绿萼梅药材超高效液相色谱指纹图谱研究

目的 采用超高效液相色谱法（ultra performance liquid chromatography，UPLC）建立绿萼梅药材的指纹图谱，为有效控制绿萼梅药材的质量奠定基础。方法 采用CORTECS C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm），以乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）溶液为流动相进行梯度洗脱，进样量为1 μL，流速为0.3 mL/min，检测波长260 nm。结果 通过相似度分析确定19个色谱峰构成绿萼梅药材指纹图谱的特征峰。结论 采用UPLC方法建立的指纹图谱具有精密度、稳定性、重复性良好的特点，可为绿萼梅化学成分的进一步提取分离和药效物质基础的研究提供科学依据。     

丹皮酚通过抑制线粒体氧化应激防止1-甲基-4-苯基吡啶离子损伤SH-SY5Y细胞

目的 探究丹皮酚（Paeonol，Pae）防止1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenyl pyridine, MPP+）损伤神经细胞的机制。方法 采用MPP+作用于人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y建立神经细胞损伤模型。采用甲基噻唑基四唑染色法检测细胞活力，采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平，采用罗丹明123染色流式细胞仪分析SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的改变，采用Western blot法分析线粒体细胞色素C的表达。结果 0.1~10 μmol/L Pae可以剂量依赖性地抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡；10 μmol/L Pae能够升高细胞线粒体膜电位，减少MPP+引起的细胞内ROS的产生，降低细胞色素C的表达。结论 Pae可防止MPP+损伤SH-SY5Y细胞，其保护作用可能与减少SH-SY5Y细胞内ROS生成，增强SH-SY5Y细胞清除自由基的能力以及提高SH-SY5Y细胞内线粒体膜电位水平有关。     

灵芝酸治疗阿尔茨海默病作用机制的网络药理学研究

目的 利用网络药理学技术确定灵芝酸治疗阿尔茨海默病（Alzheimer''s disease，AD）的相关靶点，探讨灵芝酸治疗AD的潜在机制。方法 采用Swiss Target Prediction药物靶点预测平台预测灵芝酸的靶点，并借助Disgenet数据库、Drugbank数据库和Genecards数据库检索AD的相关靶点；将化合物靶点与疾病靶点作交集得到灵芝酸作用于AD的潜在靶点。进一步使用STRING平台构建蛋白质相互作用（protein-protein interactions，PPI）网络，并通过网络拓扑分析筛选核心靶点；Bioconducter生物信息软件包对交集靶点进行GO与KEGG功能富集分析，筛选出灵芝酸与AD关联程度较高的信号通路。最后通过细胞实验，验证其中富集程度最高的靶点，进一步明确灵芝酸作用于AD的核心靶点。结果 从数据库中共获得灵芝酸与AD靶点1 211个，其中共同靶点56个。PPI网络拓扑分析发现，AKT1、ALB、MAPK3、CASP3、TNF等是灵芝酸治疗AD的关键靶点。KEGG通路富集分析结果显示，灵芝酸治疗AD的通路涉及AD、神经变性途径、人巨噬细胞感染途径、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒感染途径等。细胞实验验证发现，灵芝酸A的最佳给药浓度为50 μmol/L，可以通过抑制p-PI3K和p-AKT的表达，保护受Aβ25-35毒性损伤的PC12细胞。结论 灵芝酸可能通过关键蛋白和重要通路达到靶向治疗AD的作用。     

补阳还五汤黄酮类有效成分在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对CYP450酶活性的影响

目的 研究补阳还五汤3个黄酮类有效成分（羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮、芒柄花素）在Caco-2细胞单层模型中的转运特征及其在大鼠肝微粒体中对CYP450酶亚型活性的影响。方法 MTT法研究药物在Caco-2细胞单层模型的安全浓度范围，以Caco-2细胞单层模型研究黄酮类有效成分的双向转运机制，以表观渗透系数（Papp）为检测指标，考察时间、浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对转运的影响，利用Cocktail探针法研究药物对CYP450亚型的体外抑制作用。结果 从顶侧（apical, AP）到底外侧（basolateral, BL）（AP→BL），芒柄花素、毛蕊异黄酮的Papp>10-6 cm/s，表明其吸收性良好，羟基红花黄色素A的Papp为10-6 cm/s，表明其吸收性一般；且三者的转运量随浓度升高和时间延长而显著升高，BL→AP的转运量与AP→BL的转运量的比值小于1.5，其中芒柄花素、毛蕊异黄酮的转运都受到P-gp外排蛋白的外排作用；补阳还五汤黄酮类有效成分明显降低了CYP2E1、CYP1A2酶探针底物的代谢量(P<0.05)。结论 3种黄酮类有效成分在Caco-2细胞模型的转运方式均为被动转运，毛蕊异黄酮与芒柄花素明显受到P-gp的外排作用，补阳还五汤黄酮类有效成分可以增加主要通过CYP2E1、CYP1A2酶代谢的药物浓度。     

