基于microRNA表达谱初步构建PLS-DA体液识别模型

针对外周血、唾液、精液、月经血、阴道分泌物这五种法医学常见的体液样本，采用二代测序（NGS）平台检测获得microRNA(miRNA)表达谱，使用偏最小二乘判别分析（PLS-DA）建立基于这五种体液的识别模型，并探讨PLS-DA在法医体液溯源中的应用价值。经优化小分子RNA文库制备过程，采用Ion Torrent S5 XL测序系统对前述法医学五种体液样本（每种10例）进行小RNA测序，以PLS-DA构建体液识别模型，评估不同数量miRNA标记组合下预测的准确性。本研究获得法医学常见五种体液样本的miRNA表达谱，外周血与月经血中表达量前10名的miRNAs有6个重叠；唾液和阴道分泌物中表达量前10名的miRNAs有4个重叠。基于全数据集、107个和11个miRNAs构建的体液来源识别模型的准确率分别为0.95、0.94、0.89。本研究通过NGS测序分析获得了五种体液样本的miRNA组（miRNome），利用PLS-DA初步构建了体液识别模型，对于应用miRNome进行体液识别的相关研究具有参考价值。     

体液法医学鉴定miRNA检测方法的建立与应用

目的建立针对体液特异性miRNA的SYBR Green检测方法,用于体液鉴定,探究法医实践中体液鉴定新方法。方法根据文献选出6条miRNAs为靶点,以合成的标准miRNA作为模板进行体系构建,再对实际样本进行验证,检测6条miRNAs在外周血、月经血、唾液、精液中的相对表达量。结果 miRNAs205在不同体液间表达差异不明显;miRNAs451、miRNAs144可明显的区分血与非血;miRNAs214可鉴定月经血;miRNAs888、miRNAs891在精液中高表达。结论建立的针对miRNAs的SYBR Green检测方法合理有效,可用于法医实践中体液鉴定。     

利用朴素贝叶斯和多元logistic回归构建月经血mRNA标志分析模型

目的 利用月经血特异性mRNA标志检测技术结合统计学方法,建立基于朴素贝叶斯和多元logistic回归方法的月经血鉴定模型,以定量区分月经血与其他体液。方法 采集86份月经血、48份外周血、48份阴道分泌物、24份精液和24份唾液样本,经试剂盒提取样本RNA、反转录后得到cDNA,对5种月经血特异性标志,包括基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMP）家族的成员MMP3、MMP7、MMP11,孕激素相关子宫内膜蛋白（progestogensassociatedendometrialprotein,PAEP）和斯钙素-1(stanniocalcin-1,STC1)进行扩增和电泳检测分析。采用朴素贝叶斯和多元logistic回归对检测结果进行分析。结果 朴素贝叶斯和多元logistic回归法构建的分类模型对月经血归类的准确率达88.37%和91.86%。在非月经血体液中,对外周血、唾液和精液的区分准确率普遍高于90%,分辨阴道分泌物时准确率较低,分别为16.67%和33.33%。结论mRNA检测技术结合统计学方法可对月经血建立分类判别模型,可用于区分月经血和其他...     

MMP-11多克隆抗体的制备及其法医学意义

目的制备兔抗人基质金属蛋白酶-11(MMP-11)多克隆抗体,建立用MMP-11抗体检测月经血的可行方法,探讨其法医学意义。方法将用基因工程制备的人MMP-11融合蛋白免疫新西兰白兔,饱和硫酸铵法进行抗体纯化。运用蛋白印迹法检测月经血痕、外周血痕、阴道液斑、精液斑、唾液斑和尿液斑,盲测验证该方法的可靠性。结果高效价的兔抗人MMP-11多克隆抗体检测月经血MMP-11蛋白的阳性率为90.48%(93/105),而外周血痕、精液斑、唾液斑、尿液斑和阴道液斑均未检出MMP-11。结论用自制的抗MMP-11多克隆抗体所建立的蛋白印迹法检测月经血中的MMP-11特异性好,灵敏有效,可用于月经血及外周血的鉴别。     

