液相色谱-串联质谱法检测生物样品中百草枯及其代谢物

目的建立生物样品中百草枯(paraquat,PQ)及其2种主要代谢物monoquat,paraquatmonopyridone(MP)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,应用于百草枯中毒案件的法医学鉴定。方法生物样品经乙腈或甲醇沉淀蛋白,使用Agilent HILIC Plus(4.6×100mm,3.5μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液～0.1%甲酸乙腈溶液(v/v)为流动相进行洗脱,在多反应监测模式下检测。结果百草枯及其代谢物在1～1000ng/mL内线性关系良好,相关系数(r)≥0.9996,最低检出限为0.34～6.00ng/mL,检测准确度为91.25%～113.44%,日内及日间精密度分别为1.51%～3.99%和1.92%～4.93%。结论本文建立的LC-MS/MS法具有灵敏度高、特异性好的特点,可应用于百草枯中毒相关案件的法医学鉴定。     

HS-SPME-GC/MS联用法测定生物检材中的百草枯

目的建立检测生物检材中百草枯的顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用（HS-SPME-GC/MS）的分析方法。方法尿样中加乙基百草枯作为内标,在氯化镍作催化剂的条件下,用硼氢化钠在碱性条件下进行还原,HS-SPME萃取,提取物经GC/MS分析。全血需先离心,沉淀血细胞提取上清液,再用甲醇沉淀蛋白。最终得到的上清液加内标乙基百草枯,以下操作同尿样。结果尿样和血样中的百草枯的还原产物在1.0μg/mL~100μg/mL范围内线性关系良好,回归方程分别为y=0.0957x-0.0163,r=0.9974（n=6）;y=0.1096x＋0.0871,r=0.9964（n=6）。尿样、血样低、中、高三个质量浓度,RSD值均小于7%。回收率分别为尿样85.49%~100.83%,血样94.72%~99.68%。结论本法操作简便易行、灵敏度高、快速准确。为检测生物检材中的百草枯提供了有效的方法。     

GC-MS/MS法检测生物样品中硫丹含量

目的建立生物样品中硫丹(α硫丹和β硫丹)的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法,观察硫丹在水生动物体内的分布,为相关案件的法医学鉴定提供实验依据。方法血液和肌肉样品采用乙腈沉淀蛋白,GC-MS/MS法检测,多反应监测模式扫描,以保留时间和离子比例定性,外标工作曲线法定量。结果血液样品中α硫丹和β硫丹在0.062 5~10μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,检出限分别为1 ng/mL和2 ng/mL,定量限分别为4 ng/mL和8 ng/mL。肌肉样品中α硫丹和β硫丹在0.062 5~10μg/g范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.98,检出限分别为1 ng/g和4 ng/g,定量限分别为4 ng/g和16 ng/g。血液和肌肉样品中α硫丹和β硫丹的准确度为90.76%~108.91%,日内精密度(RSD)为2.35%~8.71%,日间精密度(RSD)为5.44%~10.29%。中毒案件中,在鱼和螃蟹体内各部位均检出硫丹,且不同部位间含量差异均具有统计学意义。结论本研究建立的硫丹GC-MS/MS检测方法快捷、准确、灵敏,适用于微量生物检材中硫丹的检测。硫丹在鱼和螃蟹体内分布不均匀,为硫丹相关法医学鉴定案件中毒物分析检材的采集和分析提供了依据。     

高效液相色谱法测定生物体液中百草枯

目的建立HPLC检测生物体液中百草枯方法。方法弱阳离子交换固相萃取小柱提取,水溶性正相液相色谱分析,结合保留时间和紫外光谱对样品中百草枯进行定性。结果经该方法测得百草枯的最小检出限为10ng/m l血(S/N≥3),线性范围为0.1~10μg/ml。结论该方法快速、灵敏、准确,能有效祛除复杂生物基质中杂质干扰,使待测组分获得满意的峰形,适用于生物检材中百草枯的分析。     

固相萃取-GC/MS法检测生物检材中的百草枯

目的采用固相萃取-气相色谱/质谱分析方法检测血液、尿液和脏器组织中的百草枯。方法人血液、尿液和猪肺组织样品经三氯乙酸去除蛋白后,取上清用十二烷基三甲基溴化铵和十二烷基硫酸钠处理过的C18小柱提取,提取物用硼氢化钠在碱性条件下还原,产物用气相色谱/质谱法分析,外标法定量。结果生物检材中百草枯回收率为78%～87%,最低检出限为0.1μg/mL,在0.5～1mg/mL范围内线性关系良好,可对实际案例检材进行定量检测。结论本文固相萃取-气相色谱/质谱分析方法能满足中毒生物检材检验及临床毒物检验需要。     

硼氢化钠氯化镍还原-GC／TSD法检测血液和尿液中百草枯

目的 建立血液和尿液中百草枯的还原反应-GC/TSD分析方法.方法 生物样品经氯化钠盐酸溶液与氯仿-乙醇混合溶液去除蛋白后,上清液中目标物用硼氢化钠/氯化镍还原.乙酸乙酯提取.GC/TSD-热离子检测器分析.乙基百草枯为内标.结果 血液和尿液中百草枯检测限(S/N=3)分别为0.002和0.004μg/mL;线性范围0.050-30.0μg/mL,相关系数r分别为0.999和0.998,方法回收率均大于80%.结论 本方法准确、灵敏,重现性好,适用于体液中百草枯的检测.     