构树皮总黄酮提取及抗菌活性研究

目的 提取构树皮有效的抑菌活性部位。方法 采用正交试验法优化构树皮黄酮最佳超声提取工艺,并采用AB-8大孔吸附树脂富集构树皮总黄酮提取物活性部位,用平皿药基法比较不同部位的抑菌效果。结果 构树皮总黄酮的最佳提取工艺为：以10倍体积的70%乙醇为溶剂,超声提取20 min,功率300 W。经AB-8大孔吸附树脂富集分离后,70%乙醇洗脱部位对浅部真菌红色毛癣菌和白色念珠菌均有良好的抑制作用。结论 所采用的工艺操作简单、耗能低、总黄酮提取率高,抑菌作用强。     

大豆异黄酮改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的机制

目的 探讨大豆异黄酮(soybean isoflavones，SIF）改善阿尔茨海默病（Alzheimer''s disease，AD）大鼠学习记忆能力的机制。方法 将70只大鼠随机分为正常对照组，假手术组，模型组，雌激素组和高、中、低剂量SIF治疗组，采用右侧杏仁核注射β-淀粉样肽（β-amyloid peptide，Aβ）25-35复制AD大鼠模型，给予不同剂量的SIF，通过检测逃避潜伏期、游泳时间百分比和2 min内穿过平台次数评价大鼠学习记忆能力，观察并比较各组大鼠海马胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）活性和半胱天冬氨酸特异性蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific protease-3，caspase-3）的活性。结果 与模型组比较，高、中、低剂量SIF组逃避潜伏期显著降低(P<0.01），游泳时间百分比和穿过平台次数显著增加（P<0.01），高、中剂量SIF组大鼠海马ChAT活性显著升高(P<0.01），各剂量SIF组AD大鼠海马caspase-3活性显著降低（P<0.01）。高、低剂量SIF组逃避潜伏期、2 min内穿过平台次数、ChAT活性和caspase-3活性比较，差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 大豆异黄酮通过调节AD大鼠海马ChAT和caspase-3活性，改善其学习记忆能力，并呈现一定的量效关系。     

大孔树脂纯化马兰总三萜工艺研究

目的 研究大孔树脂纯化马兰总三萜的工艺。方法 以齐墩果酸为对照品,以吸附量和解吸率作为效果评定指标,筛选出对马兰中总三萜纯化效果最好的大孔树脂,并对上样量、上样液浓度、洗脱速率、洗脱乙醇浓度及用量参数进行考察,筛选出最佳工艺条件。结果 HPD-500的吸附量为0.495 5 mg/mL,解吸率为30.47%,效果最佳;最佳上样液浓度：0.02 g/mL;流速：2 mL/min;洗脱剂：70%乙醇;洗脱体积：2倍柱体积。纯化后马兰三萜含量可达到17.81%。结论 HPD-500大孔树脂在所得工艺条件下可以对马兰中总三萜进行较好的纯化。     

茯苓皮总三萜大孔树脂纯化工艺及体外抗炎活性研究

目的 为提高茯苓皮的综合利用价值,建立一种简便的茯苓皮总三萜纯化方法,并通过体外实验验证其抗炎作用。方法 采用HPD-100型大孔树脂吸附法纯化茯苓皮总三萜。基于单因素实验,以总三萜含量为指标,经正交试验优化茯苓皮总三萜纯化工艺。建立脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症模型,考察茯苓皮总三萜对细胞活力的影响,检测给药后RAW 264.7细胞内一氧化氮（nitric oxide,NO）释放量和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平。结果 纯化后样品总三萜含量增加至70.36%,明显高于粗提总三萜含量（29.76%）,纯化工艺为上柱HPD-100型树脂20 g,上样浓度15 mg/mL,35%乙醇洗脱杂质容积为5倍床体积(bed volume,BV),95%乙醇洗脱三萜容积为4 BV,经实验验证该纯化工艺重复性良好。体外实验结果表明：茯苓皮总三萜在50~250 μg/mL范围内对细胞活力无明显影响;与模型组比较,给药后RAW 264.7细胞内NO释放量和TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显降低（P＜0.05）。结论 HPD-100型大孔树脂吸附法纯化工艺能明显提高样品总三萜含量,茯苓皮总三萜具有减轻炎症的作用。     