mRNA在体液斑迹鉴定与组织来源推断中的应用

体液斑迹鉴定及其组织来源推断一直是法医学研究的重要方向之一,其传统的检验方法存在诸如假阳性率高、检材易破坏等缺陷,亟需更高效的确证实验。高度分化的体细胞表达特异的m RNA分子,可推断其来源:外周血、月经血、精液、唾液、阴道分泌物、接触斑等,且灵敏度、特异度及保存时间相对较为理想,是未来用于体液斑迹鉴别的理想遗传标记。本文对m RNA在体液斑迹鉴定和组织来源推断方面的应用及其前景进行综述。     

人类岩藻糖基转移酶5特异性分布及其在精细胞的表达与定位

目的研究人类岩藻糖基转移酶5(fucosyltransferase 5,FUT5)的特异性分布及在精细胞的表达与定位。方法收集健康志愿者的精液(分离精细胞并提取精细胞膜蛋白)、阴道拭子、唾液及静脉血,应用免疫印迹方法检测FUT5在人类精细胞膜、精浆、阴道液、唾液及血清中的表达量,采用免疫荧光技术检测FUT5在精细胞中的表达与定位。结果免疫印迹方法结果显示FUT5在精细胞膜及血清中有较高表达,但在精浆、阴道液及唾液中未被检测到。免疫荧光实验结果显示FUT5主要存在于精细胞头部。表明人类精细胞膜存在一定表达量的特异性FUT5,可采用抗原-抗体反应分离精液和阴道液混合斑中的精细胞。结论人类FUT5表现出分布特异性,可应用到法医学性犯罪案件中混合斑的鉴定。     

基于miRNA相对表达量自动判别月经血和外周血

目的探索有效区分月经血和外周血的miRNA最优标记组合及最佳分类模型,并构建简便快速的自动化判别软件。方法对10种miRNA(miR-451a、miR-205-5p、miR-203a-3p、miR-214-3p、miR-144-3p、miR144-5p、miR-654-5p、miR-888-5p、miR-891a-5p、miR-124-3p)在200余份月经血和外周血样本中的相对表达量以实时荧光定量PCR检测,并以7种算法模型(核密度估计、K-最近邻、逻辑回归、线性判别分析、支持向量机、神经网络、随机森林)进行数据分析,选出鉴别效果最好的标记组合及算法模型,进而构建自动判别软件。结果月经血和外周血中差别最大的三种miRNA为miR-205-5p、miR-203a-3p和miR-214-3p,使用miR144-5p与上述miRNA中的一种或两种组合可达较好区分效果,其中基于miR-144-5p、miR-203a-3p和miR205-5p所形成的“最优特征项组合一”稳健性最强。7种算法模型中最佳分类模型为核密度估计模型,其次为逻辑回归模型。结论本研究建立的自动判别软件界面友好、使用简单,适合辅助法医检验关于月经血和/或外周血判别分析的计算,便利于法医物证工作,有较大的推广应用价值。     

microRNA的检测技术及其法医学应用前景

microRNA（miRNA）是一类由18～25个核苷酸构成的非编码小分子RNA，在转录后水平调控基因的表达。miRNA的表达具有高度保守性、时序性和组织特异性。随着其检测技术的逐渐成熟，miRNA被引入到法医学的研究中。新近研究表明，miRNA在法医学体液鉴定、种属鉴定和PMI推断等方面有一定的应用前景。本文简述miRNA检测技术的发展，并对其在法医学中的应用及前景进行综述，以期为相关研究及实践提供参考。     

