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用鸡病毒性关节炎病毒(ReoV)免疫8ALB/C小鼠,取其脾细胞与SP_2/O细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA法检测和筛选,以有限稀译法克隆3次,获得4株分泌抗ReoV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,在传代期间能稳定地分泌McAb。用杂交瘤细胞注射EALB/C小鼠诱生腹水,其ELISA抗体效阶达4000~8000,在-70℃条件下保存半年,其抗体效价不变。特异性分析结果表明,该McAb只特异地与ReoV发生反应,而不与NDV、IBV、IBDV发生反应。 相似文献
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以蔗糖反透析浓缩及SephadexG 200层析纯化F48E8和LaSota新城疫病毒(NDV),取纯化的病毒液免疫接种BALB c小鼠,将小鼠脾细胞与NS 1骨髓瘤细胞融合,经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT)培养基选择,间接ELISA检测,有限稀释法克隆,筛选出了3株杂交瘤细胞,依次命名为1D4、1D5、16G12。3株杂交瘤细胞的染色体数为80~100,并能稳定传代,其产生的单克隆抗体重链属于IgG1,轻链属于κ链;ELISA检测时仅与NDV发生特异性反应,而与其他常见禽类病毒抗原不出现交叉反应,应用这些单克隆抗体对NDV分离株进行了分群研究。 相似文献
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以抗鸡新城疫病毒(NDV)单抗夹心ELISA试验为基础,在酶标抗体(HRP-F_(23))稀释液中加入4%(w/v)聚乙二醇(PEG)6000,建立了PEG-EL15A法,使用此法检测临诊样品,与单抗夹心ELISA相比,时间缩短70分钟且提高了OD_(490)值,易于识别。结果表明,PEG-ELISA法具有实际应用价值。PBG能加强抗原-抗体反应的速率和强度,这种效应在固相夹心ELISA第二步表现尤其明显。PEG的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ELISA试验可能具有普遍意义。 相似文献
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比较了直接法单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA)和常规酶联免疫吸附试验诊断耕牛日本血吸虫病方面的差异,实验结果表明,直接法McAb-Dot-ELISA对实验感染耕牛的阳性检出率为100%(32/32),对安徽省自然感染耕牛(粪孵阳性)的阳性检出率为93.90%(418/445),对健康耕牛的阴性符合率为98.50%(66/67);而常规ELISA对实验感染耕牛的阳性检出率为95.35%(41/43),对安徽省同一地区的自然感染耕牛的阳性检出率为90.82%(188/207),对健康耕牛的阴性符合率为86.27%(88/102)。提示,直接法MoAb-Dot-ELISA不仅具有操作简便、反应快速、成本低廉等优点,而且在阳性检出率和阴性符合率方面均优于常规ELISA。 相似文献
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用从当地分离鉴定的山羊B组轮状病毒KB-63毒株,在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒,制备抗原,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)及生物素-亲和素系统酶联免疫吸附试验(BABELISA)。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明,其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法(CIE)和聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)作了对比研究,表明此三种方法均较CIE和PAGE法敏感。用这三种方法对成人、婴儿、绵羊羔、山羊羔、仔猪的120份腹泻粪样(包括实验室接种材料)进行检测,三种方法的检出率分别为16.7%、18.3%、25%,而CIE和PAGE的检出率分别为12.5%和8%。 相似文献
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应用鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体(FM_14)及其荧光标记物(FM_14-FITC),对接种IBD疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验(DFA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELIS-A)和琼脂扩散试验(AGP)三种检测方法的比较。结果表明,鸡接种疫苗后10天内DFA和Dot-ELISA均呈阳性反应,而AGP只在接种后6~8天的样品中检出抗原。22例人工感染鸡和40例自然发病鸡组织的检测结果表明,DFA和Dot-ELISA的敏感性基本一致,且高于AGP,它们的整鸡阳性率分别为96.8%、95.2%和38.7%;所有的AGP阳性标本Dot-ELI-SA和DFA均为阳性,后两种方法的符合率为87%。96批次(被检鸡群达38700头份)野外送检病例之脾、肺、肾和法氏囊组织切片DFA阳性率分别为40%,11%、10%和88%,而总阳性率则为95%。 相似文献