白毛夏枯草镇咳祛痰有效部位的初步筛选

目的 初步筛选中药白毛夏枯草镇咳、祛痰作用的化学部位.方法 分别用浓度为95%的乙醇和50%的乙醇回流提取白毛夏枯草,合并提取液,浓缩至浸膏,依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得到3个部位;采用浓氨水引咳法观察小鼠咳嗽次数、引咳潜伏期;气管酚红法观察小鼠气管段酚红排出比较白毛夏枯草3个部位的药理活性.结果 乙酸乙酯提取物具有明显的镇咳作用,并使小鼠酚红排出量明显增加.结论 白毛夏枯草中起镇咳、祛痰作用的有效部位集中在乙酸乙酯提取物部位.     

基于网络药理学和分子对接技术探究小柴胡汤治疗三阴性乳腺癌的作用机制

目的 通过生物信息学分析和整合药物代谢动力学数据进行多重药物靶点预测，探究小柴胡汤治疗三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）的作用机制。方法 基于药理学数据库获取小柴胡汤的活性成分与对应靶点；采用加权基因共表达网络分析方法识别乳腺癌高通量测序数据中肿瘤发生发展的关键基因；采用GO功能与KEGG通路富集分析进行生物功能与通路注释；通过Cytoscape软件进行核心基因鉴定；利用分子对接方法模拟关键生物标志物与小柴胡汤核心活性成分的对接模式。结果 在对小柴胡汤进行数据挖掘后获得242个有效成分和265个对应靶点，通过加权分析方法得到乳腺癌密切相关的563个疾病关键靶点，小柴胡汤与TNBC共有13个交集靶点。小柴胡汤成分靶点网络构建得到槲皮素、山柰酚、异鼠李亭素、木犀草素、豆甾醇、β-豆甾醇、牵牛花色素等主要成分。PPI网络构建后通过筛选得到3个核心靶点（CCNA2、CCNB1、CHEK1）与2个关键化学成分（槲皮素、山柰酚）。GO富集获得15个生物过程、45个细胞组分、16个分子功能，其中主要与细胞器裂变和细胞核分裂等细胞增殖过程，浓缩染色体和中心区核染色体，单链DNA结合ATP依赖活性等相关。KEGG通路富集得到了37条通路，主要富集在精氨酸等代谢通路上。分子对接模拟显示核心蛋白靶点与重要活性成分具有良好的结合活性。结论 小柴胡汤主要通过CCNA2、CCNB1、CHEK1等靶点，槲皮素、山柰酚等主要活性成分及细胞调亡、成纤维细胞形成和肿瘤细胞增殖及炎症进程达到干预TNBC的作用。     

不同炮制方法对附子生物碱类成分的影响

目的 采用高效液相色谱法分析附子不同炮制品中6个生物碱的含量，研究炮制方法对附子中生物碱类成分的影响。方法 采用Waters sunfire C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），流速0.8 ml/min，柱温30 ℃，检测波长235 nm，流动相乙腈-四氢呋喃(25∶15)和0.1 mol/L醋酸铵溶液(每1 000 ml加冰醋酸0.5 ml)，梯度洗脱。结果 各成分分离度良好。在相应浓度范围内6个生物碱的线性关系良好（r＞0.999 1）；精密度相对标准偏差＜0.44％；加样回收率为95.1％～105.0％。结论 该方法快速、准确，适用于附子不同炮制品6种生物碱成分的定量分析。药典法和蒸制法、炒制法都能有效地降低毒性较大的双酯型生物碱类含量，而蒸制法和炒制法又能增加毒性小、疗效高的单酯型生物碱类含量，达到炮制减毒增效的目的。     

