适应Vero细胞传染性腔上囊病毒X毒株对鸡胚的致病性试验

适应Vero细胞传染性腔上囊病毒(IBDV)X毒株,通过对鸡胚的致死作用、病理变化的结果表明,IBDV X毒株在Vero细胞上传代后,各试验代次毒株均能适应鸡胚,并引起鸡胚死亡,对鸡胚的致病性随传代次数的增加而减弱.     

诺氟沙星软膏的透皮吸收试验

不同浓度氮酮(Azone)及不同浓度N-甲基-2-砒咯烷酮(NP)对诺氟沙星(Nor)体外透皮吸收试验结果表明,1%～5%(质量分数)的Azone对Nor透皮吸收均有一定促进作用,但在统计学上无显著差异,Nor累积透皮释药量与时间呈良好的线性关系,符合零级动力学过程;NP对Nor无透皮促渗透作用.     

利用鸡胚感染测定柔嫩艾美球虫对磺胺喹恶啉和地克珠利的耐药性

将柔嫩艾美球虫鸡胚适应株(保定株)通过每胚注入1000、500和250 μg磺胺喹恶啉及每胚注入5、0.5和0.25μg地克珠利的鸡胚传代.结果,柔嫩艾美球虫鸡胚适应株在注入磺胺喹恶啉500、250μg的鸡胚和注入地克珠利0.5、0.25μg的鸡胚传至第11代时对药物产生了抗药性.     

球虫抑制剂活性在鸡胚中的作用

本实验是为了评价一些化学药品对生长在鸡胚里的鸡球虫内生性发育阶段的作用,和比较在鸡胚里与在鸡体内所获得的结果。所使用的药品,是一些众所周知的对球虫有抑制性能的化学药品。     

苦豆籽对鸡球虫致病作用的影响

苦豆籽具有一定的杀虫作用,当饲料或饮水中苦豆籽的浓度达10.0 g/kg、10.0 mL/L时鸡体内的球虫卵囊数明显减少;但苦豆籽的毒性作用也较大,将其混于饲料或饮水中饮喂鸡即可导致鸡的生长发育迟滞,体质下降,对球虫的易感性增高,从而使鸡较早地出现各种症状.由于毒性作用对机体的影响较大,所以苦豆籽不宜在饲料或饮水中添加来预防鸡球虫病.     

霉形体对新城疫、鸡传染性支气管炎病毒疫苗株体外增殖的影响

霉形体是组织细胞培养中常见的污染物,它可引起病毒增殖改变,即有的病毒增殖被抑制,有的增殖反而增强,但也有的无明显变化。据报道,国内实验室现行使用的细胞中霉形体污染情况严重;国内用鸡胚和鸡胚细胞培养制造的活疫苗也被霉形体污染,而且证明其污染来源为鸡胚。但实际中霉形体污染对疫苗株病毒增殖的作用尚不清楚。本试验在鸡胚培养中,研究了自疫苗中分离的鸡毒霉形体对新城疫病毒Ⅰ系、Ⅱ系、LaSota系和鸡传染性支气管炎病毒H_(120)株增殖的影响。     

鸭胚细胞培养鸡新城疫Ⅰ系疫苗试验

鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗,在我国应用多年,对鸡新城疫疫病防治,起了很大的作用。在生产方法方面,近年来,随着组织培养技术的发展及在生产上的应用,和为了适应养鸡业大发展的需要,由用鸡胚生产疫苗改为用鸡胚成纤维细胞生产疫苗。这种方法,比起鸡胚疫苗有很多优点,但仍存在严重的缺点,带有危险性。因为有些禽病,如鸡白血病、鸡伤寒病、鸡传染性支气管炎、鸡支原体病(慢性呼吸道病)等,除了通过其他方式传播外,还可经     

19种抗球虫药和抗疟药配合应用的药效试验

测定了１９种抗球虫药和抗疟药及其部分药物配合应用的药效，其中青蒿素、蒿甲醚、奎宁和氯喹在鸡胚中无抗球虫作用；乙胺嘧啶和乙氧乙胺苯甲酯在高浓度时对柔嫩艾美耳球虫有较弱的抗球虫活性；其余１３种药物在鸡胚中均表现良好的抗球虫活性；还进行了数种抗球虫药在鸡胚中的配合应用。试验结果表明，利用柔嫩艾美耳球虫子孢子感染鸡胚进行抗球虫药效测定，具有灵敏度和准确性高、节省时间和试验材料等优点，尤其适用大规模药物筛选     

鸡胚母源抗体对不同株新城疫病毒增殖的影响

鸡胚培养是增殖新城疫病毒（ＮＤＶ）最简便、有效的方法之一。ＳＰＦ鸡胚成本高、来源少，主要用于科研和种毒增殖；普通鸡胚来源广、价格便宜，适于ＮＤＶ灭活苗的大量生产。但普通鸡胚都有一定的ＮＤＶ母源抗体，疫苗毒的生产能否用普通鸡胚，关键在于鸡胚母源抗体对Ｎ...     