生物样品中去痛片4种成分及其8种代谢物的GC-MS/MS法检测

目的建立固相支撑液液萃取(supported liquid-liquid extraction,SLE),GC-MS/MS法同时测定生物样品中去痛片4种成分及其8种代谢物的方法,为去痛片相关案件的法医学鉴定提供依据。方法采用SLE萃取,GC-MS/MS检测,MRM记录方式,利用保留时间和离子对比例定性,内标法和工作曲线法定量,建立血液和组织中去痛片及其代谢物的GC-MS/MS检测方法。结果经SLE萃取,GC-MS/MS法同时检测大鼠血和组织中去痛片及其代谢物,萃取率为37.57%~95.87%,检测线性范围为0.12μg/m L~16.00μg/m L,相关系数(r)为0.989 6~0.999 7,LOD为0.23ng/m L~14.48ng/m L,检测准确度为79.63%~122.90%,日内和日间精密度分别为0.99%~7.43%和2.19%~10.6%。结论 SLE萃取、GC-MS/MS法可检测生物样品中去痛片成分及其代谢物,具有快速、简便、准确度和精密度高的特点,可应用于去痛片相关案件的法医学鉴定。     

超高效液相色谱-质谱联用法测定生物检材中乌头碱

目的建立一种简单、快速测定生物检材(血液、尿液、胃内容物)乌头碱的超高效液相色谱-质谱联用法。方法样品采用乙腈沉淀处理。色谱柱为UPLC C18(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.4m L/min,柱温40℃。采用ESI离子源,MRM模式检测。结果乌头碱在血液0.5~500ng/m L,尿液1~1000ng/m L浓度范围内线性良好(r>0.995)。乌头碱方法回收率在91.3%~110.2%之间;提取回收率在72.8%~83.5%之间;日内、日间RSD均小于14%。结论本方法简单、快速检测生物检材中乌头碱。     

液相色谱-串联质谱法测定血液和尿液中秋水仙碱

目的建立检测血液和尿液中秋水仙碱的液相色谱-串联质谱法。方法0.5mL血液或尿液以丁丙诺啡为内标,经pH9.2硼酸盐缓冲溶液碱化后,用乙酸乙酯进行提取,在ZORBAX SB-C18液相柱(150mm×2.1mm×5μm)上以V(甲醇)∶V(20mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸缓冲溶液)=80∶20为流动相,流速为0.2mL/min,采用电喷雾正离子模式离子化、多反应监测模式检测秋水仙碱,内标法定量。结果血液、尿液中秋水仙碱与内标丁丙诺啡色谱分离良好,秋水仙碱在0.1~50 ng/mL内均具有良好的线性,相关系数>0.9990,最低检出限为0.05ng/mL,方法回收率为94%~116%,日内与日间精密度(RSD)均小于8.5%。结论所建LC-MS-MS方法灵敏度高、操作简便、快速、准确,适用于血液及尿液等生物检材中痕量秋水仙碱成分的检测。     

百草枯类似物的合成及其还原产物GC/MS确认

目的为实现百草枯在GC/MS或GC上精准定量,必须加入百草枯类似物作为内标。方法用联吡啶和碘代乙烷(碘代异丙烷)反应,自主合成了乙基百草枯和异丙基百草枯,并考察了百草枯类似物用硼氢化钠还原后的多种产物。结果确证了百草枯类似物的各种还原产物。主产物除了完全还原产物之外,也包括含有一个双键的还原产物。本文介绍了自主合成乙基百草枯和异丙基百草枯的方法,考察了它们作为百草枯内标的可能性。结论乙基百草枯和异丙基百草枯作为内标物为生物样品中百草枯定量奠定了基础。     

Homicidal Paraquat Poisoning

Paraquat poisoning usually results from suicide, occupational, or accidental exposure. Herein, we report a rare fatal case of homicidal paraquat poisoning. A 58‐year‐old man was poisoned by taking paraquat‐mixed medicine and wearing paraquat‐soaked underwear. In the absence of a history of paraquat exposure, the patient was misdiagnosed with pulmonary infection and scrotal dermatitis and died of respiratory failure 24 days after the initial exposure to paraquat. Ultra‐performance liquid chromatography‐tandem mass spectrometry (UPLC‐MS/MS) was applied to detect and quantify paraquat in postmortem specimens. The concentration of paraquat in postmortem specimens from high to low is lung (0.49 μg/g), brain (0.32 μg/g), kidney (0.24 μg/g), liver (0.20 μg/g), cardiac blood (0.11 μg/mL), and stomach wall (<LOQ). Identification of homicidal paraquat poisoning is not easy for a clinician or a forensic pathologist, it is important to consider the possibility of paraquat poisoning when patients suffer from rapidly aggravating pneumonia of unknown origin.     