沙苑子化学成分研究

目的 研究沙苑子总黄酮提取部位的化学成分。方法 采用色谱方法分离化学成分，根据波谱数据及理化常数进行结构鉴定。结果 共分离鉴定了11个化合物，分别是大麻苷（Ⅰ）、杨梅素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅱ）、异槲皮苷（Ⅲ）、槲皮素3-O-α-L-阿拉伯糖苷（Ⅳ）、毛蕊异黄酮7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（Ⅴ）、芒柄花苷（Ⅵ）、西伯利亚落叶松黄酮3-O-β-吡喃葡萄糖苷（Ⅶ）、山奈酚3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅷ）、毛蕊异黄酮（Ⅸ）、沙苑子苷A（Ⅹ）、鼠李柠檬素3-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅺ）。结论 西伯利亚落叶松黄酮3-O-β-吡喃葡萄糖苷为首次从该植物中分离的成分。     

桃红四物汤中5种主要成分在脑缺血再灌注模型大鼠体内组织分布的研究

目的 研究脑缺血再灌注模型大鼠在灌胃桃红四物汤 （Taohong Siwu Decoction，THSWD）后，5种主要活性成分（藁本内酯、苦杏仁苷、芍药苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸）在体内组织分布的差异和规律。方法 采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，然后再灌注24 h建立脑缺血再灌注大鼠模型；将模型复制成功的大鼠灌胃THSWD（50 g/kg）后，于不同时间点采集组织（心、肝、脾、肺、肾、脑），样品处理后采用UPLC-MS技术检测各组织中待测成分的含量。结果 各成分在模型大鼠各组织中分布广泛，在肝、肾组织中浓度较高，其中藁本内酯在脑组织中有较高浓度；苦杏仁苷在肺部具有组织分布特异性；芍药苷、羟基红花黄色素A在大鼠肝、脾、肺组织具有较高分布比例，阿魏酸在脑组织中未检出。结论 THSWD中5种主要活性成分在各组织中分布广泛，各组织不同时间点的分布趋势也存在较大差异。     

川芎嗪通过AMPK-NF κB信号通路抑制BV-2小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达

目的 观察川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对Aβ25-35诱导的BV-2小鼠小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达及对一磷酸腺苷激活的蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK）-核因子κB（nuclear factor kappa B, NF κB）信号通路的影响。方法 采用Aβ25-35激活BV-2细胞的炎性反应,测定TMP高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10 μmol/L)对Aβ25-35诱导的BV-2细胞白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α,TNF-α）及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）mRNA表达水平的影响。在AMPK激活剂（AICAR）及抑制剂（化合物C）存在下,检测TMP对AMPK及p65（NF κB亚基）磷酸化的影响。结果 TMP高、中剂量可明显抑制BV-2细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS基因mRNA表达水平 （P＜0.01）,高剂量TMP可激活BV-2细胞中AMPK（P＜0.01）, 并抑制p65磷酸化 （P＜0.01）。结论 TMP通过激活BV-2细胞中AMPK活性,抑制NF κB活化,进而抑制促炎性细胞因子基因的表达。     

密蒙花中4种成分的含量测定及其主成分、偏最小二乘判别分析

目的 建立同时测定密蒙花药材中4种成分含量的方法，并进行主成分分析（principal component analysis，PCA）和偏最小二乘判别分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）。方法 采用超高效液相色谱法，色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18，流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液（梯度洗脱），流速为0.15 mL/min，检测波长为330 nm，柱温为30 ℃，进样量为2 μL。采用SIMCA 14.1统计软件对含量测定结果进行PCA和PLS-DA研究。结果 4种指标性成分的线性、分离度、稳定性、重复性与精密度良好；24批药材样品有2个主成分，PLS-DA分析确定了2个分类标志物。结论 本研究建立的方法的精密度、稳定性、重复性均较好，可用于密蒙花药材中4种成分含量的同时测定；不同产地的密蒙花药材质量差异较大。     

