阿片类成瘾者血清、尿中吗啡TLCS分析

建立阿片类成瘾者血清、尿液中吗啡的薄层色谱扫描 (TCLS)定量检测方法。样品经酸、碱性水解后调至pH9,氯仿 /异丙醇 ( 9∶1)萃取及GDX 40 3柱固相萃取 ,在紫外区可见光区薄层扫描。测得 3种萃取方法吗啡回收率分别为 75 3 %± 4 9% ,80 9%± 3 2 %和 79 4%± 3 5 % ,血清、尿中吗啡最低检出浓度分别为 0 1μg·ml-1,0 0 5 μg·ml-1(信噪比≥ 3 )。本法可用于阿片类药物成瘾者或中毒者血、尿中吗啡的检测。     

LC-MS／MS法测定人血浆中盐酸洛哌丁胺

目的建立人血浆中盐酸洛哌丁胺的液相色谱-质谱联用测定法（LC-MS／MS）。方法血浆样品中盐酸洛哌丁胺与盐酸小檗碱（内标）经甲醇液．液提取后,采用ZORBAXSB—C18色谱柱（2．1mm×150mm×5μm）,柱温35℃,流动相为乙腈：0．1％甲酸（60：40,V／V）,流速为0．4mL／min,进样量10μL。电喷雾离子源（ESI）,正离子检测,以多反应监测（MRM）方式进行定量分析,用于监测的离子为m／z477→266（盐酸洛哌丁胺）和m／z366→292（内标）。结果盐酸洛哌丁胺的检测下限为0．2ng／mL（S／N=3）,在浓度0．5～500ng／mL范围内线性良好（r=0．9982）,低、中、高浓度（1ng／mL、20ng／mL、400ng／mL）的平均回收率分别为84．6％,88．5％和90．2％,日内与日问RSD分别小于6％与7％。结论LC—MS／MS法可用于盐酸洛哌丁胺的定性定量分析。     

甲基苯丙胺在家兔体内的毒物代谢动力学研究

目的研究甲基苯丙胺及其代谢物苯丙胺在家兔体内的毒物代谢动力学行为。方法GC/MS法测定家兔灌胃甲基苯丙胺后不同时间点血、尿中甲基苯丙胺和代谢物苯丙胺浓度,采用3P97程序进行房室模型拟合以及毒物代谢动力学参数计算。结果甲基苯丙胺和苯丙胺在家兔体内的毒物代谢动力学过程均呈一级动力学特征,符合二室开放模型。甲基苯丙胺在家兔体内Cm ax为1.457 mg/L±0.094 mg/L,Tm ax为1.557h±0.078h,t1/2 ka、t1/2α和t1/2β分别为0.384h±0.052h、1.614h±0.036h和3.007h±0.430h,CL为1.769 L/h/kg±0.114 L/h/kg。甲基苯丙胺的毒物代谢动力学方程为:C t=2.767 e-0.746 t+1.454 e-0.234 t+4.119 e-1.746 t。结论甲基苯丙胺在家兔体内吸收、消除和代谢都较快。建立的甲基苯丙胺毒物代谢动力学方程和参数可为甲基苯丙胺分析的合理取样、从血药浓度推断服毒时间以及甲基苯丙胺滥用的法医学鉴定提供理论依据。     

不同时程吗啡依赖对大鼠中脑黑质多巴胺神经细胞的影响

目的观察不同时程吗啡依赖对大鼠中脑黑质(Substantia nigra,SN)多巴胺能神经细胞的影响。方法按逐日递增原则背部皮下注射盐酸吗啡,建立吗啡依赖大鼠模型,取脑组织经10%福尔马林液固定后石蜡包埋,组织连续切片,免疫组织化学和免疫荧光染色,观察多巴胺能神经细胞特异性标记物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达变化;Fluoro-Jade B染色观察吗啡依赖不同时程黑质多巴胺能神经细胞变性坏死情况。结果 TH免疫组化结果显示随着吗啡依赖时间的延长黑质阳性细胞逐渐减少,吗啡依赖6周组阳性细胞减少明显。Fluoro-Jade B染色结果证实多巴胺能神经细胞发生了变性坏死。结论较长时程吗啡依赖大鼠黑质多巴胺能神经细胞损伤明显。     

