酶联免疫吸附试验诊断环形泰勒虫感染牛的研究

用层析法制备的牛环形泰勒虫（Ｔｈｅｉｌｅｒｉａａｎｎｕｌａｔａ）抗原用于ＥＬＩＳＡ试验，检测６２头份带虫牛血清，阳性符合率９６．６７％；在疫区检测１５０头份牛血清，阳性率８０．４３％；在瑟氏泰勒虫流行区检测４５４头份牛血清，有交叉反应，阳性率２８．１９％；检测８９头份安全区牛血清阴性符合率１００％。用正常红细胞抗原和环形泰勒虫抗原分别对人工感染和自然感染牛作了特异性试验，结果ＥＬＩＳＡ前者ＯＤ值为阴性，后者ＯＤ值为阳性。２头人工感染牛于接种后１４～２０天测出抗体，３０天达到高峰，然后下降．其中１头牛接种后１２个月ＥＬＳＡ值仍明显高于健康于。环形泰勒虫抗原与双芽巴贝西虫、牛巴贝西虫、大巴贝西虫、边缘边虫、日本血吸虫、伊氏锥虫、肝片吸虫抗血清不发生交叉反应。检测瑟氏泰勒虫血清，有３／４的阳性反应率，证实环形泰勒虫与瑟氏泰勒虫有密切的血清学关系。     

鸡传染性法氏囊病中和抗体动态水平监测及其应用的研究

用鸡胚成纤维细胞的微量血清中和（ＳＮ）试验跟踪抽检了同群两种不同免疫程序的１２组次共１４２只鸡的传染性囊病（ＩＢＤ）中和抗体滴度。结果表明，该群１日龄雏鸡的母源抗体水平高达８．３ｌｏｇ＿２并且较整齐，雏鸡母源抗体半衰期约为４．３～５．０天，用ＳＮ免疫监测不同的免疫程序及其实际效果，说明在中和抗体滴度降１６．０～６．５ｌｏｇ＿２（１５～１８日龄）时首免效果最好。该方法准确且敏感性高，可用于鸡群免疫监测，指导合理的免疫程序。     

微量补体结合试验诊断边虫感染牛的研究

利用边缘边虫DS—1株接种除脾易感牛,制备出补体结合试验诊断抗原,并建立了边虫感染牛总量为0.2ml的微量补反诊断法。所制备的抗原具有良好的特异性和敏感性,对实验室条件下人工感染牛的补反检查,符合率为100％;自然条件下感染牛补反检查的符合率为92.3％;安全区牛无假阳性反应。人工感染牛于第10天可测出补反抗体,30～40天抗体滴度达到高峰,60天后开始下降。边虫补反抗原与瑟氏泰勒虫、双芽巴贝西虫、牛巴贝西虫、伊氏锥虫、肝片吸虫、日本裂体吸虫感染牛血清无交叉反应,与正常红细胞免疫牛血清反应为阴性结果。     

牛O型口蹄疫灭活苗制苗毒种的稳定性及其免疫原性监测

用Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ法测定牛Ｏ型口蹄疫（ＦＭＤ）制苗毒种ＯＡ／５８（Ｆ４９／９１）对牛的半数最小感染量（ＭＩＤ＿（５０））为１０￣（－８．７７）／０．１ｍｌ，与ＯＡ／５８（Ｆ３０／６６）一致，表明毒种对一的毒力稳定。毒种适应制苗细胞ＢＨＫ—２１单层在７～２０代内收获的细胞毒具有稳定的蚀斑特性和感染性滴度。不同代数病毒（Ｆ１０、Ｆ１５、Ｆ２０）蚀斑克隆株的大斑、小斑株按疫苗制造与检验试行规程制成双相油佐剂疫苗免疫豚鼠，２８天后用强毒攻击，结呆Ｆ１０６／８保护，Ｆ１５６／８保护，Ｆ２０７／８保护，证明在试验代数内制苗毒种对豚鼠具有良好、稳定的免疫原性。对强毒攻击７天后的豚鼠血清中和抗体分析表明，此时血清中和效价与免疫豚鼠抗强毒感染的保护性之间无对应关系。     

