鸡病毒性关节炎JN－1株疫苗的免疫研究

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）Ｊ－１株经一系列培养和蚀斑克隆，筛选出一株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ的克隆株（ＪＮ－１株）。该株分别以１０￣（５·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）足掌皮下注射和１０￣（４·７２５）～１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射１日龄肉鸡，以５×１０￣（６·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０）肌肉注射肉用种鸡，均不产生任何临床症状和病理变化；在敏感雏鸡体内传代５次和鸡胚细胞内传代１０次，无毒力返强现象。雏鸡的最低免疫剂量为１０￣（３·７２５）ＴＣＩＤ＿（５０），抗体持续时间达９个月以上。用ＪＮ－１株免疫１日龄肉用雏鸡后７、１４、２１和２８天分别用强毒于足掌皮下攻击，临床保护率分别为２／１０、９／１０、１０／１０、１０／１０，病理保护率分别０／１０、７／１０、９／１０、１０／１０。抗体应答反应和特异性淋巴细胞转化试验证明，ＪＮ－１株的免疫作用是由细胞免疫和体液免疫共同完成。体外中和病毒试验显示，ＪＮ－１株抗血清能中和Ｊ－１、Ｓ＿（１１３３）、ＦＤＯ和Ｈ＿（９３０７）株。在５个有疫情的肉用种鸡场共免疫２８０００余只仔鸡和种鸡，免疫后再无ＡＶＡ疫情发生。     

新城疫V_4株弱毒疫苗的研究─—口服免疫剂量免疫期及保存期试验

本实验结果表明：新城疫Ｖ_４株弱毒苗的最小口服免疫剂量小于１０￣（－５）×０．５ｍｌ，Ｖ_４株弱毒冻干苗在室温（１８～３０℃）避光可保存１９个月以上；Ｖ_４株弱毒湿苗在室温（１８～３０℃）避光可保存５１天对鸡胚感染性不变；Ｖ_４株弱毒苗１次口服免疫的免疫期可达７个月以上。     

传染性法氏囊病病毒Ⅰ型变异株的分离鉴定及其多价弱毒苗免疫试验

先后在江苏、浙江、四川等８省（区）从临床患传染性法氏囊病的鸡群中采集法氏囊病料，分离到３２个野毒株，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，其中１７株病毒为传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），应用交叉中和试验，将分离毒株分为５个亚型，用ＩＢＤＶⅠ型标准变异株高免血清作中和试验鉴定，其中５个分离毒株有较高中和价，初步定为ＩＢＤＶⅠ型变异株。将其在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）上连续传代致弱，与标准Ⅰ型弱毒株联合制成多价弱毒疫苗，免疫试验表明多价弱毒疫苗具有良好的免疫效果，免疫组攻毒１００％保护，对照组攻毒死亡率为９２％     

犬肾传代细胞与犬肺巨噬细胞杂合体的获得与鉴定

通过细胞融合技术获得了１３个犬肾传代细胞（ＭＤＣＫ）与大肺巨噬细胞（ＤＬＭ）杂合细胞株，其中２株（分别命名为ｋＭＨ—１和ｋＭＨ—２）对犬瘟热病毒（ＣＤＶ）强毒敏感。对ＫＭＨ—１鉴定结果表明该细胞在外观上与亲本细胞ＭＤＣＫ相似，呈现上皮细胞样形态，２５世代细胞在２４～１４４小时之间为对数生长期，群体倍增时间为２３．６小时，染色体众数为７７条，呈现近二倍体样核型。该细胞对ＣＤＶ强毒和弱毒敏感，并产生典型的多核巨细胞样细胞病变（ＣＰＥ），同时也能支持传染性犬肝炎病毒（ＩＣＨＶ）的增殖，产生而萄串样ＣＰＥ，说明杂合细胞ｋＭＨ—１保留了双亲细胞的遗传特性，经传到７８代仍保持低代次细胞特性。     

猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究

用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ｐＫ１５、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒（Ｐ８３）对吃初乳前的小猪以８～１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定，达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。用Ｐ８３制成弱毒疫苗，对２２头８～１０日龄小猪进行免疾效力试验，１４头口服免疫，８头颈肌注射免疫，剂量均为２ｍｌ／头。免疫后２１ｄ以最小发病量（即原毒液的１：１２稀释液）及原毒液的２倍、４倍和８倍的稀释液经口进行强毒攻击，对照组１２头也以相对剂量同时攻击。结果免疫组仅口服免疫、经大于最小强毒攻击量６倍剂量攻击组中１头（１／２）有一过性轻微腹泻，发病不到２４ｈ即恢复。对照组的１２头中有１０头典型发病，严重腹泻，并有寒颤等症状，病程长达３～６ｄ，７ｄ后腹泻症状消失，但体况明显削瘦。试验证明Ｐ８３制备的弱毒疫苗的总免疫效力达９４．６％，表明Ｐ８３已具备弱毒疫苗株的要求。     

犬用“五联苗”过敏一例

犬用“五联苗”过敏一例犬用“五联苗”为解放军农牧大学军事兽医研究所生产的中试产品，是预防犬细小病毒、犬瘟热、犬传染性肝炎、副流感、狂犬病等五种病毒性传染病的冻干弱毒苗（两头份包装），使用前加４ｍｌ注射用水稀释，每只犬１次肌肉注射２ｍｌ。一般情况１９９...     

小熊猫接种犬瘟热疫苗后的抗体检

以犬用犬瘟热（ＣＤ）弱毒疫苗接种从产地新引入南京市玄武湖动物园的２只小熊猫（Ａ组），在接种后１１个月内每月采血１次，用微量中和试验检测其体内抗犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体效价。结果显示，小熊猫接种后１个月时抗体效价已达１∶１０００左右，２个月时效价最高，达１∶２０００左右，而后缓慢下降，至７和１１个月时分别约为１∶１００和１∶２０。同时检测了以前接种过同一疫苗的３只该动物园自己繁育的小熊猫（Ｂ组）和福州市动物园内的６只小熊猫（Ｃ组）的ＣＤＶ中和抗体效价，其效价变化类似于Ａ组。这些小熊猫在接种前均确认健康，在试验期间同样的饲养条件下未发生ＣＤ，提示犬用ＣＤ疫苗可用于小熊猫的ＣＤ预防，其产生的有效免疫力至少可持续６个月。     

Vero-2和MA-104细胞系染色体组型分析与致癌─致瘤性研究——在犬五联疫苗制备中替代BHK-21细胞系细胞株的筛选和检定

在用纯化３代的猫肾原代细胞（ＦＫＣ）和犬肾原代细胞（ＣＫＣ）皮下接种裸鼠无致癌致瘤性,以人类子宫颈癌细胞系（Ｈｅｌａ）超二倍体ＫＢ株、Ｘ株及超二倍体和亚四倍体ＮＭ２０／Ｘ株皮下接种裸鼠产生进行性恶性肿瘤比率分别为１０／１０,２５／２５和５／５的前提下,非洲绿猴肾细胞系亚二倍体（Ｖｅｒｏ２）ＪＣ株５～１９代和超二倍体ＹＡ株１２～１８代分别皮下接种２０和１０只裸鼠,均未产生肿瘤,恒河猴肾细胞系亚四倍体（ＭＡ１０４）ＪＣ株４代皮下接种５只裸鼠亦未产生肿瘤。不同株的Ｈｅｌａ和地鼠肾细胞系（ＢＨＫ２１）在３．３ｇ／Ｌ琼脂中均具有抛锚独立生长特性,并在终浓度３．１２５～２００ｍｇ／ｍＬ植物凝集素（ＰＨＡ）作用下出现凝集现象,而ＦＫＣ、ＣＫＣ及Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株、ＹＡ株既不具有抛锚独立生长特性,在不同浓度ＰＨＡ作用下也不发生凝集,符合非肿瘤源性细胞的特性。因此,Ｖｅｒｏ２细胞系ＪＣ株可用作病毒疫苗毒株的传代培养,而Ｖｅｒｏ２细胞系ＹＡ株和ＭＡ１０４细胞系ＪＣ株则不适宜。     