急性吗啡中毒大鼠主要脏器内吗啡分布变化的研究

研究急性吗啡中毒大鼠随给药和死后时间延长 ,主要脏器内吗啡的分布变化规律 ,为吗啡类毒品中毒死亡者尸检取材提供依据。采用免疫组织化学SP技术 ,观察 44只尾静脉注射吗啡的大鼠。从给药后 15min到 5h ,从死后即刻至 48h ,脑、肾、心、肝等脏器内吗啡分布的变化规律。结果表明 ,注射吗啡后短时间内各脏器均有吗啡存在 ,主要分布在某些实质细胞的胞浆内 ,且随时间延长吗啡含量上升 ,达高峰 ( 1h)后逐渐减少或消失。不同组织器官的吗啡含量及其变化速率差异巨大。脑内吗啡出现早 ( 15min) ,消失晚 ( 5h) ,峰值高 ,死后衰减慢 ( 4 8h仍呈强阳性 )。肾脏次之 ,但明显优于心、肝。免疫组化SP技术可作为一种鉴定吗啡类毒品中毒的特异性方法 ,脑、肾是其较理想的检材     

反相高效液相色谱法测定人血浆中的吲哚美辛

建立血浆中吲哚美辛的高效液相色谱分析方法 ,扩大药 (毒 )物检测范围及手段 ,以适应法医学鉴定的特殊需要。以空白血浆标准添加吲哚美辛对样品处理方法、线性关系、回收率及精度进行考察 ,并以所建方法对健康受试者的血液浓度进行监测。方法的线性范围是 0 1～ 5 0 μg·ml-1,γ =0 9995 ,最小检出浓度为 0 0 2 μg·ml-1(S/N≥ 3)。日内、日间的方法精密度为 ( 1 1± 0 2 ) % (n =4)和 ( 2 7± 0 6 ) % (n =4) ,加样回收率为 97 5 %～10 4 2 %。所建方法准确、便捷、选择性好 ,可用于法医学鉴定及血液浓度监测     

利凡诺引产致急性肾功能衰竭死亡1例

1案例某女,27岁,农民。孕3产1。因妊娠5+月在某卫生院行利凡诺引产术。引产前检查:血压105/67mmHg(14.0/8.93kPa),体温36.5℃,心肺肝脾(-)。B超示胎儿双顶径5.8cm,羊水厚4.3cm,单活胎,6-月大小。血常规:WBC9.4×109·L-1,N68%,L32%。某日8时行羊膜腔内注射利凡诺100mg引产。次日2时,发热;5时15分,血压80/60mmHg(10.7/8kPa),体温39.1℃,脉搏130次·min-1,呼吸30次·min-1。双肺呼吸音粗,心率齐。心电图示窦性心动过速。血常规:WBC31.1×109·L-1,N80.1%,L17.4%。B超示死胎。尿常规URO2+,Bil2+,血3+,Pr3+,WBC+,Fib5.5g·L-1。血液…     

大鼠尸僵发展过程中肌节长度的变化及其长度测定

目的观察大鼠尸僵发展过程中肌节形态、肌节长度的变化。方法 2 1只大鼠分为 3组 ,每组大鼠分别于死后立即和死后 2h、 4h、 6h、 8h、 12h、 2 4h取材 ,扫描电镜下观察大鼠死后不同时间的肌节形态 ,同时测定肌节长度。结果死后立即取材标本肌原纤维松散 ,纤维间有一定的间隙 ;死后 2h ,肌原纤维间界限模糊 ,出现周期性横纹 ;死后 4h、 6h横纹清晰 ;死后 12h肌原纤维断裂 ,仍可见横纹 ;死后 2 4h肌原纤维断裂、融合。各组大鼠肌节长度与同组立即取材时比较 ,死后 2h、 4h、 6h、 8h均显著变短 (P值均小于 0 0 0 1) ,其中死后 4～ 6h最短 ;死后12h均无显著性差异 (P值均大于 0 0 5 ) ;死后 2 4h ,组 1、组 3无显著性差异 (P值均大于 0 0 5 ) ,组 2差异显著(P值为 0 0 0 7)。结论用扫描电镜测定肌节长度 ,发现肌节长度随尸僵经过时间的延长而发生变化     

咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡的作用

目的考察咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡的作用。方法取出生后2-3d的乳鼠脑皮质神经元,在37℃、5%CO2、100%相对湿度的培养箱中培养7d后,分别加入终浓度为300μmol/L和1 000μmol/L的盐酸咖啡因培养液,继续培养6-36h后,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度、线粒体膜电位和细胞凋亡率,酶标仪测定Caspase-9的活性,电镜和Hoechst 33258荧光染色观察细胞的形态学改变。结果与正常组相比较,300μmol/L和1 000μmol/L盐酸咖啡因组在给药后6h的钙离子平均荧光强度明显增强（P〈0.05）,由正常值43.13±2.02分别增加到45.28±1.16和46.92±1.99;在给药后8h的线粒体膜电位下降最明显（P〈0.05）,由正常值443.58±11.77分别下降到289.53±16.47和165.14±14.72;在给药后10h的Caspase-9活性最高（P〈0.05）,由正常值1.00±0.000分别增加到5.33±1.02和8.33±0.92;在给药后36h的细胞凋亡率明显升高（P〈0.05）,由正常值4.94±1.74分别增加到15.98±2.03和18.70±2.09;在给药后24h荧光显微镜下见典型凋亡小体。结论咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡有促进作用。     

恶性组织细胞增生症死亡1例

1案例1.1案情摘要某男,26岁,因“发热、咳嗽三天伴咯血一次”到医院就诊。入院查体:T39℃,双肺呼吸音粗糙,腹平软,肝、脾肋缘下未扪及,全身浅表淋巴结不肿大。血常规:Hb99g·L-1,WBC11.2×109·L-1(L:17%,N:83%),PLT270×109·L-1。全胸片:两肺野布满粟粒状阴影,分布均匀,提示急性血型播散型肺结核。当日中午突然口、鼻腔涌出大量血性液体,继而呼吸、心跳停止。1.2尸体检验尸体低温保存1天后解剖,全身消瘦,口、鼻腔有血性液体流出。双肺饱满,两侧胸腔见大量暗红色液体,共约500ml,气管腔见大量血性泡沫。肺表面见大片状出血灶,剖面见全…     

Morphine perfused rabbits: a tool for experiments in forensic entomotoxicology

In order to establish an animal model for entomotoxicological studies, the kinetics of morphine elimination from blood after a single intravenous injection of morphine and the concentration of morphine in tissues following a continuous perfusion were studied. The aim of these experiments was to obtain controlled morphine tissue concentrations similar to those encountered in fatal human heroin overdoses. These tissues can be used as a food source for developing fly larvae in entomotoxicological studies. In the single injection experiment, seven rabbits were administered 1 or 2 mg/kg body weight of morphine chlorhydrate via the main ear artery. Blood samples of 200 microL were removed regularly via a catheter. Morphine concentration was determined using RIA techniques. Morphine was found to be first rapidly distributed and then slowly eliminated, following a two-exponential equation. Elimination of morphine from blood can be described as a two-compartment model. Constants of the equation were determined using the Kaleidagraph program. Using those constants, the main pharmacokinetics parameters were calculated. Results of these parameters showed the following: clearance from 13.3 to 16.2 L.h.1, half-life of the distribution phase from 0.6 to 0.9 min, and half-life of the elimination phase from 21 to 26 min. These results were used to calculate the rate of perfusion of morphine for rabbits to obtain desired, controlled, and constant concentrations of morphine in tissues. In the second experiment, three rabbits received a perfusion of morphine intravascularly at a rate of 2 mg/kg/h for a period of 3 h. These rabbits were sacrificed and analyses performed on several abdominal and thoracic organs. Results showed that the concentrations of morphine differed according to the organ analyzed, but were reproducible for organs between animals. These concentrations were similar to those normally encountered in cases of human death due to heroin overdoses.     