应用高通量测序DNA甲基化差异体液识别研究

目的通过检测和分析DNA甲基化差异的方法识别三种法庭科学犯罪现场常见体液(唾液斑、精液斑、血液斑)细胞来源。方法利用亚硫酸氢盐法对唾液斑、精液斑、血液斑的DNA样品进行甲基化处理,对由文献[1]和实验过程中筛选得到的甲基化位点进行illumina高通量测序,检测三种体液斑中细胞DNA的甲基化程度,并通过BP神经网络分析每一个位点的甲基化程度与细胞来源的关系及全部检测位点的甲基化程度联合与细胞来源的关系。结果运用BP神经网络对35份样品的73个位点的甲基化程度进行训练和预测,可以将唾液、精液、血液三种来源的DNA样本分开,其准确率达到77.3%。其中精细胞在L81528位点中表现为高甲基化,唾液和血液表现为低甲基化,可将精细胞准确鉴别出来。结论本研究建立的高通量测序分析DNA甲基化差异的方法可通过增加检测位点和样品数量进一步提高识别体液细胞来源的准确率。     

从血液和体液的混合斑中提取血痕血型物质的检验

<正> 根据血液和其它体液(唾液、汗液、精液、阴道分泌物)中分别存在不同的脂溶性或水溶性血型物质.用1:2氯仿-甲醇液从血液与体液的混合斑中提取血痕的血型物质,然后进行血型检验。     

人体不同体液内PSA含量及其法医学意义

目的检测人体不同体液内前列腺特异抗原(PSA)含量,探讨其法医学价值。方法收集成年人(19～63岁)晨尿40份(男28份、女12份)、血液58份(男45份、女13份)、唾液25份(男14份、女11份);青少年(10～15岁)男性晨尿205份;哺乳期(25～31岁)女性乳汁9份;使用Cobas e411型全自动电化学发光免疫分析系统及T-PSA定量测定试剂盒,检测各样本T-PSA含量;分析不同体液及不同年龄青少年男性尿液PSA含量差异。结果除男、女性唾液外,其它样本均可检测到PSA,其中成年男性尿液含量最高,与其它体液比较具有显著性差异(P<0.000 1);青少年男性各年龄组尿液PSA含量随年龄逐年增高,11岁及以下年龄组含量不足1ng/mL,14岁及以上年龄组可超过1 000ng/mL。结论前列腺发育成熟的男性尿液PSA含量较高,在进行精液斑的法医学检验时应给予充分注意。     

强奸案件物证检材的提取和保存

正在强奸案中,由于男女双方有着直接的身体接触,因此会在双方的身体及现场上留下衣物纤维、毛发、皮肤组织、血液、唾液、精液、阴道分泌物和汗液等物,上述组织和体液等构成了强奸犯罪的重要物证,由于基层客观条件所限,必须尽可能全面地予以收集,有条件的初检,妥善保存以备送检。1规范提取物证检材纤维、毛发检材脱落的纤维、毛发常存在于床上、衣物和体表(重点是阴部),必要时可借助放大镜     

鉴别外周血与月经血的六重mRNA荧光复合检测体系构建

目的基于外周血、月经血中特异的mRNA分子标记,建立一种能有效鉴别外周血与月经血的六重mRNA荧光复合检测体系。方法通过文献及数据调研,筛选出在外周血和月经血中特异性表达的mRNA标记分子,设计并验证引物。经过总RNA提取、逆转录、多重PCR(MPCR)扩增、遗传分析仪电泳检测分析等步骤,构建一个基于毛细管电泳技术的六重mRNA荧光复合检测体系,并使用38份样本对体系进行检测验证。结果在外周血样本中检测到外周血标记(HBB、HBA)和管家基因(GAPDH、ACTB)的表达;在月经血样本中检测到所有标记(HBB、HBA、MMP7、MMP10、GAPDH、ACTB)的表达;在非血样本中只检测到管家基因(GAPDH、ACTB)的表达。结论本研究构建的六重mRNA荧光复合检测系统可以有效鉴别外周血与月经血样本。     