禽脑脊髓炎病毒的提纯和电镜观察

将禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株、１１４３株和ＮＨ９３７株分别经卵黄囊接种于６日龄ＳＰＦ鸡胚，接毒１０日后解剖鸡胚，收集尿囊液，采集脑、消化道和胰腺，用玻璃匀浆器制备２０％的组织悬液。组织悬液经３次冻融充分破坏细胞，释放病毒，然后以４００Ｏｒ／ｍｉｎ离心２０分钟，１００００ｒ／ｍｉｎ离心４０分钟。上清液经浓缩后轻轻加入已含２ｍｌＣｓＣｌ不连续密度梯度的５ｍｌ离心管内，再以４５０００ｒ／ｍｉｎｌ２℃离心２小时，在ＣｓＣｌ连续密度梯度内取出含ＡＥＶ的组分后经对蒸馏水透析除去ＣｓＣｌ，对聚乙二醇－６０００透析浓缩。病毒样本经１％磷钨酸负染后用透射电镜观察见到典型的ＡＥＶ粒子。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

鸡新城疫和传染性法氏囊病二联弱毒疫苗的研制及其应用

用鸡新城疫（ＮＤ）ＬａＳｏｔａＦ４株和传染性法氏囊病（ＩＢＤ）ＴＡＤ弱毒株研制成功鸡ＮＤ－ＩＢＤ二联弱毒疫苗。通过不同途径、不同剂量、安全性、保存期以及和单苗的对比试验、区域扩大试验，证明二联苗安全、可靠，免疫效果良好     

应用反转录 - 聚合酶链技术快速检测猪瘟病毒RNA的研究

依据猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）５′端非编码区保守序列设计一对ＰＣＲ引物，建立了检测ＣＳＦＶ的反转录聚合酶链（ＲＴＰＣＲ）技术。应用该技术从猪瘟兔化弱毒感染兔的脾、淋巴结、肾与肌肉等以及石门株强毒感染猪的脾与肌肉和湖北分离毒株感染猪组织匀浆液中均特异扩增出了１条预期大小为１９４ｂｐ的片段，从实验感染兔和猪的血液中也特异扩增出了该片段，但对牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）和健康兔脾总ＲＮＡ以及健康猪的血液ＲＮＡ扩增均为阴性。采用这种方法，对实验感染兔脾总ＲＮＡ的检测灵敏度可达１０－８ｇ，表明其灵敏度足以达到临床检验的要求。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型标准毒株（ＡＴＣＣＶＲ－２３３２）的ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７的序列,设计合成了一对引物２６３７４ＰＳ／２６３７５ＰＲ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术对６株ＰＲＲＳＶ北京分离株进行了检测。结果该引物对６株病毒均能扩增出与预期大小相符的ＲＴＰＣＲ产物,并与ＡＴＣＣＶＲ２３３２株扩增产物的大小相当,而欧洲型标准毒株（ＬＶ株）未获扩增片段。进一步用限制性内切酶进行酶切分析,发现这６株病毒及ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的ＰＣＲ产物皆出现相同的限制性酶切图谱,证实６株病毒均为ＰＲＲＳＶ。     

犬冠状病毒YS1株的致弱驯化与免疫试验

应用猫肾传代细胞(CRFK)单层接毒方法将犬冠状病毒(CCV)强毒YS1株连续传代驯化至60代,经安全性试验和免疫原性测定,该强毒株己驯化至弱毒水平,对犬安全,免度原性良好.     

牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株与野毒株PCR鉴别诊断方法的研究

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列,应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２,分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ－）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南１和云南２分离株进行了ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲＶＤＮＡ用引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２扩增均产生４５７ｂｐ的特异性片段,而ＴＫ－ＩＢＲＶ只出现１１０ｂｐ片段;用引物ＰＢ１和ＰＢ２对７株ＩＢＲＶＤＮＡ及ＴＫ－ＩＢＲＶＤＮＡ进行扩增均产生３３９ｂｐ的特异性片段;用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增,均未见特异性条带,从而证明该引物是特异的;ＰＣＲ的敏感性检测表明,该法可检测出３ｐｇ的病毒ＤＮＡ。所建立的方法可以鉴别野毒与ＴＫ－ＩＢＲＶ疫苗毒的感染。     