牛O型A型口蹄疫双价灭活疫苗研究──—A型毒种的选择

收集保藏的６株口蹄疫（ＦＭＤ）Ａ型牛源强毒，适应乳鼠５代，转适８ＨＫ—２１细胞单层１０代，用弗氏完全佐剂制成疫苗免疫豚鼠。综合分析其对实验动物及制苗细胞的适应性、病毒感染性滴度、豚鼠抗强毒攻击的免疫原性、血清中和抗体应答的抗原广谱杜表明，在６株毒中ＡＦ／７２具有更好的适应性，病毒滴度高，免疫原性好，抗原谱广。     

西咪替丁对鸡细胞和体液免疫功能的作用

观察了西咪替丁和左旋咪唑对鸡细胞和体液免疫功能的作用。对２８ 日龄鸡每天分别按２ ．５ 、１０ ．０ 、１００ ．０ 和４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁或２ ．５ 、１０ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重左旋咪唑饮水给药，连用３ ｄ 后再分别肌肉注射绵羊红细胞（ＳＲＢＣ） 和牛血清白蛋白（ＢＳＡ） 或布鲁氏菌（ＢＡ） 抗原。测定外周血淋巴细胞转化率和ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值；测定血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价和血清补体总活性。结果表明，西咪替丁能明显增强鸡外周血Ｔ 淋巴细胞功能，但对Ｂ 淋巴细胞无明显影响；明显升高血清ＳＲＢＣ、ＢＳＡ、ＢＡ 抗体效价；１０ ．０ ～４００ ．０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重西咪替丁能明显升高ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 淋巴细胞比值和血清总补体活性。西咪替丁与左旋咪唑相比具有非常类似的作用。     

马病毒性动脉炎血清微量中和试验的研究及应用

参照美国的马病毒性动脉炎（ＥＶＡ）诊断技术和马动脉炎病毒（ＥＡＶ）标准种毒和阳性、阴性血清，确立了ＥＡＶ在ＲＫ－１３细胞上生长的最适条件，制备了标准ＥＡＶ高免血清建立了ＥＡＶ微量中和试验。通过对进出口的５５０头份马血清抗体检测，有１９头血清抗体滴度达１４～１１２８。用标准马传贫阳性血清进行交叉中和试验未发现交叉反应；用自制的琼扩抗原进行比较试验，有８头份为阳性，证实微量血清中和试验与琼扩试验的符合率为４２．１％。     

牛O-A型口蹄疫双价灭活苗研究——小白鼠接种疫苗后的细胞免疫应答

用牛Ｏ型和Ａ型口蹄疫（ＦＭＤ）双价灭活苗免疫小白鼠后，通过四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色分析法检测了其病毒特异性Ｔ细胞增殖应答，相应抗原对免疫组淋巴结细胞的刺激增生作用高于未免疫对照组；通过氨基黑－１０Ｂ比色分析法检测了其致敏淋巴细胞对靶细胞的杀伤率，免疫组为１４．３％～１５．５％，未免疫组为３．２％；通过常规毛细管法检测了白细胞移动指数（ＭＩ），免疫组为０．７５和０．７０，未免疫组为１．１３。以上３项检测结果经Ｆ检验，均达到１％的显著水平，表明小白鼠接种牛Ｏ型和Ａ型ＦＭＤ双价灭活苗后，激发了病毒特异性细胞免疫应答     

鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活苗的研究─—疫苗制造安全性与免疫效力试验

用分离自甘肃兰州和天水的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｌ＿２株和Ｔｓ株，以对倍的蜂胶水乳剂为佐剂，制备鸡传染性法氏囊病蜂胶灭活疫苗。用该苗０．５ｍｌ接种５日龄或７日龄雏鸡，免疫后２１天ＡＧＰ抗体阳性率可达５０％～６０％，免疫后２８天，ＡＧＰ抗体阳性率可达１００％。用该苗１ｍｌ免疫产蛋鸡，免疫后２１天ＡＧＰ卵黄抗体效价可达１：６４以上。     

