两株不同血清型禽源多杀性巴氏杆菌的理化特性研究

禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９（８∶Ａ 型） 和Ｃ４８１（５∶Ａ 型） 对营养的需要较高,在一般培养基上生长不良,相比之下,Ｃ４８１比Ｐ１０５９ 生长更差,但在胰蛋白胨肉汤和加５ ｍ Ｌ／Ｌ 血清的普通培养基中两株菌均生长丰盛;两株菌的生长曲线显示,Ｃ４８１在对数生长期的繁殖速度较快,最高菌数略低,但衰落期细菌死亡速度较慢;对培养基中ＮａＣｌ 含量的要求,Ｃ４８１ 为０ ～２ ．７ ％ ,Ｐ１０５９ 为０ ．９ ％ ～２ ．１ ％ ;对ｐＨ 的要求,Ｃ４８１ 为７ ．４ ～７ ．８ ,Ｐ１０５９ 为７ ．０ ～７ ．４ ;两株细菌用小白鼠连续传５ 代复壮后,对小白鼠的最小致死量（ ＭＬＤ） ,Ｃ４８１为６ 个菌,Ｐ１０５９ 为９ 个菌。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔接种和１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选出８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株、ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应。经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＧ２ａ；ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０￣３～１０￣５之间。     

香菇多糖对vAMV感染雏鸡SOD活性的影响

３日龄肉用ＡＡ雏鸡人工感染禽成髓细胞性白血病强毒（ｖＡＭＶ）后，禽成髓细胞性白血病（ＡＭＢ）的发病率达８６．７％，病死率为７０．０％，与健康雏鸡相比，脾脏、胸腺、法氏囊、心脏、肝脏、肾脏及性腺的总超氧化物歧化酶（Ｔ－ＳＯＤ）和锰超氧化物歧化酶（Ｍｎ－ＳＯＤ）的活性于９日龄时明显升高（Ｐ＜０．０１），于１６日龄后则显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）而铜超氧化物歧化酶（Ｃｕ－ＳＯＤ）和锌超氧化物歧化酶（Ｚｎ－ＳＯＤ）的活性无显著变化（Ｐ＞０．０５）。ｖＡＭＶ感染雏鸡注射香菇多糖，ＡＭＢ发病率为６７．５％，病死率为５５．０％。同对照组相比，感染后注射香菇多糖组的Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ及Ｃｕ－ＳＯＤ的活性初期均显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），中、后期变化不显著（Ｐ＞０．０５）。     

禽霍乱改进型灭活苗的研制

用禽源多杀性巴氏杆菌Ｃ４８－１强毒株接种１日龄雏公鸡，制取肌肉脏器菌液，与Ｃ４８－１肉汤培养菌液按一定比例混合，制备成禽霍乱氢氧化铝胶灭活苗。攻毒试验表明，该苗对异型菌株Ｐ１０５９及从皖中西部地区分离的禽巴氏杆菌强毒株均有１００％保护力。     

犬肾传代细胞与犬肺巨噬细胞杂合体的获得与鉴定

通过细胞融合技术获得了１３个犬肾传代细胞（ＭＤＣＫ）与大肺巨噬细胞（ＤＬＭ）杂合细胞株，其中２株（分别命名为ｋＭＨ—１和ｋＭＨ—２）对犬瘟热病毒（ＣＤＶ）强毒敏感。对ＫＭＨ—１鉴定结果表明该细胞在外观上与亲本细胞ＭＤＣＫ相似，呈现上皮细胞样形态，２５世代细胞在２４～１４４小时之间为对数生长期，群体倍增时间为２３．６小时，染色体众数为７７条，呈现近二倍体样核型。该细胞对ＣＤＶ强毒和弱毒敏感，并产生典型的多核巨细胞样细胞病变（ＣＰＥ），同时也能支持传染性犬肝炎病毒（ＩＣＨＶ）的增殖，产生而萄串样ＣＰＥ，说明杂合细胞ｋＭＨ—１保留了双亲细胞的遗传特性，经传到７８代仍保持低代次细胞特性。     