氯胺酮、甲基苯丙胺和吗啡金标单抗试剂盒的研制

目的建立同步检测氯胺酮、甲基苯丙胺和吗啡的方法。方法将胶体金标记的抗氯胺酮、抗甲基苯丙胺和抗吗啡单克隆抗体浸涂在玻璃纤维膜上，将氯胺酮、甲基苯丙胺和吗啡的完全抗原以及羊抗鼠多克隆抗体喷涂在硝酸纤维素膜上，分别标定为检测区（T）和质控区（C）。样本中游离的氯胺酮、甲基苯丙胺和吗啡分别与包被的完全抗原免疫竞争结合胶体金标记抗氯胺酮、抗甲基苯丙胺和抗吗啡单克隆抗体。以质控区和检测区是否出现紫红色条带判读结果。结果对66种药品和毒品的特异性测试表明，该试剂盒仅识别氯胺酮及其代谢物、甲基苯丙胺及其衍生物和吗啡类；对人体尿样中的氯胺酮、甲基苯丙胺和吗啡检测阈值分别为1000ng／ml、1000ng／ml和300ng／ml；与GC／MS对照试验结果一致；试剂盒稳定性较好，在常温下可较长时间保存。结论本文研制的试剂盒可用于样本中氯胺酮、甲基苯丙胺和吗啡成分定性的同步检测。     

CCK受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠海马神经元CaMKⅡα mRNA及蛋白表达的影响

目的研究胆囊收缩素(CCK)受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠海马神经元CaMKⅡαmRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨CCK受体拮抗剂抑制吗啡戒断症状的作用机制。方法应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡,建立大鼠吗啡躯体依赖模型,将模型鼠的海马组织制成细胞悬液,体外给予不同剂量CCK-A及CCK-B受体拮抗剂,采用RT-PCR和western blot技术分别检测海马神经元CaMKⅡα的mRNA及蛋白表达。结果①慢性吗啡成瘾大鼠海马神经元CaMKⅡα mRNA及蛋白表达与对照组相比均显著增高;②成瘾大鼠海马神经元细胞在给予纳洛酮催促戒断后,与对照组及吗啡组相比,CaMKⅡα mRNA及蛋白均显著降低;③纳洛酮催促戒断组加入不同剂量的CCK-A受体拮抗剂(CR-1409)、CCK-B受体拮抗剂(CR-2945),CaMKⅡα mRNA及蛋白表达与纳洛酮组相比显著升高,并随浓度的升高而升高,两种拮抗剂的作用以CR-2945起主要作用。结论CCK-A、CCK-B受体拮抗剂可以有效地抑制因纳洛酮催促戒断所引起的CaMKⅡα mRNA及蛋白表达降低,并具有剂量依赖性。     

褪黑素对吗啡依赖大鼠复吸行为的影响

目的 建立大鼠条件性位置偏爱模型(CPP),探讨褪黑素对吗啡依赖大鼠复吸行为的影响。方法连续6d按剂量递增法于大鼠皮下注射吗啡,诱导实验组和吗啡对照组大鼠CPP形成,然后用盐水替代吗啡皮下注射大鼠10d,使CPP逐渐消退后,再用吗啡4mg/kg单次引燃注射激发消退的条件性位置偏爱复燃,3个实验组分别在注射吗啡前30min腹腔注射褪黑素20mg/、40mg/kg和80mg/kg,分别观察各组大鼠行为。结果 经6d吗啡训练后,实验组和吗啡对照组大鼠在伴药箱的停留时间显著延长,吗啡诱导的大鼠CPP形成;停用吗啡后,经10d的生理盐水注射,吗啡诱导的大鼠CPP逐渐消退;吗啡4mg/kg单次引燃注射使大鼠消退的CPP恢复,而实验组可以剂量依赖性地减弱大鼠CPP恢复。结论 吗啡诱导大鼠CPP形成,褪黑素在一定程度抑制吗啡依赖大鼠的复吸行为。     