鸡新城疫－减蛋综合征蜂胶佐剂灭活二联苗的研究

首次用蜂胶作为佐剂，研制出鸡新城疫－减蛋综合征（ＮＤ－ＥＤＳ）二联灭活苗。在开产前１个月左右，用该苗按０．５ｍｌ／只的剂量皮下或肌肉注射免疫蛋鸡，接种后２０ｄ测ＮＤ抗体（ＨＩ法）效价为６．２５～７．０（ｌｏｇ２，下同），ＥＤＳ－７６抗体（ＨＩ法）效价为６．５～８．０。用ＮＤ－ＥＤＳ油乳剂灭活二联苗做对照，进行免疫持续期平行测定对比试验，免疫后１８０ｄ，蜂胶苗免疫组鸡的ＮＤ抗体滴度为８．５～８．７，ＥＤＳ－７６抗体滴度为８．３～８．５，与油苗免疫对照组鸡的ＮＤ抗体（８．６）和ＥＤＳ－７６抗体（８．１）效价相比，无明显差异（Ｐ＞０．０５，Ｐ＞０．０５）。用禽胚做中和试验揭示，该苗免疫半年后，其保护率仍可达９０％以上。田间试验表明该苗安全性理想；免疫４．５月ＮＤ抗体效价达９．０，ＥＤＳ－７６抗体效价为８．０     

牛皮癣病抗体和细胞免疫检测方法的研究

将双向免疫扩散试验（ＤＩＤ）和淋巴细胞转化试验（ＬＴ）用于牛皮癣病的抗体检测和细胞免疫检测。３５头无牛皮癣症状的新生犊牛血清抗体全部阴性，淋巴细胞转化率均在１０％以下，１０头具有牛皮癣症状的病牛，５０％为血清抗体阳性，淋巴细胞转化率为２２％～４６％。３０头注射抗牛皮癣疫苗的牛血清抗体全部由阴转阳，淋巴细胞转化率升至１５％以上的有１６头。     

鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的建立及其应用

应用鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）作免疫原建立了８株分泌抗ＩＬＴＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均具有荧光抗体的特性，没有中和病毒的能力，分１４属于ＩｇＧ２，ＩｇＧ３和ＩｇＭ。应用异硫氰酸荧光素标记ＭｃＡｂ，建立了直接荧光抗体试验，用其检测ＩＬＴＶ抗原与分离病毒的符合率为９２．８％。     

弓形虫病免疫的研究─—弓形虫GJS和QHO株在不同浓度血清培养条件下的生物学特性观测

在用低浓度犊牛血清（２．５％）和不含血清的１６４０培养液培养的ＢＨＫ－２１细胞中，接种毒力不同的弓形虫ＧＪＳ和ＱＨＪＯ株，于５％ＣＯ＿２３７℃培养。结果两虫株的生物学特性存在一定差异；在含２．５％血清培养液培养的细胞中，虫体繁殖显示两个高峰，在无血清条件下只有一个高峰值，ＢＨＫ－２１细胞在含虫、不含虫及含血清和不含血清条件下均只有一个高峰值；两虫株培养上清蛋白含量均以递增方式增加，至１９０小时蛋白含量牧最初２小时分别增加１．９３、２．５２倍，对照ＢＨＫ－２１细胞上清蛋白无明显变化；培养上清虫体分泌排泄抗原（Ｅ／ＳＡ）滴度随培养时间的延长而上升，ＢＨＫ－２１对照上清呈阴性。     

日本血吸虫重组抗原Sj GST Paramyosin 和 Sj 23对绵羊的保护性免疫试验

１９９４～１９９５和１９９７年应用日本血吸虫３类候选疫苗分别免疫绵羊，各组的减虫率、粪便虫卵减少率和组织（肝、大肠、小肠）的虫卵减少率分别是：虫体副肌球蛋白（ｎ－ｐａｒａｍｙｏｓｉｎ）组１７．４％～５５．３％，１４．６％～６８．１％和４８．９％～７６．７％；重组副肌球蛋白（ｒ－ｐａｒａｍｙｏｓｉｎ）组４１．４％～４４．２％，１５．９％～２５．１％和４１．１％～４８．０％；Ｓｊ２６谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）组５３．４％～６２．１％，１１．０％～３８．６％和１４．０％～６５．０％；ｒＳｊ２８ＧＳＴ组６１．４％～６８．５％，２２．９％～６０．０％和３９．０％～７６．０％；重组日本血吸虫２３ｋｕ大亲水区表膜蛋白（ｒＳｊ２３）组５１．２％～６６．１％，２１．９％～５８．４％和５４．３％～７６．７％。以ＥＬＩＳＡ检测免疫后的绵羊血清，３类抗原均诱发高水平的特异性ＩｇＧ抗体，表明以上疫苗具有诱发绵羊产生保护性免疫的作用。     

