皮癣双价灭活苗接种牛的免疫监测

用８头健康犊牛每头注射皮癣双价灭活苗２ｍｌ，间隔１４天重复注射１次。在注苗前和泣苗后不同时间采血进行血清抗体检测和以淋巴细胞转化试验检测细胞免疫情况。结果在注苗前以双向免疫扩散试验（ＤＩＤ）法检测８头牛疣状毛癣菌代谢产物抗原（Ｔｖ）抗体和石膏样毛癣菌代谢抗原（Ｔｍ）抗体均为阴性，注苗后１４～１１０天出现Ｔｖ抗体阳性反应，反应高峰在注苗后２１～２８天，最高滴度为１：８。注苗后１４～６３天出现Ｔｍ抗体阳性反应，反应高峰在２１～２８天，最高滴度１：４。注苗前８头牛淋巴细胞转化率均在４％以下，注苗后１４～６３ｋ对特异性抗原Ｔｖ和Ｔｍｌ出现淋巴细胞转化阳性反应，反应高峰均在注苗后２１～２８ｋ，最高转化率为２５％（Ｔｖ）和２９％（Ｔｍ）。通过免疫监测证明接受该疫苗的牛绝大多数都能产生良好的体液免疫和细胞免疫，并对攻击感染具有抵抗力。     

广东山东和福建三省鸡卡氏住白细胞虫病流行病学调查

通过免疫琼脂扩散试验和血液涂片检查，对广东、山东和福建省的２３个鸡场进行了鸡卡氏住白细胞虫病调查。在抽样检查的４２５只鸡中，３１只鸡血液涂片查出该虫体裂殖子或配子体，２９只鸡血清抗体阳性，总检出率为１４．１％，广东、山东、福建省检出率分别为１０．３％，１２．６％和２４．５％。血液涂片检查结果，青年鸡的检出率（１０．７％）明显高于成年鸡（３．８％）；免疫琼脂扩散试验检测时，成年鸡的阳性率（１０．９％）则显著高于青年鸡（２．８％）。因此，进行鸡卡氏住白细胞虫病调查时，宜采用寄生虫学和血清学相结合的方法。     

单克隆抗体探针在地方流行性牛白血病诊断中的应用研究

应用3批牛白血病病毒(BLV)糖蛋白(gp)抗原的单克隆抗体(MAB)探针(Probes),分别对1172头奶牛淋巴细胞样品进行了BLV抗原检测;还用琼脂免疫扩散(AGID)和酶联免疫吸附(ELISA)试验对这些奶牛的血清样品进行BLV抗体检测,作为MAB探针检测试验的回归对照。结果是3批探针对BLV洁净牛群抗原检测全部阴性;BLV污染群的1072头奶牛淋巴细胞样品的BLV抗原检测阳性率分别为39.1％,39.2％和39.3％;检出符合率达99.5％(McNemar检验P>0.05)。AGID和ELISA试验对BLV抗体检出阳性率分别为32％和41.1％。抗原和抗体检出的符合率在洁净群为100％;在污染群中分别为82.6％和84.5％。其结果经统计学分析证实,MAB探针检测BLV抗原是一种非常特异、敏感、稳定的检测技术。     

鸡大肝和大脾病的流行病学初步调查

对两个鸡场发病鸡群的病理剖检发现，病鸡和死亡鸡肝、脾异常肿大，为正常体积的３～４倍，肝重为体重的１３．８３％、脾重为体重的１．８７％。病鸡临床上无特异症状。用鸡大肝和大脾病（ＢＬＳ）标准抗原和阳性血清通过琼脂扩散试验对早期发病鸡群进行调查，鸡场Ⅰ血清抗体阳性检出率为３／１０，抗原阳性检出率为６／３９；鸡场Ⅱ未查出抗原。证实我国已存在ＢＬＳ病。     

西咪替丁对鸡细胞和体液免疫功能的作用

观察了西咪替丁和左旋咪唑对鸡细胞和体液免疫功能的作用。对２８ 日龄鸡每天分别按２ ．５ 、１０ ．０ 、１００ ．０ 和４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁或２ ．５ 、１０ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重左旋咪唑饮水给药，连用３ ｄ 后再分别肌肉注射绵羊红细胞（ＳＲＢＣ） 和牛血清白蛋白（ＢＳＡ） 或布鲁氏菌（ＢＡ） 抗原。测定外周血淋巴细胞转化率和ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值；测定血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价和血清补体总活性。结果表明，西咪替丁能明显增强鸡外周血Ｔ 淋巴细胞功能，但对Ｂ 淋巴细胞无明显影响；明显升高血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价；１０ ．０ ～４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁能明显升高ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值和血清总补体活性。西咪替丁与左旋咪唑相比具有非常类似的作用。     

斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１～３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检法的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ作为牛、羊捻转血矛线虫病检测手段是可行的     