中药复方禽瘟王对机体免疫功能的影响

以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠、京白蛋用鸡为对象，以白细胞介素－２（ＩＬ－２）、干扰素（ＩＦＮ）和自然杀伤细胞（ＮＫＣ）为指标，观察了中药复方制剂禽瘟王对机体ＩＬ－２，ＩＦＮ，ＮＫＣ网络的影响。结果表明，禽瘟王既能显著增强小鼠ＩＬ－２的活力，又能强化小鼠ＮＫＣ的杀伤活性，同时还可提高鸡体ＩＦＮ的效价水平。提示充分发挥ＩＬ－２，ＩＦＮ，ＮＫＣ网络的正向调节效应，可能是中药复方禽瘟王的药效学基础。     

口蹄疫病毒12S抗原免疫学性质的研究

用口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）Ａ型１２Ｓ基础免疫，Ｏ型１２Ｓ加强免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞融合，筛迭，得到了一组群特异性单抗。用ＲＰＨＩ，ＡＧＤ，ＥＬＩＳＡ及阻断式和竞争式ＥＬＩＳＡ分析这组单抗得出以下结论：１２Ｓ抗原至少存在一个１２Ｓ独有的型间交叉的群特异性抗原表位，该表位是非中和性抗原表位，免疫原性较低；这组群特异性单抗可与ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ发生不同程度的反应，表明该表位存在于ＦＭＤＶＯ，Ａ，Ｃ，Ａｓｉａ－１型１２Ｓ上，但不同血清型的１２Ｓ表位构成存在细微的差别     

可溶性CD_2分子及其配体的功能研究

检测了绵羊、猪红细胞培养上清中可溶性ＣＤ２配体（ｓＣＤ２Ｌ）和猪血清可溶性ＣＤ２分子（ｓＣＤ２）在猪外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）增殖及对绵羊红细胞破坏中的作用。结果表明，ｓＣＤ２对绵羊红细胞的溶血作用可被ｓＣＤ２Ｌ所抑制，ｓＣＤ２Ｌ的这种抑制作用随其红细胞培养浓度在一定范围内的升高而加强；绵羊红细胞培养上清中ｓＣＤ２Ｌ能单独或辅助植物血凝素Ｐ（ＰＨＡＰ）促进猪ＰＢＭＣ增殖，其作用强弱与红细胞培养浓度密切相关，当绵羊红细胞浓度为１．４×１０９个／ｍＬ时效果最佳。ｓＣＤ２对ｓＣＤ２Ｌ诱导的猪ＰＢＭＣ增殖具有抑制作用，抑制作用随ｓＣＤ２水平上升而增强。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

鸡源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为了对云南某鸡场发生鸡急性死亡的疑似禽霍乱病例进行病原确诊。无菌采集送检死鸡肝脏组织进行细菌分离培养、生化鉴定、细菌16S rRNA基因分析及荚膜分型鉴定，对分离菌株进行耐药性、致病性分析。结果，该分离菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌；药敏试验表明，分离菌对头孢氨苄、头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林等8种药物敏感，对大观霉素、复方新诺明等6种药物中度敏感，对卡那霉素、链霉素、四环素等12种药物耐药；耐药基因检测显示，该分离株仅含有磺胺类sul2基因和四环素类tetB基因；动物试验表明，接种500 CFU的45日龄鸡在接种后7 d内全部死亡，接种12.5 CFU的小鼠在接种后48 h内全部死亡，死亡小鼠病理组织切片显示各器官均有不同程度的病变。上述结果表明，该分离株为荚膜A型多杀性巴氏杆菌强毒株，是该鸡场发生疫情的病原。本研究结果为我国鸡源多杀性巴氏杆菌的遗传特性研究提供了基础资料。     

胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ－ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙稀胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６ｍｇ／Ｌ的ＩＢＤＶ蛋白。比较了ＬＰＡ、直接萤光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ的检出率高于ＡＧＰ，ＬＰＡ和ＤＦＡ检测结果的符合率为８６％。     

256株鸭源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定及病原特性研究

从四川省不同地区分离到２５６株鸭源多杀性巴氏杆菌，采用Ｃａｒｔｅｒ荚膜群鉴定法和Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ热稳定抗原鉴定法对其进行了血清学鉴定，并对病原的部分特性进行了研究。结果表明，有２５４株为荚膜Ａ群菌，占９９．２２％（２５４／２５６），其中５Ａ型占９５．７％（２４５／２５６），８Ａ型占１．９５％（５／２５６），９Ａ型占１．５６％（４／２５６），未定型占０．７８％（２／２５６）。测定了鸭巴氏杆菌对药物的敏感性。分离鉴定的鸭巴氏杆菌具有良好的免疫原性     

禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析

为探讨禽多杀性巴氏杆菌omph和ompa基因单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果,利用PCR技术扩增了禽多杀性巴氏杆菌omph和ompa基因片段,并克隆入pcDNA3.1(+),构建了DNA疫苗pcDNA-OMPH(pOMPH)、pcDNA-OMPA(pOMPA)和pcDNA-OMPH/OMPA(pOMPHA),将其体外转染SP2/0细胞,用间接免疫荧光试验检测其表达情况。同时以弱毒活疫苗作为阳性对照,pcDNA3.1(+)和PBS作为阴性对照,分别免疫4周龄鸡,检测血清特异性抗体水平、外周血淋巴细胞增殖情况和IFN-γ分泌情况,经强毒攻击后计算各疫苗的保护率。结果显示,融合DNA疫苗组血清抗体水平与弱毒活疫苗相当,明显高于单价DNA疫苗(P<0.05);pOMPHA组的刺激值(SI值)和IFN-γ分泌水平显著高于其他各组(P<0.05),单价DNA疫苗组略高于弱毒活疫苗组;强毒攻击后各DNA疫苗均可为动物提供一定的保护力,其中融合DNA疫苗的保护率最高,可达86.7%,其次为弱毒活疫苗,为73.3%,而单价DNA疫苗则低于弱毒活疫苗,仅为60%和66.7%。结果表明,DNA疫苗尤其是融合DNA疫苗在预防禽多杀性巴氏杆菌病(禽霍乱)方面具有较好的应用前景。     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ＿（１１）／７５ｃ，ＳＢ＿１，ＨＶＴ＿（ＦＣ１２６）三个马立克氏病毒株分别免疫Ｂａｌ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒（ＭＤＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ＿３、ＦＭ＿（１７）、ＦＭ＿（２４）、ＦＭ＿（２８）、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（４５）、ＦＭ＿（６２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５４）、ＦＭ＿（１５９）．这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０￣３～１０￣５，其中ＦＭ＿３、ＦＭ＿（４２）、ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（１５９）等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，腹水抗体效价为１０￣３～１０￣５。ＦＭ＿（１５０）识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿３、ＦＭ＿１７识别血清Ｉ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（５３）、ＦＭ＿（５７）识别血清Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４５）识别血清Ｉ和Ⅱ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（２４）识别血清Ⅱ型和Ⅲ型ＭＤＶ；ＦＭ＿（４２）能识别三个血清型ＭＤＶ。这些单克隆抗体可用于ＭＤ早期诊断，和疫苗质量的监测。     

禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子的研究

禽多杀性巴氏杆菌交叉保护因子存在活鸡体培养物中。本文用鸡 活体培养禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)强毒株(血清1型),在菌血症时采血经 差速离心收获细菌,制成的死菌苗对异型菌株C_(44-42)(血清3型)和P_(1059) (血清3型)攻毒产生交叉保护作用。而41℃肉汤培养的C_(48-1)菌株则不具有这种交叉保护作用。 活体培养的细菌经冻融、溶菌酶、透明质酸酶、DN_(ase)、EDTA、Triton X-100等处理溶解后,细菌溶解物对异型菌株保护率达100％,而其溶解物的上清和沉淀时异型菌株保护率也达66.7％及80％。而溶解物沉淀经蛋白酶处理后,则失去了交叉保护能力,说明产生交叉保护作用的交叉保护因子(CPF)可能是蛋白质。 生化分析表明,活体培养的禽多杀性巴氏杆菌和肉汤培养的禽多杀性巴氏杆菌其物质含量是不同的。活体培养的细菌溶解物含CPF,其蛋白与糖含量比(P/C)为3.97:1,而肉汤培养的细菌P/C为1.01:1。SDS-PAGE分析表明,有一分子量在17200～30000之间的蛋白成分仅存在于活体培养的细菌中,经测算其分子量大约为19320。这些研究表明,分子量为19320的蛋白质可能就是存在于活体培养物中的交叉保护因子。     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＦＭ＿１４）及其荧光标记物（ＦＭ＿１４－ＦＩＴＣ），对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳ－Ａ）和琼脂扩散试验（ＡＧＰ）三种检测方法的比较。结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６～８天的样品中检出抗原。２２例人工感染鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的整鸡阳性率分别为９６．８％、９５．２％和３８．７％；所有的ＡＧＰ阳性标本Ｄｏｔ－ＥＬＩ－ＳＡ和ＤＦＡ均为阳性，后两种方法的符合率为８７％。９６批次（被检鸡群达３８７００头份）野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片ＤＦＡ阳性率分别为４０％，１１％、１０％和８８％，而总阳性率则为９５％。     