大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠乙酰胆碱代谢的影响

目的 观察大豆异黄酮（soybean isoflavone，SIF）对阿尔茨海默病（Alzheimer''s disease，AD）模型大鼠海马乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）代谢的影响，探讨SIF治疗AD的作用机制。方法 将50只大鼠随机分为假手术组，模型组，戊酸雌二醇组和SIF高、低剂量组，采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)复制AD大鼠模型，分别给药21 d后，采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化，免疫组织化学法检测大鼠海马组织ACh、胆碱乙酰转移酶（choline acetyl transferase，ChAT）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholine esterase，AchE）的表达。结果 SIF可显著降低AD大鼠的逃避潜伏期（P<0.01），显著增加AD大鼠的游泳时间百分比、穿过平台次数以及海马组织ACh、ChAT、AchE的表达（P<0.05，或P<0.01）。结论 SIF可能通过增强海马组织ACh的代谢起到提高学习记忆能力的作用。     

基于网络药理学和分子对接验证技术探讨贯叶金丝桃抗阿尔茨海默病的作用机制

目的 利用网络药理学及分子对接技术研究贯叶金丝桃治疗阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）的潜在作用机制。方法 在TCMSP及TCM Database@Taiwan数据库查找贯叶金丝桃的化学成分并进行活性成分筛选;利用化源网、PubChem、SwissTargetPrediction及ChEMBL数据库获取活性成分的作用靶点,检索GeneCards、OMIM、DrugBank和DisGeNET数据库,结合文献检索获取AD的疾病靶点。取两者交集靶点,利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络。采用Metascape平台对靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析,通过Cytoscape 3.10.0软件构建“化合物-靶点-通路”网络并进行拓扑学分析,并采用AutoDock Vina 1.1.2进行分子对接验证。结果 贯叶金丝桃防治痴呆的关键化合物是贯叶金丝桃素金、丝桃素及金丝桃苷等,其对应的关键靶点为APP、PIK3R1、PIK3CA、AKT1、EGFR、GSK3B等,分子对接验证结果显示其主要活性成分与核心靶点均具备潜在活性。所涉及的主要分子过程及通路为激酶活性的正调控、神经活性配体-受体相互作用及激酶活性调节等,关键通路为AD通路和PI3K-Akt信号通路。结论 贯叶金丝桃治疗AD的机制可能与减少β-淀粉样蛋白的产生及tau蛋白形成,调节神经炎症相关。     

丹参川芎有效成分配伍对缺氧损伤大鼠脑内皮细胞的影响

目的 研究丹参川芎有效成分不同配伍对缺氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞（rat brain microvascular endothelial cells, rBMECs）的影响，并找出较优组合。方法 采用体外培养的rBMECs，并进行兔抗鼠Ⅷ因子鉴定，建立体外细胞缺氧模型。对参芎有效成分丹参素（A）、丹参酮Ⅱa（B）、川芎嗪（C）、藁本内酯（D）、阿魏酸（E），以3个剂量水平进行正交实验，另设正常组、模型组，观察不同配伍对细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活性、细胞上清液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）、细胞凋亡率及细胞周期的影响。采用正交方差分析、直观综合分析对实验结果进行多指标优化。 结果 与模型组比较，各配伍样品均可提高SOD活性，降低LDH含量，减少细胞早期凋亡，抑制缺氧诱导的rBMECs发生G1/S期阻滞的作用。正交方差分析表明：A2B1C3D2E1为SOD的较优组合，A3B1C1D2E3为LDH的较优组合，A2B1C2D3E2为早期凋亡的较优组合，A2B3C3D3E2为G1期的较优组合，A2B3C3D2E2为S期的较优组合；综合分析结果显示A2B1C1D3E2为多指标的较优组合。结论 丹参川芎有效成分不同配伍可在一定程度上保护缺氧对rBMEC的损伤，不同配伍作用方式的侧重不同。     

UHPLC-MS/MS同时测定黄芩清热除痹胶囊中6种活性成分

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱同时测定黄芩清热除痹胶囊中6种成分（黄芩苷、栀子苷、木犀草素、齐墩果酸、薏苡素、苦杏仁苷）含量的方法。方法 采用Phenomenex Luna Omega C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.6 μm）,以含10 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸的乙腈（B）为流动相,进行梯度洗脱,柱温为30 ℃,流速为0.25 mL/min,进样量5 μL,分析时间10 min。采用电喷雾离子源,以多反应监测模式在负离子条件下进行检测。结果 所测6种活性成分在测定浓度范围内线性关系良好（r≥0.999 0）,精密度、稳定性和重复性良好,平均加样回收率为98.62%~103.7%,RSD≤2.70%。结论 该方法准确度高、分析速度快、检测限低、重复性高,适用于黄芩清热除痹胶囊质量控制。