马病毒性动脉炎血清微量中和试验的研究及应用

参照美国的马病毒性动脉炎（ＥＶＡ）诊断技术和马动脉炎病毒（ＥＡＶ）标准种毒和阳性、阴性血清，确立了ＥＡＶ在ＲＫ－１３细胞上生长的最适条件，制备了标准ＥＡＶ高免血清建立了ＥＡＶ微量中和试验。通过对进出口的５５０头份马血清抗体检测，有１９头血清抗体滴度达１４～１１２８。用标准马传贫阳性血清进行交叉中和试验未发现交叉反应；用自制的琼扩抗原进行比较试验，有８头份为阳性，证实微量血清中和试验与琼扩试验的符合率为４２．１％。     

团集凝集试验诊断牛边缘无浆体病的研究

应用国内制备的全套试剂建立的团集凝集试验(CAT)检测3份边缘无浆体人工感染牛血清,阳性率为100％;98份流行区牛血清,阳性率为16％;267份非疫区牛血清,全部为阴性。与多种病毒、细菌病及包括血液原虫病在内的一些寄生虫病无交叉反应。一次感染边缘无浆体的牛,用此法检测,其抗体可持续8个月以上。     

新疆部分地区牛新孢子虫病的血清学调查

应用间接免疫荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验、斑点酶联免疫吸附试验3种检测方法,对新疆地区部分牛和牦牛的血清样品进行新孢子虫病抗体检测.结果显示,298头份牛血清全部为阴性,4份牦牛血清1份为阳性.     

绵羊慢病毒北疆株自然感染新疆美利奴羊的研究

选１２只自然感染绵羊慢病毒（ＯｖＬＶ）的成年新疆美利奴羊，用琼脂凝胶免疫扩散（ＡＧＩＤ）试验连续检查血清中ＯｖＬＶ沉淀抗体，发现抗体应答的类型发生转换，即只出现对病毒核心蛋白抗原（如ｐ２５）的抗体（外线）、出现对病毒包膜糖蛋白（ｇｐ１３５）的抗体（内线），同时出现对ｐ２５和ｇｐ１３５二者的抗体（双线）互相转换。从试验羊的多个器官中分离到３株ＯｖＬＶ，分别命名为ＯｖＬＶＮＸＪ５５，ＮＸＪ７３和ＮＸＪ０４１８株，其ＴＣＩＤ５０／ｍＬ值依次为１×１０－５．６，１×１０－５．４和１×１０－４．５。剖检的６例均有淋巴细胞性乳腺炎，其中２例同时有淋巴滤泡形成，病变率为１００％。肺无淋巴细胞性间质性肺炎病变，２例肺内有淋巴滤泡形成。脑、滑膜无ＯｖＬＶ感染的特异性病变。所有试验羊未发生任何与ＯｖＬＶ感染有关的临床症状。结果表明，乳腺是对ＯｖＬＶ最敏感的靶器官，ＯｖＬＶ北疆株为弱毒株，新疆美利奴羊是对ＯｖＬＶ的低敏性品种。     

补体结合试验诊断环形泰勒虫病的研究

用含环形泰勒虫的血液接种除脾牛，将红细胞中的虫体制成抗原，建立了总量为０．６ｍｌ的补体结合试验方法。人工感染牛血清中的抗体在感染后５ｄ即可检出，３０ｄ达到最高峰，持续８个月。检测４３头已知感染牛，４２头呈阳性反应，检出率为９７．５６％；３５份安全区牛血清，均呈阴性，没有假阳性反应。环形泰勒虫抗原与瑟氏泰勒虫血清有轻微的交叉反应，与双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、牛边虫、伊氏锥虫、日本分体吸虫病牛的血清无交叉反应。利用该方法对不同地区的１２７５份牛血清进行了环形泰勒虫病血清学调查，表明其敏感性、特异性良好，可用于口岸检疫、流行病学调查及临床诊断     

应用单克隆抗体探针检测牛白血病病毒抗原

应用抗牛白血病病毒(BLV)糖蛋白(gp~(64))抗原单克隆抗体(MAB)探针(Probes),分别检测了培养细胞、生物制品及感染牛羊组织内BLV抗原。结果:FLK/BLV细胞系中BLV抗原生成规律为,培养1～4天时,细胞系中BLV抗原分泌量依日递增,5～7天时,抗原生成量趋于平衡;通过对3批琼脂免疫扩散(AGID)诊断抗原的检测可进行质量评价;实验感染BLV传代绵羊淋巴细胞内BLV-gp抗原全部阳性;我国江南某奶牛场200头奶牛淋巴细胞样品中,75头样品BLV抗原阳性。检出率37.5％。AGID法检出BLV抗体阳性牛56头,检出率为28％。两种技术检测的符合率为88.5％;哈尔滨市郊某奶牛场100头奶牛淋巴细胞样品,抗原抗体检测均为阴性。本方法特异性、敏感性强,为地方流行性牛白血病(BEL)的检测开辟了新途径,建立了新技术。     