貂病毒性肠炎牛睾丸细胞弱毒疫苗株的安全性和免疫原性研究

用从患貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）死亡水貂分离的强毒株，经牛睾丸细胞（ＣＴ）和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）混合培养，强迫传代、克隆培育的ＭＶＥ弱毒株扩增制苗，给不同品系水貂注射或口服１～５ｍｌ．未发生临床反应。注苗后１２、６０、７０天和６个月攻毒，１００％保护；对照水貂全部发病，５０％死亡。通过对６５１只（次）水貂的安全性、免疫原性、遗传稳定性试验和中和抗体测定及同居感染试验，证明该弱毒株具有良好的安全性、免疫原性和遗传稳定性。     

杆状病毒表达的猪传染性胃肠炎病毒钉状糖蛋白在其血清学诊断上的应用

利用从猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ｍｉｌｅｒ株（Ｍ５Ｃ）克隆建立的一株重组杆状病毒（Ｒ２－２）表达的重组ＴＧＥＶ钉状糖蛋白（Ｓ），建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来检测猪群抗ＴＧＥＶ抗体。试验表明，用重组病毒Ｒ２－２接种ｓｆ９细胞（ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）所表达的重组蛋白量在接种后第７２ｈ达到最高值；该重组蛋白能与抗ＴＧＥＶＳ蛋白Ａ位点的单克隆抗体特异性结合。用阻断ＥＬＩＳＡ检测６８份来自无ＴＧＥＶ感染或ＴＧＥＶ（Ｐｕｒｄｕｅｌ５）免疫的仔猪或母猪血清，结果与ＴＧＥＶ蚀斑减数试验完全相符，灵敏度和特异性均为１００％。同时检测来自ＴＧＥＶ试验免疫猪、美国部分地区猪群、我国进口猪以及我国国内猪群血清６２７份，阳性检出率分别为８２．６１％、６１．６２％、５８．３３％和２９．１０％；用中和试验（微量中和试验或病毒蚀斑减数试验）检测的ＴＧＥ血清抗体阳性率分别为８０．８７％、５９．６０％、５６．１１％和３０．６０％，两种方法对抗ＴＧＥＶ抗体的检出率没有显著差异。     

FRIENDLY EXCHANGES

ＦＲＩＥＮＤＬＹＥＸＣＨＡＮＧＥＳ￥（ＪａｎｕａｒｙｔｏＪｕｎｅ，１９９４）Ｉｎ－ｃｏｍｉｎｇＶｉｓｉｔｓＪａｎｕａｒｙ＊Ａ３－ｍｅｍｂｅｒｄｅｌｅｇａｔｉｏｎｆｒｏｍＪａｐａｎＴａｋｅｏＨｉｒａｔａＤａｎｃｅＡｃａｄｅｍｙ＊Ａ５－ｍｅｍｂｅｒｄｅｌ...     

人工感染鸡包涵体肝炎病毒的鸡胚病理学观察

用３２只１１日龄ＳＰＦ鸡胚，随机分组，分别接种禽腺病毒（ＡＡＶ）２、３、４、５、８型种毒和野毒ａ、ｂ株悬液０．２ｍｌ／只。对接种后２４小时以后死亡的胚和１８日龄时扑杀的全部鸡胚进行大体病理变化、病理组织学变化和超微结构病理变化观察。试验结果表明，试验各组的鸡胚均发育不良，表现为胚体瘦小，羽毛稀少，ＡＡＶ－２、３、４、５、８型和野毒ａ、ｂ株均能对鸡胚致病，主要病变均为坏死性肝炎，在肝细胞核内和胞浆中形成嗜碱性或嗜酸性包涵体；透射电镜观察，试验各组肝细胞中均可见到病毒颗粒，核内可见电子密度致密的病毒前体物质，病毒直径６０～７０ｎｍ，无囊膜。ＡＡＶ－３型和野毒ｂ株在细胞核、胞浆、线粒体病毒颗粒排列为晶格状，其它各型多为散在分布。肝细胞超微结构变化主要表现为线粒体、内质网、高尔基复合体扩张甚至破裂，核糖体脱失，核染色质边集、浓缩和溶解，核膜破裂而核崩解。