鸡减蛋综合征蜂胶佐剂灭活苗的试制及其免疫应答

试制的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ）蜂胶佐剂灭活苗中蜂胶含量为６ｍｇ／ｍｌ。用此苗按０．５ｍｌ剂量给开产或临开产母鸡接种后１５天，测免疫抗体滴度达２￣（－８）～２￣（－１０），６０天测免疫抗体滴度达２￣（－９）～２￣（－１１）。实验室试验结果和田间试验结果初步表明ＥＤＳ蜂胶苗的近期免疫效果优于ＥＤＳ白油苗。     

鸭腺病毒感染的研究——病毒分离鉴定及病原特性

一樱桃谷鸭父母代种鸭群产蛋率由７９．８９％降到１５．１４％，减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）血清抗体阳性率１００％（滴度２８～１２）。由鸭群的血液白细胞及卵巢中分离到两株病毒（ＳＣＷＪ－１和ＳＣＷＪ－２株），该病毒能够凝集鸡、鸭、鹅、鸽等动物的红细胞，这种凝集能力能够被ＥＤＳ－７６病毒阳性血清所抑制，鉴定为鸭腺病毒。感染鸭的输卵管及卵巢经组织学切片观察，在卵巢的组织切片中滤泡数量减少，且只看到初级及次级卵母细胞等未成熟卵泡而不见成熟卵泡，未成熟的卵泡常见退化与吸收现象；在输卵管的组织切片中可见到上皮细胞肿胀、破裂、崩解与脱落，结缔组织轻度水肿及淋巴细胞、异嗜细胞浸润，固有膜中还可见多处淋巴细胞、巨噬细胞聚集灶分布于上皮下及血管周围，在管腔内有多量脱落崩解的上皮、炎性细胞及蛋白液体聚集。     

提纯的马立克氏病肿瘤相关表面抗原在鸡体内的免疫应答

应用木瓜蛋白酶消化法，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗ＭＡＴＳＡ抗体在ＥＬＩＳＡ中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化，给２０日龄鸡肌注免疫３次。应用间接ＥＬＩＳＡ对被免疫鸡的ＭＡＴＳＡ抗体进行了监测。结果表明：免疫前正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体存在，而用这种抗原免疫后１０天即可形成抗体应答，ＥＬＩＳＡ的ＯＤ值（Ｘ）为０．２３，至第３次免疫后１０天，ＯＤ值（Ｘ）为０．４４。这表明从鸡ＭＤ肿瘤细胞提取的ＭＡＴＳＡ，再好鸡免疫接种后可出现明显的抗体应答。木研究结果为ＭＤ肿瘤疫苗的研制提供了重要的参考依据。     

猪流行性腹泻微量血清中和试验的建立和应用

用分离自广东某猪场并适应于传代细胞生长的猪流行性腹泻病毒Ｐ－ＥＤＶＧ＿Ｖ毒株作猪流行性腹泻（ＰＥＤ）微量血清中和试验。检测了五个猪场共１５２份血清，其中未发生过ＰＥＤ的一个猪场３５份血清，抗体滴度≤１：２；三个发生过ＰＥＤ的猪场７７份血清，抗体滴度在１：４～１．５１２；一个接种过ＰＥＤ油佐剂灭活疫苗的猪场４０份血清，抗体滴度在１：８～１：１０２４。猪传染性胃肠炎、伪狂犬病、猪瘟和轮状病毒阳性血清均不能中和ＰＥＤＶ，表明该方法具有准确、可靠、特异性好、操作简便的优点。     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＦＭ＿１４）及其荧光标记物（ＦＭ＿１４－ＦＩＴＣ），对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳ－Ａ）和琼脂扩散试验（ＡＧＰ）三种检测方法的比较。结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６～８天的样品中检出抗原。２２例人工感染鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的整鸡阳性率分别为９６．８％、９５．２％和３８．７％；所有的ＡＧＰ阳性标本Ｄｏｔ－ＥＬＩ－ＳＡ和ＤＦＡ均为阳性，后两种方法的符合率为８７％。９６批次（被检鸡群达３８７００头份）野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片ＤＦＡ阳性率分别为４０％，１１％、１０％和８８％，而总阳性率则为９５％。