鸡源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为了对云南某鸡场发生鸡急性死亡的疑似禽霍乱病例进行病原确诊,无菌采集送检死鸡肝脏组织进行细菌分离培养、生化鉴定、细菌16S rRNA基因分析及荚膜分型鉴定,对分离菌株进行耐药性、致病性分析。结果,该分离菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌;药敏试验表明,分离菌对头孢氨苄、头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林等8种药物敏感,对大观霉素、复方新诺明等6种药物中度敏感,对卡那霉素、链霉素、四环素等12种药物耐药;耐药基因检测显示,该分离株仅含有磺胺类sul2基因和四环素类tetB基因;动物试验表明,接种500 CFU的45日龄鸡在接种后7 d内全部死亡,接种12.5 CFU的小鼠在接种后48 h内全部死亡,死亡小鼠病理组织切片显示各器官均有不同程度的病变。上述结果表明,该分离株为荚膜A型多杀性巴氏杆菌强毒株,是该鸡场发生疫情的病原。本研究结果为我国鸡源多杀性巴氏杆菌的遗传特性研究提供了基础资料。     

分泌抗鸡病毒性关节炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用鸡病毒性关节炎病毒（ＲｅｏＶ）免疫８ＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ＿２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下融合，用ＥＬＩＳＡ法检测和筛选，以有限稀译法克隆３次，获得４株分泌抗ＲｅｏＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，在传代期间能稳定地分泌ＭｃＡｂ。用杂交瘤细胞注射ＥＡＬＢ／Ｃ小鼠诱生腹水，其ＥＬＩＳＡ抗体效阶达４０００～８０００，在－７０℃条件下保存半年，其抗体效价不变。特异性分析结果表明，该ＭｃＡｂ只特异地与ＲｅｏＶ发生反应，而不与ＮＤＶ、ＩＢＶ、ＩＢＤＶ发生反应。     

牛O-A型口蹄疫双价灭活苗研究——效力试验和最小免疫剂量试验

用制备的６ 批牛 Ｏ Ａ 型口蹄疫（ Ｆ Ｍ Ｄ） 双价灭活疫苗对黄牛进行了安全性试验、效力试验和最小免疫剂量试验。结果表明：免疫牛对 Ｏ 型和 Ａ 型同源强毒（１００ ０００ Ｉ Ｄ５ ０） 攻击的近期免疫保护率分别为９１ ．３ ％ 和１００ ％ ;免疫后１８０ ｄ时,保护率分别为１００ ％ 和９３ ．３ ％ ;免疫后２４０ ｄ 时,保护率分别为６０ ．０ ％ 和５０ ．０ ％ 。疫苗经２ ～８ ℃保存３６５ 和５４７ ｄ 后,接种牛对 Ｏ 型同源强毒攻击的保护率分别为１００ ％ 和８５ ．７ ％ ;对 Ａ 型同源强毒攻击的保护率分别为９１ ．７ ％ 和１００ ％ 。免疫剂量为２ 和３ ｍ Ｌ 时,对 Ｏ 型同源强毒攻击的保护率分别为７５ ．０ ％ 和１００ ％ ,对 Ａ 型的保护率均为１００ ％ 。     

抗兔轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）与经兔轮状病毒（ＬａＲＶ）免疫的ＢＡＬＢ／ｃ。系小鼠脾细胞进行融合，融合成功率为２２％。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）筛速杂交瘤细胞，阳性率为２９％左右。对其中６株强阳性的杂交瘤细胞进行了亚克隆，获得高产亚克隆杂交名细胞，用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠生产了腹水，鉴定后选取２株强阳性高效阶的杂交瘤细胞，以ＥＬＩＳＡ阻断试验检验其分泌抗体的特异性，以直接ＥＬＩＳＡ测其敏感性，用琼脂双扩散试验鉴定类和亚类型别。结果１Ｂ＿３为ＩｇＧ，，２Ｂ＿４为ＩｇＧ＿（２ｂ）。