两株鸡传染性囊病病毒对Vero细胞的适应性研究

目前对鸡传染性囊病(IBD)的主要防制办法是进行疫苗接种,而所用的疫苗皆由鸡体组织、鸡胚或鸡胚细胞制造。由于有些病原体可通过种蛋或鸡胚垂直传播,而我国目前无特定病原(SPF)种蛋尚未被广泛应用。为此,我们用Vero细胞对两株鸡传染性囊病病毒(IBDV)的培养特性进行了比较研究,目的是探索用Vero细胞生产IBD疫苗的可能性。 (一)材料和方法 1.种毒: (1)Lukert弱毒株(简称LS):由上海农学院高熙星教授惠赠。经鸡胚成纤维细胞(CEF)     

猪源新城疫病毒的分离鉴定

从发生呼吸道症状的病猪鼻腔中分离到 1株病毒 ,经电镜观察、血凝和血凝抑制试验 ,确定为新城疫病毒。经对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、对鸭胚和鸡、鸭的致死性测定及荧光PCR检测 ,证明分离毒为温和型毒株。     

嗜肾型鸡传染性支气管炎W93株活疫苗的研究及其S1基因的克隆与序列测定

利用鸡胚分离法由发生肾病变型传染性支气管炎 (IB)的病鸡分离到嗜肾型传染性支气管炎病毒 (NIBV)W株 ;再通过SPF鸡胚连续传代 ,获得了NIBV疫苗毒株W93;继而借助RT PCR法扩增了其S1基因 ,并测定了S1基因的核苷酸序列 ,分析了与相关毒株间的同源性。结果显示 ,W93株在鸡胚中的病毒产量达 10 7.8EID50 /0 .1mL ,适用于所有日龄的雏鸡 ;W93S1基因的核苷酸序列与马萨诸塞型的M4 1株、H52 株和H12 0 株的同源性很高 ,分别为 96 .9%、96 .8%和 97.1%。表明 ,W93可作为制备IB弱毒疫苗的毒株     

黑龙江省鸭肝炎病毒HD-Ⅰ株的分离与鉴定

从黑龙江省某鸭场疑似鸭病毒性肝炎 (DVH )的发病雏鸭肝等组织中分离到 1株病毒HD Ⅰ株。经病理学检查、电镜观察、鸭胚中和试验、雏鸭保护试验、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒 (DHV)。证实引起该鸭场雏鸭发病和死亡的主要原因为DVH所致。用DHV标准R85 95 2毒株多次强化免疫健康鸡 ,获得高效价的鸡抗鸭肝炎超免疫抗体。     

鸡Toll样受体3胞外区片段的克隆表达及多克隆抗体的制备

以笔者所在课题组扩增测序的广西三黄鸡Toll样受体3(TLR3)基因为基础,采用降落PCR法从鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外功能区片段chTLR3-LRR,并构建该片段的原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过Western-blot鉴定多克隆抗体的特异性。结果显示,该片段长度为834bp,与预测的片段大小、碱基序列相符;构建的原核表达重组质粒pET-chTLR3-LRR经IPTG诱导后,表达出预期的30ku的重组蛋白,所获得的鼠抗鸡TLR3多克隆抗体能够与经传染性法氏囊炎病毒(IBDV)刺激后的鸡胚成纤维细胞的TLR3蛋白发生特异性免疫反应。表明,所选择的区域片段具有很好的免疫原性,制备的鼠抗鸡TLR3多抗具有良好的特异性,这为进一步研究鸡TLR3的功能提供了重要材料。     

NDV感染的鸡胚成纤维细胞TLR7 mRNA表达的动态变化

为研究新城疫病毒(NDV)感染过程中,鸡Toll样受体7(chTLR7)表达的变化情况,采用Trizol法抽提NDV感染组和正常对照组鸡胚成纤维细胞(CEF)的总RNA,反转录成cDNA。以β-actin基因为内参,应用实时荧光定量PCR法检测细胞中chTLR7基因表达的动态变化。结果显示,CEF被NDV感染后第12、24、36、48小时,感染组chTLR7mRNA表达量分别是正常对照组的18.63、0.05、1.37、10.62倍,组间差异均极显著(P<0.01)。结果提示,chTLR7可能参与了NDV感染CEF的早期过程。     

