鸡传染性鼻炎的病原分离鉴定及防治

鸡传染性鼻炎的病原分离鉴定及防治林毅，张道永，王文贵（四川省畜牧兽医研究所成都６１００６６）鸡传染性鼻炎（ＩＣ）是由副鸡嗜血杆菌（Ｈａｅｎｔｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｇａｌｌｉｎａｍｍ，ＨＰＧ）引起的一种鸡的急性传染病，Ｐａｇｅ（１９６２）根据凝集试验将...     

用间接ELISA检测鸡血清中传染性鼻炎抗体

用间接ＥＬＩＳＡ检测鸡血清中传染性鼻炎抗体陈小玲，陈葵，张培君，龚玉梅（北京市农林科学院畜牧兽医研究所１０００８１）鸡传染性鼻炎（ＩＣ）是由副鸡嗜血杆菌（Ｈｐｇ）引起的鸡上呼吸道传染病。国内外用于诊断和检测免疫水平的血清学方法主要有玻板凝集试验（ＡＧ...     

鸡传染性鼻炎的血凝和血凝抑制试验的初步研究

利用鸡副嗜血杆菌ＨＰＧ９３２３株研制了血球凝集抗原，进行鸡传染性鼻炎的血球凝集（ＨＡ）和血球凝集抑制（ＨＩ）试验。表明ＨＩ试验是初步鉴定Ａ型鸡副嗜血杆菌的快速、简便的方法，ＨＩ试验可以快速、特异地进行鸡传染性鼻炎的抗体检查。检测结果说明，人工感染鸡的传染性鼻炎抗体阳转率可达１００％，感染后１２用，２５％的鸡仍为ＨＩ试验阳性。     

鸡传染性鼻炎的诊断

鸡传染性鼻炎的诊断李青红，林敏（新疆生产建设兵团农二师兽医站库尔勒８４１０２３）（农二师三十三团兽医站）传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌引起的一种鸡的急性呼吸道病。１９９４年１２月，库尔勒市一专业养殖户饲养的蛋鸡发生以上呼吸道急性卡他性炎症为主要病理特征的...     

鸡传染性鼻炎血清抗体间接ELISA诊断试剂盒的研究

鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌（Ｈｐｇ）引起的鸡上呼吸道传染病,有Ａ、Ｂ、Ｃ３种血清型,检测鸡血清中Ｈｐｇ抗体的方法有血清平板凝集试验（ＳＰＡ）、琼脂扩散试验（ＡＧＰ）、红细胞凝集抑制试验（ＨＩ）、间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）和阻断ＥＬＩＳＡ（Ｂ?..     

副鸡嗜血杆菌在鸡胚中的生长试验

副鸡嗜血杆菌（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｇｌｉｎａｒｕｍ）是鸡传染性鼻炎（ＩＣ）的病原菌，引起急性呼吸道病，以鼻道和窦产浆液性到粘液性分泌物、面部水肿和结膜炎为最明显的特征。可导致产蛋率及孵化率下降、淘汰率增加，从而造成严重的经济损失。该菌对培养基...     

副鸡嗜血杆菌基因文库的构建与筛选

为了筛选副鸡嗜血杆菌的体内表达基因,提取了副鸡嗜血杆菌的全基因组,构建了副鸡嗜血杆菌基因组的pET系统表达文库。运用PCR及核酸内切酶(SalⅠ+NdeⅠ)鉴定基因文库,并以病原菌吸附后的康复血清作为探针,采用菌落原位杂交的方法对基因文库进行筛选。结果显示,重组质粒中有0.5～2kb的片段插入,99%的基因包含在基因文库中;重复筛选后得到的阳性克隆再经过PCR与SalⅠ+NdeⅠ酶切鉴定后定向测序,并对测序结果在NCBI上进行分析后发现筛选获得的基因中,有1个表达为转运谷氨酰还原酶、1个表达为转录终止因子,1个表达为荚膜合成域2,还有2个表达为保守假想蛋白。结果表明,本研究应用体内诱导抗原技术(IVIAT)筛选到了一些副鸡嗜血杆菌体内诱导表达基因,并对基因的功能做了初步探讨,在找寻副鸡嗜血杆菌在体内生存以及致病关键基因的道路上前进了一步,为传染性鼻炎的预防和治疗积累了有价值的资料。     

副猪嗜血杆菌LAMP检测方法的建立

为建立快速鉴别检测副猪嗜血杆菌的方法,根据Gen Bank中公布的副猪嗜血杆菌16S rRNA基因设计环介导等温扩增(LAMP)引物,利用Loopamp Realtime Turbidimeter LA-320c仪对反应体系和条件进行优化,建立了检测副猪嗜血杆菌的LAMP方法。结果显示,该方法可在65℃下反应15 min实现肉眼可视化直接判定结果。该方法仅对副猪嗜血杆菌有特异扩增,对胸膜肺炎放线杆菌、肠炎沙门菌等其他10种相关病原菌均无特异性扩增,表明特异性好,且具有较好的重复性及稳定性。其检测的灵敏度为0.175 fg/L,高于PCR方法1×10~4倍。对94份临床发病猪的鼻拭子样品平行检测结果显示,LAMP方法与NY/T 2417—2013标准中的方法间的符合率为96.8%。本方法为基层和口岸快速鉴别诊断副猪嗜血杆菌病提供了新的技术手段。     

