸发皿,带盖三角瓶(50ml),称量瓶(2～5ml),喷雾器。(二)试剂1.提取溶剂:氯仿、正己烷、乙腈、石油醚。2.薄层层析展开剂系统:氯仿-甲醇(97:3V/V),氯仿-丙酮(9:1),甲苯-丙酮-甲醇(5:3:2V/V/V),甲苯-乙酸乙酯-氯仿(2:1:1),苯-乙醇(95:5)。     

F-2毒素检测方法研究——薄层层析法定量

F-2(Zearalenone)的毒性已逐渐为人们所重视,其生产真菌在我国饲料中普遍存在。为制定饲料中F-2毒索卫生标准,研制饲料中该毒素最小检出量的检测程序,已势在必行。现将试验结果报告如下:材料与方法(一)F-2标准样员(SiGMA) 以三氯甲烷稀释成每微升含0.01、0.015、0.02、0.2μg 4个浓度。(二)薄层层析板制备 板20×5cm,SilicaGel G(粒度10～14μm)1.6g,加蒸馏水(或去离子水)8.5ml,充分研磨,铺板,静止4～6小时,110℃干烤1小时(或70～80℃干烤3小时)。(三)点样 以微量进样器吸取标准F-2溶液,在板下限上3cm处点样,每板等距点0.5、10、2.0、2.5μl5个点,每个标准F-2浓度点样10个板。     

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜脂蛋白基因的克隆及序列分析

以国内主要流行的猪胸膜肺炎放线杆菌 (APP)QH 1、HN 7菌株的基因组DNA为模板 ,通过PCR方法扩增出外膜脂蛋白 (OML)基因片段 ,然后将其克隆至 pMD18 T载体中 ,经酶切和PCR鉴定 ,对阳性克隆进行序列测定。将测序结果分别与标准菌株进行比较 ,QH 1株的核苷酸序列与血清 1、9、11、12型参考株的同源性达 99.1%～ 99.9% ;HN 7株的核苷酸序列与血清 7、3、4、6型参考株的同源性达 97.3%～ 10 0 % ,与其他血清型参考株的同源性较低。     

羊肺炎霉形体细胞蛋白多肽分析

羊肺炎霉形体细胞蛋白多肽分析包惠芳邓光明逯忠新梁桂香（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）羊肺炎霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｏｖｉｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）自Ｍａｃｋｅｙ等（１９６３）和Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ等（１９７９）先后从患胸膜肺炎的绵羊和山羊...