分子标志物microRNA在法医学中的研究进展

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长度为18～24个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,其表达具有高保守性、时序性和组织特异性。miRNA不易被RNA酶降解,对温度、酸碱度等环境因素的变化有较强的抵抗性,在腐败组织中也能检测出来。因此,miRNA在法医学体液来源鉴定、死亡原因推断等方面具有广阔的应用前景。本文就miRNA作为在体液鉴定、死亡时间推断以及死亡原因分析等法医学实践中的应用进行简要综述。     

mRNA在体液斑鉴定研究中内参基因的选择与应用

利用mRNA分析技术鉴定生物检材中各种体液斑迹的组织属性来源是近年来法医物证学的一个重要进展。终点逆转录PCR和实时荧光定量PCR技术是法医学实验室常用的mRNA检测技术,为保证实验结果的准确性,研究者通常选用组成性表达的管家基因作为内参,对不同样本提取RNA进行质控和标准化,以正确评估目标mRNA在各样本中的表达量。本文聚焦近年来使用mRNA分析技术进行体液斑迹组织属性来源鉴定的研究报道,对这些工作中内参基因的选择与应用效果进行综述。     

基于DNA甲基化的三种常见体液组织来源鉴定

目的针对唾液、精液、外周血,找到一组可用于区分不同体液的组织差异性甲基化位点,为确定案件现场提取的体液组织来源提供科学依据。方法选取常见体液样本共49份,运用Illumina 850K甲基化芯片进行全基因组甲基化检测,筛选获得17个候选CpG位点;使用焦磷酸测序对55份样本进行测序,实际共检测了候选位点及其附近的位点共34个CpG位点。选择基于赤池信息量(AIC)的逐步条件多分类逻辑回归方法进行数据分析。结果基于3个CpG位点(cg25373595、cg18121066、cg17283169)构建了多分类逻辑回归模型用于体液组织来源预测,分别位于RAP1GAP2,TBCD,CALML3基因上。该模型对精液来源预测的AUC、灵敏度和特异性均为1,对唾液和静脉血来源的预测AUC和灵敏度均为1,特异性分别为0.99和0.98。在独立的唾液、精液和静脉血3种体液共24份样本中对该预测模型进行验证,预测结果全部正确。结论本文建立的基于3个CpG位点的体液组织来源鉴定方法可以实现唾液、精液和静脉血3种体液的有效区分,在法庭科学中具有潜在的应用价值。     

法医生物检材管理存在的问题及改进办法的探讨

法医生物检材主要指与案件有关的人体血液(痕)、唾液(斑)、毛发、指甲、体液(精液、阴道斑)及各种组织及其分泌物、排泄物和某些动、植物斑迹,在实际案件工作中主要研究附着这些斑痕的载体,如:衣物、棍棒等。能使这些检材起到最大的证据作用的关键是正确的提取、科学的保存、规范的实验室操作和管理。但是国内的法医生物检材在提取、送检和保存的过程中存在许多问题,严重影响着法医物证学的发展和作为证据其法律的严肃性。笔者认为主要存在以下几方面的问题:(1)从现场提取的物证不及时预处理(如晾干等)、不及时送检,造成一些重要的生物检材…     

用人血清-唾液-初乳斑痕吸收免疫抗血清制备特异性抗人精液血清

本研究采用人血清-唾液-初乳混合液斑痕吸收抗人精液免疫血清,以消除抗血清的外器官特异性交叉反应。吸收后的抗人精液血清,仅和人精液及附睾和前列腺组织提取液发生反应,和人血清、唾液、初乳、阴道分泌液及尿液等5种人类体液分泌液及22种人体组织浸取液无交叉免疫反应;和8种动物精液也无交叉反应,具有良好的器官及种属特异性。获得的抗血清清亮透明,效价高。血清吸收方法简便易行,成本低,易于普及推广。     

抗人精单克隆抗体A_(10)C_6特异性的研究

用作者实验室生产的单克隆抗体A_(10)C_6建立了反向间接血液试验(RPHA)方法。经检测人精液标本,发现其对人精液有100％的阳性反应,而对猪精液、牛精液、人乳汁、人阴道分泌物、人唾液等均呈阴性反应,证明了它对人精液较高的特异性。RPHA方法简便、灵敏、可靠,所用检材量少,有较高的应用价值,特别适于基层应用。