吗啡依赖和戒断大鼠中枢cAMP和cGMP含量的变化

目的　研究吗啡依赖和催促戒断大鼠中枢cAMP和cGMP含量变化。方法　以剂量递增法连续皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型 ,采用放射免疫学方法检测脑内cAMP和cGMP含量。结果　与生理盐水对照组大鼠比较 ,吗啡依赖大鼠的纹状体、间脑、中脑、脑桥和海马内cGMP含量均显著降低 ,cAMP含量和cAMP/cGMP比值显著升高 ,而小脑则无类似变化 ;与吗啡依赖组大鼠比较 ,纳洛酮催促戒断大鼠 ,其海马和纹状体内的cGMP含量显著下降 ,cAMP含量和cAMP/cGMP比值显著升高 ;其它部位无明显变化。结论　中枢cAMP和cGMP含量变化 ,可能是形成和维持吗啡依赖和戒断的重要分子机制之一。     

环境激发吗啡CPP复燃大鼠杏仁核PSD-95的表达

目的检测吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)复燃大鼠杏仁核突触后致密质-95(PSD-95)的表达,探讨其在吗啡成瘾中对记忆的影响。方法 SD大鼠32只,随机分为吗啡依赖组(MD)、吗啡CPP消退组(ME)、环境激发组(MR)和对照组(N)。建立吗啡CPP模型,自然消退后,通过环境诱发CPP复燃,应用免疫组化和RT-PCR方法,观察检测激发组大鼠杏仁核PSD-95蛋白和mRNA表达,并与依赖组、消退组、对照组进行比较。结果吗啡CPP环境激发组、吗啡CPP消退组和对照组比较,杏仁核PSD-95的表达明显增加,具有高度显著性差异(P<0.01);吗啡依赖组与对照组比较,PSD-95的表达明显降低,具有高度显著性差异(P<0.01)。结论吗啡CPP环境激发组大鼠杏仁核PSD-95表达明显增高,PSD-95可能参与了成瘾记忆。     

吗啡染毒大鼠死后体内吗啡的分布研究

作者采用免疫组织化学（PAP）法观察慢性吗啡染毒大鼠死后，在不同时间尸体内吗啡公布的变化。发现随着死后时间的延长，吗啡在大鼠CNS的分布无明显改变；其它内脏器官组织中吗啡分布则有明显改变；内脏脂肪组织原未查见吗啡，随死后时间延长，吗啡含量增加．证实大鼠染毒死后尸体内吗啡存在重分布现象。初步讨论了死后体内吗啡分布的变化与死后时间的关系，为吸毒致死后尸检取材提供依据。     

吗啡戒断大鼠中脑腹侧背盖区GAP-43的表达变化

目的观察吗啡戒断大鼠中脑腹侧背盖区生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)在不同时程中的表达,探讨GAP-43在吗啡戒断记忆中的作用。方法采用腹腔递增注射盐酸吗啡并自然戒断的方法建立吗啡依赖1周、2周和4周戒断模型,运用免疫组织化学染色观察中脑腹侧背盖区GAP-43的蛋白表达,并用Image-Pro Plus 5.1图像分析软件对结果进行分析。结果中脑腹侧背盖区GAP-43的蛋白表达随依赖时间的延长表现为先降低再升高(P0.01)。结论 GAP-43可能在中脑腹侧背盖区参与了吗啡戒断记忆。     

Determination of drug levels in two species of necrophagous Coleoptera reared on substrates containing morphine

Two species of necrophagous Coleoptera: Dermestes frischi (Dermestidae) and Thanatophilus sinuatus (Silphidae), were reared on substrates containing different amounts of morphine. Colonies of D. frischi were reared on rabbit carcasses which had been given 10, 20, and 40 mg/h of morphine hydrochloride via ear artery perfusion over a 3 h period prior to death. A fourth rabbit served as a control. T. sinuatus was reared on minced beef spiked with morphine hydrochloride to give concentrations of 1,000, 2,500, 5,000, and 10,000 ng/g and one control colony. These dosages were calculated to create tissue concentrations of morphine similar to those encountered in human deaths due to morphine overdose. Larvae. pupae, and adults (except for T. sinuatus) were analyzed for morphine content. All developmental stages of D. frischi were positive for morphine and concentrations correlated with cadaveric tissue concentrations during larval stages and to a lesser extent in the adult stage. For T. sinuatus, the best correlations were found in 2nd and 3rd instar larvae. This study demonstrates the potential for use of necrophagous Coleoptera, as well as Diptera larvae, as alternate specimens for toxicological analyses.