溺死尸体器官硅藻检出率季节性差异

目的 研究溺水死亡者肺、肝、肾、骨髓等器官淡水硅藻检出率可能存在的季节性差异,为法医学解决水中尸体死因鉴定提供技术帮助与科学证据.方法 收集2009～2011年1、4、7、10月沈阳市浑河中溺死尸体每月(组)各5例;45只家兔分相应月份生前、死后入水组及对照组,分别于当月发现水中尸体后第2天入水,取人及兔肺、肝、肾、股骨骨髓及现场水样备检,应用酶消化法检测各组器官中硅藻数量、种属并与现场水样比对.结果 各组溺死尸体肺中均检出多量硅藻且种属与现场水样一致,春、秋及冬季溺死尸体肝、肾中仅可检出少量体积较小的小环藻等中心纲硅藻,夏季肝、肾及骨髓中均未检出硅藻;各组溺死家兔肺中均检出少量小环藻等中心纲硅藻,肝、肾及骨髓中未检出硅藻.结论 硅藻种群的季节性变化及不同种群硅藻体积的差异可能造成肝、肾等大循环器官中硅藻检出率的季节性差异;仅肺中检出硅藻,肝、肾中硅藻检验结果阴性并不能排除溺死可能.     

非溺死尸体肺脏硅藻最大值在溺死鉴定中的应用初探

探讨非溺死尸体肺脏硅藻最大值（即空气吸入与检验污染之和的最大值）在溺死鉴定中的应用价值。用硝化-光镜法检测贵阳地区40例非溺死尸体肺脏硅藻含量的最大值，同时作了8例溺死尸体肺脏硅藻检验。非溺死组肺脏硅藻最大值2个／5g；溺死组有7例为56～463个／5g，1例是2个／5g。表明（1）水中尸体肺脏硅藻检验值大于最大值（2个／5g），可考虑为溺死；显著大于最大值（本文溺死组7例56～463个／5g）则可鉴定为溺死；（2）等于或小于最大值，提示干性溺死或抛尸入水，可结合尸检发现及案情鉴别。     

宁波甬江水域夏冬季节溺死兔内脏硅藻16SrDNA的鉴定

目的采用PCR法检测夏季7月和冬季12月宁波甬江水域溺死家兔内脏组织中硅藻16SrDNA,评估其在夏季7月和冬季12月溺死鉴定中的应用价值。方法于夏季7月和冬季12月分别选取30只大白兔,总计60只大白兔,随机分为溺死组(n=10)、死后入水组(n=10)、空气栓塞组(n=10)。各组分别提取心、肝、肺、肾组织,应用PCR技术检测上述兔内脏硅藻16SrDNA。结果与死后入水组比较,夏季7月兔溺死组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA检出率明显增高(P<0.05);而冬季12月溺死组仅心、肺组织中检见硅藻16SrDNA,与死后入水组比较无明显差异(P>0.05);夏季7月溺死兔组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA检出率明显高于冬季季12月溺死兔组(P<0.05);夏季7月和冬季12月空气栓塞组心、肝、肺、肾组织中硅藻16SrDNA均未检出。结论宁波甬江水域夏季溺死兔中硅藻16SrDNA检出率高,PCR技术可用于溺死诊断;而冬季硅藻16SrDNA检出率低,运用该技术诊断溺死应慎重。     

微波消解-扫描电镜联用检测脏器内硅藻

目的介绍一种微波消解-扫描电镜联用检测脏器内硅藻的新方法。方法大白兔30只,随机分为生前溺死组（n=15）和死后溺尸组（n=15）。提取兔肺、肝、肾、股骨骨髓和现场珠江水样,采用建立的微波消解-扫描电镜联用法检测脏器组织和水样中的硅藻,并与硝酸乙醇消解-扫描电镜联用的方法进行比较。结果生前溺死组的兔肺、肝、肾、股骨骨髓组织中大多数观测到与现场珠江水样一致的硅藻,微波消解-扫描电镜联用法检测脏器内硅藻的平均含量分别为：2505.2个/2g肺,18.7个/10g肝,6.5个/10g肾,6.3个/0.5g骨髓;肺与肝、肾、骨髓检出硅藻的阳性比例为86.7%,脏器硅藻检出含量和硅藻检验阳性比例均明显高于硝酸乙醇消解-扫描电镜联用法所测值。死后溺尸组的兔脏器组织均未观测到硅藻。结论微波消解-扫描电镜联用法检测脏器内硅藻,高效、安全、环保,硅藻检验灵敏度高,降低了劳动强度,提高了定性定量分析准确度,且能有效避免污染,在法医学溺死鉴定中具有良好的应用价值。     

PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因在溺死鉴定中的应用

目的采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,评估其在溺死鉴定中的应用价值。方法 60只实验兔随机分为生前溺死（水中溺毙）、死后入水（空气栓塞致死后入水）、对照组（空气栓塞致死后不做处理）;溺死人体脏器组织;取各组织检材提取硅藻DNA,PCR扩增硅藻特异的核糖体小亚基（SSU）片段,用琼脂糖凝胶电泳检测、DHPLC检测分析。结果 6份硝酸消化法检测阴性的溺死人体器官组织检材经PCR及琼脂糖凝胶电泳检出5例阳性。生前溺死组肺、肝、肾硅藻检出率分别为100%、90%、85%,死后入水组仅肺检出硅藻（15%）,对照组各组织均为阴性;生前溺死组检出率明显高于死后入水组（P〈0.05）。10份溺死人体器官组织检材采用DHPLC法检出硅藻种类明显多于微波消解-扫描电镜法（P〈0.05）。脏器检出硅藻种类与溺死点水样一致。结论采用PCR-DHPLC法检测硅藻SSU基因,有助于溺死鉴定和溺死地点的推断,具有法医学应用价值。     

微波消解-扫描电镜联用法在溺死诊断中的应用

目的探讨微波消解-扫描电镜联用法在溺死诊断中的应用价值。方法收集已知死因的尸体标本105例,其中水中尸体85例(生前溺死70例,死后抛尸入水15例),陆地自然死亡尸体20例。水中死亡案例同时收集落水处水样。分别用微波消解-扫描电镜联用法(方法 A)和硝酸破机-光镜联用法(方法 B)对上述尸体的离体肺、肝、肾、骨髓组织及水样进行硅藻定性、定量检测。结果①溺死尸体的肺、肝、肾、骨髓中及落水处水样硅藻检出率:A法分别为100%、94.3%、92.9%、82.9%、100%,硅藻检验阳性率为100%;B法分别为90%、62.9%、51.4%、28.6%、92.9%,硅藻检验阳性率为65.7%。②两种方法检出的硅藻种类与落水处水样中硅藻的种类均一致。③两种方法在死后入水尸体离体的肺中也检出少量硅藻(<3个/2g肺组织),但在死后入水尸体的其它脏器及陆地自然死亡尸体脏器中均未检出硅藻。结论微波消解-扫描电镜联用法较硝酸破机-光镜联用法对尸体离体组织脏器中的硅藻检出率高,方法灵敏,定性准确。     

数字虚拟切片技术在武汉市中心城区水域春季硅藻调查中的应用

目的建立武汉市中心城区水域春季的硅藻形态及相对构成比数据库。方法2012年3、4月期间,在武汉市中心城区的主要河流、湖泊、公园水域中共选取32个采水点并进行水样采集,利用数字虚拟切片工作站（OLYMPUS-DotSlide）采集图像,对硅藻进行种属鉴别和计数。结果共检见14种硅藻藻属,各水域所含硅藻种类及相对构成比有所差异。结论本研究结果提高了硅藻的阳性检出率、计数的准确率以及溺死诊断的效率,可为溺死案件中相应水域的硅藻比对提供基础检测平台,为溺死地点的推断提供依据。     

宁波市三江流域夏季硅藻分布

目的研究宁波市三江流域夏季水中硅藻的种类、数量及藻属分布情况,为宁波市相关水域溺死案件的法医学检验提供科学依据。方法在2015年7月和8月份采集标本水样,沿姚江、奉化江和甬江共选取14处样本水采集点,应用显微镜观察技术,通过形态特征辨析硅藻的种属和各河段的优势硅藻。结果姚江、奉化江和甬江的水体中总共发现了16类硅藻种属。姚江的直链藻属最为丰富,数量和丰富度上均高于其他流域;甬江的小环藻属丰富度高于其他流域;奉化江的羽纹藻属和楔形藻属的丰富度总体上要高于姚江和甬江。结论各个河段的硅藻种属和比例具有一定的差异,初步建立了相应流域硅藻种属及相对构成比数据库,为宁波市三江流域的溺死案件法医检验鉴定提供数据支持。     

PCR-DGGE法检测浮游生物16S rDNA在溺死鉴定中的应用

目的建立并评估PCR-DGGE法检测浮游生物对溺死鉴定的应用价值。方法大白兔30只随机分为3组:溺死组(n=12),死后抛尸组(n=12)和对照组(n=6);溺死组和死后抛尸组又分为2个亚组:东湖水域组(n=6)和墨水湖水域组(n=6)。死后提取心血和肺、肝、肾、脑等组织,匀浆后,采用Percoll密度梯度离心法分离浮游生物并提取其DNA,PCR扩增浮游生物特异的16S rDNA片段后分别用琼脂糖凝胶电泳及DGGE检测分析。2个溺死案例检材同法检验。结果溺死组各组织器官中浮游生物检测多呈阳性:肺(100%)、肝(83%)、肾(75%)、心血(83%)、脑(42%);死后抛尸组仅2例肺组织(16.7%)检出阳性;对照组全部阴性。溺尸肺组织DGGE分型图谱与相应溺死点水样分型图谱相似,而与非溺死点水样分型结果差异显著。2实际案例均呈阳性。结论本方法不仅有助于定性诊断溺死,而且通过比较产物的多样性可以推断溺死地点,在法医学溺死鉴定中具有较大实用价值。     