百草枯中毒分析检测方法的研究进展

本文介绍了最近20年来国内外有关生物检材中百草枯的提取、净化及定性定量分析检测方法的研究进展,从而为进一步研究百草枯中毒的分析检验方法提供参考。     

HPLC法测定百草枯急性中毒大鼠的体内分布

目的 应用高效液相色谱法对口服百草枯急性中毒大鼠体内分布进行测定。方法以200mg／kg剂量百草枯给予Wister大鼠灌胃,4h后脱臼处死,解剖取脑、心、肝、脾、肺、肾、胃、盲肠、肌肉等组织,应用固相萃取法提取,液相色谱法测定各器官组织中百草枯含量。结果各组织经检验,均检出百草枯;组织间百草枯含量（μg／g）相差明显,其中最高为胃（231．47±129．10）,其次为盲肠（87．08±39．86）、肺（22．73±10．20）,最低为心（2．01±0．36）。结论百草枯口服给药后组织分布较为广泛,除胃、肠外各脏器中以肺浓度最高。     

大鼠百草枯中毒后体内的分布研究

目的建立生物检材中百草枯的超高效液相色谱-质谱联用检测方法,研究百草枯灌胃染毒致死的大鼠动物模型。方法大鼠以1/2 LD_(50)剂量灌胃染毒,分别于染毒后0.5h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h处死解剖,采集心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、膀胱和胃组织,UPLC-MS/MS法定量检测各组织中百草枯。结果试验中大鼠灌胃后,4h以内胃是主要分布器官,胃中含量最多,其他器官中含量相对较低。4h内除胃以外的脏器含量变化不大,4h后胃内百草枯含量有所下降,除胃以外的脏器含量均升高。各组织与脑组织比较具有显著性差异(P0.05)。结论百草枯在大鼠体内死后分布不均匀并且各组织含量随着时间变化有所改变。百草枯UPLC-MS/MS方法、口服染毒致死的动物模型、各组织分布规律可为甲百草枯中毒死亡案件提供检测依据。     

Blowfly Larval Tissues as a Secondary Detector for Determining Paraquat-Related Death in Rabbit Carcass

Paraquat poisoning is commonly associated with suicide or homicide in Malaysia. In a case involving advanced body decomposition, pathological analysis regarding the cause of death may become difficult or almost impossible. Insects serve as common alternative matrix for poison detection in forensic analysis. Paraquat detection via secondary bioaccumulation in fly larvae tissue has never been reported. In this study, tissues from blowfly larvae collected from a rabbit carcass with paraquat poisoning were analyzed for secondary bioaccumulation. Larvae samples were collected and analyzed using liquid–liquid extraction. The detection was performed via reduction of quaternary ammonium presence in paraquat and analyzed using gas chromatography–mass spectrometry (GC-MS) with selected ion monitoring mode (SIM mode). GC-MS showed the elution of reduced paraquat was at retention time 12.8 min. Blowfly larvae tissue has proven useful as a secondary detector in paraquat-related deaths.     

Determination of Herbicides Paraquat,Glyphosate, and Aminomethylphosphonic Acid in Marijuana Samples by Capillary Electrophoresis

In this work, two methods were developed to determine herbicides paraquat, glyphosate, and aminomethylphosphonic acid (AMPA) in marijuana samples by capillary electrophoresis. For paraquat analysis, sample was extracted with aqueous acetic acid solution and analyzed by capillary zone electrophoresis with direct UV detection. The running electrolyte was 50 mmol/L phosphate buffer (pH 2.50). For glyphosate and AMPA, indirect UV/VIS detection was used, as these substances do not present chromophoric groups. Samples were extracted with 5 mmol/L hydrochloric acid. The running electrolyte was 10 mmol/L gallic acid, 6 mmol/L TRIS, and 0.1 mmol/L CTAB (pH = 4.7). The methods presented good linearity, precision, accuracy, and recovery. Paraquat was detected in 12 samples (n = 130), ranging from 0.01 to 25.1 mg/g. Three samples were positive for glyphosate (0.15–0.75 mg/g), and one sample presented AMPA as well. Experimental studies are suggested to evaluate the risks of these concentrations to marijuana user.     

气相色谱-串联质谱法分析尿和血中除草剂百草枯

目的建立尿和血中百草枯的离子交换固相萃取-气相色谱-串联质谱分析方法。方法尿样加内标乙基百草枯,用732阳离子交换树脂提取;血样加内标乙基百草枯,用三氯乙酸凝聚蛋白质后取上清液用732阳离子交换树脂提取。提取物用硼氢化钠在水溶液中碱性条件下还原,还原物用有机溶剂提取进行气相色谱-串联质谱法分析。结果尿和血中百草枯的提取率分别为76％和74％,检测限分别为2ng／mL和10ng／mL,尿添加百草枯100ng／mL和血添加百草枯500ng／mL水平的回收率分别为99．6±5．6％和99．3±7．6％（Mean±CV）。结论本文建立的分析方法灵敏度高,能够满足中毒致死案件检验及临床毒物检验的需要。