浙江省副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

从浙江省5个县(区、市)疑似患有多发性浆膜炎和关节炎猪的98份病料中分离到26株细菌,通过细菌形态、培养特性和生化特性观察以及PCR鉴定最终确定为副猪嗜血杆菌。对26株已确定为副猪嗜血杆菌的分离株进行了血清学分型和药敏试验。结果显示,分离到的26株副猪嗜血杆菌分离株中,4型8株,5型6株,12型5株,13型2株,其余5株无法分型,并且副猪嗜血杆菌对头孢类药物、氟喹诺酮类药物及庆大霉素敏感,对复方磺胺类药物、大环内酯类抗生素及氯霉素敏感性略有不同,对四环素、氨苄青霉素具有耐药性。试验结果对浙江省猪场副猪嗜血杆菌病的防治提供了指导依据。     

鸡传染性鼻炎的诊断

传染性鼻炎系由副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragllinarum)引起鸡的一种急性呼吸道传染病,临床上以流水样鼻涕,面部水肿和流泪为主要特征。本病现在世界各地均有发生,给养鸡业带来一定的经济损失。我国虽未见有本病的详细报道,但资料表明,一些地区曾有类似于本病的鸡病发生。为建立SPF鸡群的检测方法,我们对人工感染本病鸡只进行了病原学和血清学诊断的研究。     

副猪嗜血杆菌5型galE基因缺失株HPS-YA-008ΔgalE的构建及鉴定

为构建副猪嗜血杆菌5型galE基因缺失株,本研究通过重叠PCR构建了galE基因的上、下游同源臂,然后将其连接到pRE112载体而构建了重组自杀性质粒pRE112ΔgalE;使重组质粒pRE112ΔgalE转化大肠杆菌X7213,与副猪嗜血杆菌接合转移,应用两步法筛选galE基因缺失株HPS-YA-008ΔgalE,用PCR方法验证galE基因的缺失突变。在此基础上进一步研究galE基因缺失株HPS-YA-008ΔgalE的生长特性、药物敏感性、对保育猪的毒力等生物学特性。结果,副猪嗜血杆菌血清5型galE基因缺失株HPS-YA-008ΔgalE构建成功,且缺失株的毒力已经被致弱,对药物的敏感性增加。本试验的研究结果为研制更加安全的副猪嗜血杆菌弱毒疫苗提供了实验材料。     

笼养蛋鸡爆发传染性鼻炎

鸡传染性鼻炎是一种由鸡嗜血杆菌所引起鸡的急性呼吸道疾病,广泛地流行于世界各国,近年来,我国的北京、陕西、云南、河南及山东等省市曾先后有本病发生。1988年11月,安徽省巢湖市某户饲养的良种罗曼蛋鸡父母代爆发了一种鼻腔与窦发炎、流鼻涕和脸部肿胀以及红眼眶为主要特征的传染病。经现场调查,结合临床解剖、病原涂片、动物接种、琼扩试验的结果,确诊为由鸡嗜血杆菌所致的传染性鼻炎。     

复力霉素治疗鸡巴氏杆菌病的疗效

复力霉素治疗鸡巴氏杆菌病的疗效时秀梅高华方王希敏李慧玲（山东省科学院生物研究所济南２５００１４）曹洪敬王文杰颜世敢崔锦鹏任素芳沈冰（山东省农业科学院畜牧兽医研究所）山东省科学院生物研究所研制的新型兽药复力霉素，对多种病原菌有较强的抑杀作用。本试验验证...     

副猪嗜血杆菌部分体内诱导基因的筛选

用Sau3AⅠ酶切副猪嗜血杆菌(HPS)SC-1株基因组,回收500～2000bp的片段,并与pRSETa/b/c载体连接,构建了HPSSC-1株基因组表达文库;将攻毒后不同时间的猪血清混合,分别与体外培养的HPSSC-1和大肠杆菌BL21的全菌、超声裂解产物及热变性裂解产物进行吸附,用ELISA检测吸附效果,并用Western-blot进一步验证;再用经过吸附的混合血清对HPSSC-1基因组表达文库进行菌落原位免疫杂交筛选;对筛选出来的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果显示,构建的副猪嗜血杆菌基因组文库库容量为1.2×104CFU;混合血清经过吸附后,D450nm由0.384下降到0.220。Western-blot结果显示,经吸附的血清与HPSSC-1株超声裂解产物无任何条带;通过原位免疫印迹筛选获得5个阳性克隆;阳性克隆测序结果经DNAMAN分析初步推测出5个可能具有生物学意义的开放阅读框,BLAST分析表明,这些序列与GenBank中的副猪嗜血杆菌相应基因的同源性在99%以上,分别涉及副猪嗜血杆菌的酪氨酸磷酸酯酶、异亮氨酰-tRNA合成酶、荚膜多糖输出蛋白及2个假定蛋白。结果表明,应用体内诱导抗原技术从副猪嗜血杆菌SC-1株基因组表达文库中成功筛选出5个阳性克隆,其中部分基因可能与毒力相关。     