强酸消化法和胰蛋白酶消化法检验腐败脏器硅藻的比较研究

目的探讨强酸消化法和胰蛋白酶消化法检验腐败脏器硅藻的优缺点，为法医工作者选择硅藻检验方案提供理论依据。方法用24只健康清洁级家兔，雌雄不限，制作溺死动物模型。室温放置72h后，分别取其肝、肾、肺3种组织各5g，用强酸消化法和胰蛋白酶消化法进行消化，分别比较两种消化方法的消化时间、消化能力和硅藻检出率。结果强酸消化法的消化时间显著短于胰蛋白酶消化法（P〈0．05），强酸消化的消化能力强于胰蛋白酶消化法（P〈0．05），而强酸消化法的硅藻检出率低于胰蛋白酶消化法（P〈0．05）。结论为加快办案效率，可以选择强酸消化法；对于水样硅藻含量低，则选择硅藻检出率相对较高的胰蛋白酶消化法。     

检测浮游生物叶绿素相关基因诊断溺死的实验研究

目的评估浮游生物叶绿素相关基因检测用于溺死诊断的价值。方法将18只大白兔随机分为溺死组（n=10）、死后抛尸组（n=6）和对照组（n=2）,各组分别取心血及肺、肝、肾、脑组织,分离浮游生物并提取其DNA,用PCR技术检测叶绿素相关基因EG（EG1和EG2）及SK（SK1和SK2）。同时用硝酸消化法检验肺和肝组织中的硅藻。结果溺死组心血及肺、肝、肾、脑组织中EG1分别检出9、10、9、7和8例阳性,EG2分别检出8、10、7、5和7例阳性;死后抛尸组仅在心血和肺组织中各检出1例EG1阳性;对照组各组织均未检出EG1和EG2。SK1、SK2除在溺死组心血、肺和肾有少数检出外（≤2例）,在其他组未检出扩增产物。硝酸消化法从溺死组肺、肝组织中分别有9例及3例检出硅藻,死后抛尸组仅在1例肺组织中检出。结论浮游生物叶绿素相关基因EG用于溺死诊断的阳性检出率要高于硝酸消化法,在溺死诊断中具有较高的应用价值。     

Microbiota Composition and Pulmonary Surfactant Protein Expression as Markers of Death by Drowning

Pathological diagnosis of drowning remains a challenge for forensic science, because of a lack of pathognomonic findings. We analyzed microbiota and surfactant protein in the lungs for a novel diagnosis of drowning. All rats were divided into drowning, postmortem submersion, and control groups. The water, lungs, closed organs (kidney and liver), and cardiac blood in rats were assayed by targeting 16S ribosomal RNA of Miseq sequencing. Lung samples were analyzed by immunohistochemical staining for surfactant protein A. The closed organs and cardiac blood of drowned group have a lot of aquatic microbes, which have not been detected in postmortem submersion group. Furthermore, intra‐alveolar granular staining of surfactant protein A (SP‐A) was severely observed in the drowned group than the postmortem submersion and control groups. The findings suggested that the presence of aquatic microbiota in the closed organs and increased expression of SP‐A could be markers for a diagnosis of drowning.     

勒福特王水消解法检验动物器官硅藻的法医学应用

目的研究勒福特王水消解法对动物器官中硅藻检验的法医学应用。方法将勒福特王水消解-滤膜富集-扫描电镜观察法与传统强酸消解-离心富集-光学显微镜观察法比较,对生前入水和死后入水的实验动物肺、肝和肾组织中的硅藻数量、检验时间、检出率以及观察效果进行研究,并进行统计学分析。结果生前入水组用勒福特王水消解-滤膜富集-扫描电镜观察法检出肺、肝、肾组织中的硅藻数量均多于传统方法(P0.05),检验时间少于传统方法(P0.05),检出率无差异(P0.05),观察效果优于传统方法。结论勒福特王水消解-滤膜富集-扫描电镜观察法具有简单、高效、定性定量分析准确的特点,该方法成本低廉,操作简单,具有较好的实用价值。     

测定肺锶含量鉴定溺死的研究

作者借助ICP 检测溺死和死后沉入水中,浸泡不同时间家兔及对照组肺腮含量。结果表明,溺死组肺锶含量显著高于死后入水组和对照组(P<0. 01) ;无论溺死或死后沉入水中浸泡不同时间,家兔肺锶含量之间无明显差异(P>0. 05) ,提示肺锶含量受水中浸泡时间或腐败因素的影响并不显著。2例实际案例的肺锶含量测定支持实验性研究结果,说明肺锶含量测定可用于鉴定溺死,具有实用价值。     

Diatoms in forensic expertise of drowning--a Macedonian experience

Results obtained by examination of 22 human cases suspected for drowning, one human case of death other than drowning and several tests on laboratory rats were used as a basis for evaluation of diatom method as supportive in forensic expertise of drowning. The recovery of diatoms from various examined organs, their qualitative and quantitative composition, if properly treated without the possibility of contamination, can be a reliable proof of the time and place of drowning. The priority of organ examination (external microflora determination, lungs, brain, heart (and/or blood), stomach, liver and kidney, and finally bone marrow) is discussed and established as well as the basic future research on cases suspected of drowning, but also on non-drowned victims and laboratory animals.