我国规模化肉牛场牛病毒性腹泻-粘膜病流行状况监测

从山东、河南和河北省的６个规模化肉牛场随机采肉牛血清８９份，直肠粪拭子１６５份，分别用微量细胞中和试验和双抗体夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒检测牛病毒性腹泻粘膜病（ＢＶＤＭＤ）的抗体和抗原。诊断结果：ＢＶＤＭＤ中和抗体阳性率为４６．２％～６５．０％；ＢＶＤＭＤ病毒抗原阳性检出率为５．１％～７７．２％。从而证实我国中原地区肉牛群中存在有ＢＶＤＭＤ。     

牛伪狂犬病的实验室诊断

对不明原因役牛猝死症病料组织触片镜检和分离培养皆未发现细菌;乳胶凝集试验检查发现3份送检血清皆为伪狂犬病病毒(PrV)抗体阳性;ELISA检测结果,其中2份为PrV gE抗体阳性,而且这2份血清PrV中和抗体也为阳性;以脑组织制备DNA模板进行PCR,扩增到特异性的PrV DNA片段;对健康成年兔接种病牛脑、肺等病料,表现典型的伪狂犬病症状.综合流行病学、细菌学、血清学、分子生物学和动物试验结果,确诊为牛伪狂犬病.     

反转录－聚合酶链反应检测牛食道－咽部分泌物中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测牛食道－咽部分泌物（Ｏ－Ｐ液）中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。第１组６份Ｏ－Ｐ液，采自人工感染发病牛，ＰＣＲ检测结果都是阳性；查毒试验结果５／６阳性。其中１份样品的１０－１，１０－２，１０－３和１０－３．７稀释液的ＰＣＲ检测结果也都是阳性；同样稀释的样品接种细胞，每稀释度２瓶，１０－１～１０－３都是２／２出现ＦＭＤＶ所致的细胞病变（ＣＰＥ），１０－３．７１／２出现ＣＰＥ。第２组样品是从野外采集的水牛Ｏ－Ｐ液，共５２份。ＰＣＲ检测结果９份为阳性，另７份为可疑（弱阳性）；取接种了这７份Ｏ－Ｐ液的细胞培养液（无ＣＰＥ）再作ＰＣＲ检测，结果全部是阳性。５２份Ｏ－Ｐ液样品分别接种ＩＢ－ＲＳ－２细胞培养物，并盲传３代，均未观察到典型的ＣＰＥ。研究结果表明，建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法不仅可用于检测细胞培养物和动物组织，也适用于检测牛Ｏ－Ｐ液中的ＦＭＤＶ。该方法比目前常规的查毒试验显著的快速和灵敏     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１∶１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的工作浓度为１∶２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳性率为４７．１％；北京地区乙猪场的血清４３份，阳性率为４１．８％     

用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎

经戊二醛化鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ ＨＰ） 抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ） 检测猪传染性胸膜肺炎病猪血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００ ～１５０ μｇ／ ｍ Ｌ,超免疫血清的抗体效价达１∶５１２ ～１∶１０２４ ,对人工感染１４ ｄ 的猪血清阳性检出率达８０ ％ ,与猪瘟、猪肺疫、猪喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无交叉反应     

牛新孢子虫病和弓形虫病的流行病学调查

为了调查我国牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,应用新孢子虫酶联免疫吸附试验(ELISA)和弓形虫间接血凝试验(IAT)分别检测了来自国内10个省(市、自治区)的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清。结果显示,乳牛新孢子虫的抗体阳性率为17.2%,弓形虫的抗体阳性率为2.3%,没有检测到既有新孢子虫抗体又有弓形虫抗体的乳牛血清。各牛场所检乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率在0~34.4%之间。在水牛和肉牛血清中未检测到新孢子虫抗体和弓形虫抗体。流产乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率为20.2%,未流产乳牛为16.1%,其中血清抗体阳性乳牛主要在妊娠中晚期流产。各个年龄段乳牛血清的抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。不同妊娠胎次的乳牛血清抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。确认新孢子虫病在国内大部分牛场存在。     

猪盖他病血清流行病学调查

对采自上海、浙江、新疆的１００份猪血清用血凝抑制（ＨＩ）试验进行盖他病抗体检测,证明上述地区存在盖他病抗体阳性猪群,阳性率达４０．０％～１００％。血清抗体从６月中旬出现,８月份上海、浙江的猪血清抗体阳性率达１００％,而新疆的猪血清在９月份抗体阳性率为４０．０％。调查结果表明,盖他病抗体水平消长与乙型脑炎病毒、细小病毒感染季节一致。     

牛支原体P48蛋白的表达及间接血凝检测方法的建立与应用

优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20~40μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048~1∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。