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用猪水泡病病毒(SVDV)抗独特型抗体(Ab_2)2B_6─Ab_2和4H_9─Ab_2分别免疫BALB/c小鼠,制备SVDV抗─Ab_2(Ab_3),通过ELISA、正向间接血凝试验(PHA)、反向被动血凝抑制试验(RPHI)和细胞中和试验结果表明,Ab_3为特异性的抗SVDV中和抗体。提示SVDVAb_2能模拟SVDV抗原的中和表位,在实验动物中具有类似SVDV的免疫原性。SVDVAb_2抑制ELISA结果表明,SVDVAb_2可作为一种生物探针,检测猪血清中抗SVDV抗体。 相似文献
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建立的检测猪生殖与呼吸综合征(PRRS)抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA),其抗原包被浓度为1.7mg/L,血清的最适稀释度为1∶100,酶标兔抗猪IgG的工作浓度为1∶2000。比较试验表明,ELISA的敏感性优于间接免疫荧光试验(IFA)。用ELISA检测1991年从美国进口猪的血清76份,阳性率为零;1995年从加拿大进口猪的血清163份,阳性率为5.52%;北京地区甲猪场的血清121份,阳性率为47.1%;北京地区乙猪场的血清43份,阳性率为41.8% 相似文献
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利用从猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Miler株(M5C)克隆建立的一株重组杆状病毒(R2-2)表达的重组TGEV钉状糖蛋白(S),建立了一种阻断酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测猪群抗TGEV抗体。试验表明,用重组病毒R2-2接种sf9细胞(spodopterafrugiperda)所表达的重组蛋白量在接种后第72h达到最高值;该重组蛋白能与抗TGEVS蛋白A位点的单克隆抗体特异性结合。用阻断ELISA检测68份来自无TGEV感染或TGEV(Purduel5)免疫的仔猪或母猪血清,结果与TGEV蚀斑减数试验完全相符,灵敏度和特异性均为100%。同时检测来自TGEV试验免疫猪、美国部分地区猪群、我国进口猪以及我国国内猪群血清627份,阳性检出率分别为82.61%、61.62%、58.33%和29.10%;用中和试验(微量中和试验或病毒蚀斑减数试验)检测的TGE血清抗体阳性率分别为80.87%、59.60%、56.11%和30.60%,两种方法对抗TGEV抗体的检出率没有显著差异。 相似文献
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用口蹄疫病毒(FMDV)A型12S基础免疫,O型12S加强免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛迭,得到了一组群特异性单抗。用RPHI,AGD,ELISA及阻断式和竞争式ELISA分析这组单抗得出以下结论:12S抗原至少存在一个12S独有的型间交叉的群特异性抗原表位,该表位是非中和性抗原表位,免疫原性较低;这组群特异性单抗可与FMDVO,A,C,Asia-1型12S发生不同程度的反应,表明该表位存在于FMDVO,A,C,Asia-1型12S上,但不同血清型的12S表位构成存在细微的差别 相似文献
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对20日龄仔猪用猪瘟弱毒疫苗免疫,同时分别颈部皮下注射亚硒酸钠(Na_2SeO_3)3mg或6mg,并设免疫不注射Na_2SeO_3的对照组。分别在试验前和25,32,39,46和53日龄采血,检测全血Se、血液学指标、淋巴细胞转化率、α-醋酸萘酯酶(ANAE)活性、免疫球蛋白水平和猪瘟抗体水平。结果表明,注射Na_2SeO_3可有效的提高仔猪哺乳期内的血Se水平,且补Se量越大,血Se水平越高;Se对仔猪红细胞、血红蛋白含量及红细胞压积没有影响;Se对ANAE ̄+细胞含量影响不大;补Se虽然没有改变20日龄前后血清IgG水平下降的趋势,但试验IgG含量明显高于对照组;补Se可显著提高猪瘟抗体水平,因此进行猪瘟疫苗免疫的同时补Se,可有效提高猪瘟疫苗的免疫效果。 相似文献
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用醋酸缓冲液和40%饱和硫酸铵连续沉淀法从绵羊棘球蚴囊液(SHCF)中得到部分纯化抗原(SPPCF),并从中分离了抗原A和抗原B,分别用单克隆抗体反向间接血凝试验(M-RPHA)、单克隆抗体双扩散试验(M-DD)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行了鉴别,表明自制的三株单克隆抗体(McAb)均识别SHCF、SPPCF及抗原B,而不识别抗原A;用ELISA对阳、阴性血清检测,SPPCF、抗原A和抗原B的阳性检出率分别为83.33%、83.33%和75%,阴性符合率分别为72.22%、86.11%和75%,表明抗原A的敏感性和特异性均优于SPPCF和抗原B。 相似文献