抗传染性支气管炎病毒中药的研究

用细胞培养法、鸡胚培养法对车前子、麦冬等 4 0种中药进行抗传染性支气管炎病毒(IBV)的筛选试验。通过细胞病变 (CPE)抑制试验发现 ,石榴皮等 5种中药有抑制CPE的作用。培养细胞有 2 0 %发生CPE ,认为这些中药有抗IBV的作用。应用空斑形成抑制试验对 5种抗IBV中药进行复筛 ,结果表明 5种中药均有不同程度的抑制病毒空斑形成作用 ,其中以石榴皮等 2种中药作用较强 ,空斑形成抑制率可达 98%以上。应用鸡胚培养法对 5种中药进行抗IBV试验 ,结果发现 5种中药均显著地减少了鸡胚病变及胚体的死亡 ,其中以石榴皮等 2种中药抑制胚体病变的作用最强。通过不同加药时间观察到在接毒前 4 8h给药 ,有 2种中药具有明显抑制CPE的作用 ;接毒同时加药以及接毒后 1h加药 ,这 5种中药均能明显抑制CPE。     

柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及应用

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1、MDBK、Vero、BHK、MDCK五种细胞的入侵活力。优化了在子孢子入侵活力检测时,DF-1细胞最佳培养条件。结果表明,柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞中可发育为第一代裂殖子。在不同培养温度下,子孢子对DF-1细胞的入侵活力均高于其他细胞。优化后的DF-1细胞培养体系的培养程序为:用含100mL/L胎牛血清的DMEM稀释DF-1细胞,以每孔1×105个细胞铺被24孔板,37℃、50mL/L CO2培养24h后,用含50mL/L胎牛血清的DMEM换液后,每孔接入3×105个子孢子,41℃、50mL/L CO2培养8～12h,收集细胞进行检测。     

鸡胚免疫器官组织学发育过程观察

通过对孵化至 12～ 2 1日龄鸡胚的免疫器官胸腺、脾及腔上囊进行组织学连续性观察 ,较为详细地描述了鸡胚免疫器官的组织发育过程。观察结果显示 ,胸腺的组织结构发育和形成较早 ,自 12日龄起胸腺就已形成原始的胸腺小叶 ;虽然脾在 12日龄时就已初具轮廓 ,但脾直到 18日龄才开始隐约形成形态可辨的红髓和白髓 ;腔上囊淋巴滤泡自鸡胚发育到 17日龄时即渐趋明显 ,但完整的滤泡皮质和髓质结构在出壳前仍然处于分化成熟阶段。     

中国禽呼肠孤病毒番鸭分离株的纯化及其核酸与结构蛋白分析

将番鸭呼肠孤病毒国内分离株在番鸭成纤维细胞 (DEF)上克隆纯化 3次后 ,在鸡成纤维细胞 (CEF)上增殖 ,收获的细胞培养物经 3次冻融 ,采取差速离心、超速离心、非线性蔗糖密度梯度离心和脱糖处理相结合的方法进行提纯 ;对不同梯度区带的蛋白提取物经电镜观察、毒价(TCID50 )和含毒量测定得到病毒纯化物 ;最后对病毒纯化物进行琼脂糖核酸电泳和SDS PAGE蛋白电泳分析。结果 ,核酸电泳得到 10条RNA带 ,分列呈“334”形式的 3组 ,其迁移率除M 3基因外无明显差异 ;蛋白电泳得到分子质量分别为 14 9.0、12 9.0、111.0、79.0、75 .0、5 0 .0、4 2 .0、39.0、37.0、35 .9、32 .0、2 9.0ku的 12条蛋白带 ,其中 5个蛋白的分子质量与参考株S1133相近。该分离株具有禽类呼肠孤病毒核酸和蛋白电泳图谱的共同特征。     

鸡马立克氏病病毒HC135分离株的致病性

从辽宁省某鸡场疑似马立克氏病发病鸡外周血淋巴细胞中分离到1株适应鸭胚成纤维细胞生长的马立克氏病病毒(MDV),经蚀斑克隆和细胞传代,成功培育了1株增殖性能稳定的MDV细胞毒株,命名为HC135株;将HC135株第4代细胞培养物分别人工感染非免疫和不同疫苗免疫的SPF鸡,分析其对鸡的致病力,分离毒株攻毒对照组鸡的发病率为100%(10/10),死亡率为30%(3/10);HVT疫苗及HVT/SB1双价疫苗对分离毒株的保护指数分别为22.2和40.0。结果表明,该毒株可以突破HVT疫苗和HVT/SB1双价疫苗的免疫保护,具有特超强毒株(vv+MDV)的特点;也证实了我国商品鸡群中存在vv+MDV毒株。同时比较了HC135株与14株参考毒株的Meq基因序列,发现其Meq基因的ORF内没有基因片段的插入或缺失,推导的氨基酸存在点突变,这种突变符合高毒力毒株的变异规律。