利用aroA基因建立鸡传染性鼻炎PCR诊断方法

利用aroA基因设计了1对引物,分别对10株标准副鸡嗜血杆菌(HPG)菌株、14株分离的HPG菌株进行PCR扩增,结果均得到了与预期大小一致的片段,而对10株非HPG菌株和3株病毒进行扩增则无相应片段产生;该PCR能检测出10个菌细胞.与常规PCR方法相比,aroA-PCR的敏感性更高.     

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法.通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度80μg/mL;37℃作用2 h后4℃过夜包被,待检血清的稀释度为1:320,抗原抗体反应时间为1 h,酶标二抗稀释度为1:15 000,作用时间为1 h,底物显色时间为15 min.待检血清S/N值≥2.5时判为阳性,S/N值<2.5时判为阴性.特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查.     

副猪嗜血杆菌不同血清型稳定表达蛋白的筛选及间接ELISA检测方法的建立

为了建立一种能够检测不同血清型副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA,选用了在4、5、12型副猪嗜血杆菌中稳定表达的3种蛋白经原核表达后作为候选抗原和全菌裂解物同时包被酶标板,对临床猪血清进行副猪嗜血杆菌抗体检测,发现以锰依赖的超氧化物歧化酶(MSD)作为包被抗原得到的结果最接近用副猪嗜血杆菌全菌裂解物进行ELISA检测的结果,故确定以MSD蛋白为抗原建立间接ELISA。通过方阵滴定对ELISA反应条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:包被抗原的质量浓度为1.5μg/mL,4℃过夜;50g/L脱脂奶粉溶液37℃封闭2h;血清稀释度1∶160,37℃作用90min;酶标二抗的稀释度为1∶15 000,37℃作用45min;底物显色时间为37℃6min。抗体临界值D450nm≥0.245 1判为阳性,D450nm0.208 3判为阴性,介于两者之间为可疑。特异性和重复性试验证明,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、红斑丹毒丝菌、马链球菌、猪链球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好。用建立的间接ELISA对114份临床血清进行检测,与4、5、12型全菌裂解物的ELISA检测结果比较,阳性符合率分别为80.77%、80.00%和90.00%。结果表明,建立的间接ELISA可被用于4、5、12型副猪嗜血杆菌的抗体检测和流行病学调查。     

MEM对副鸡嗜血杆菌的增菌作用

鸡传染性鼻炎(IC),是由副鸡嗜血杆菌(Haemophius paragallinarum,简称Hpg)引起的一种呼吸道传染病。该病主要影响母鸡产蛋、小鸡生长发育和肉鸡的肉质。为防制本病,我们正在进行IC灭活苗的研制。在培养Hpg时,使用了鸡血清鸡肉汤培养基和半合成培养基,结果发现,这两种培养基长菌数量均有限。为便于工厂化生产和降低培养基成本,笔者于半合成培养基中加入不同浓度的Eagle氏最低要素营养液(MEM),作增菌试验,取得较好效果。     

敌球灵防治鸡球虫病的试验观察

敌球灵防治鸡球虫病的试验观察梁纪兰党萍胡庭俊樊斌堂刘大义（中国农业科学院中兽医研究所兰州７３００５０）中国农业科学院中兽医研究所研制的纯中药复方制剂敌球灵经７批人工病理模型抗感染试验，抗球虫指数（均值）１７２．５。１９９３～１９９５年分别在甘肃天水，...     

表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性研究

为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注射免疫SPF鸡,免疫后攻毒测定乳酸乳球菌的保护效果,检测血清中Ig G抗体和鼻黏膜sIgA抗体水平并检验免疫效果。PCR结果显示,成功构建了含p9片段的重组乳酸乳球菌,Western-blot检测显示,p9片段可在重组乳酸乳球菌内表达。重组菌最佳诱导表达条件:Nisin浓度为20 ng/m L、诱导时间为4 h。鸡肌肉注射免疫后可产生p9蛋白特异性的血清Ig G和鼻黏膜sIgA抗体。乳酸乳球菌重组疫苗免疫鸡对副鸡禽杆菌攻毒的保护率为60%~80%。结果表明,本研究成功构建了重组乳酸乳球菌pNZ8149-p9/NZ3900,该重组菌作为免疫原免疫鸡,对副鸡禽杆菌攻毒具有较好的免疫保护作用。