鹅多斑艾美球虫生活史及致病性的研究

给10只10日龄雏鹅分别经口接种2.0×105~6.5×105个多斑艾美球虫(Eimeria stig-mosa)孢子化卵囊,在接种后48~180 h分期剖杀,对多斑艾美球虫的生活史和致病性进行了动态观察。结果,在内生性发育过程中,多斑艾美球虫可能仅有1个世代的裂殖生殖阶段,每个裂殖体含3~5个裂殖子。在感染后第108 h左右,多斑艾美球虫完成裂殖生殖并进入配子生殖阶段。所有内生殖阶段均在肠上皮细胞核内发育。潜隐期为4.5 d,显露期为4 d。25℃下卵囊孢子化时间为36~48 h。多斑艾美球虫主要寄生于空肠、回肠、盲肠和直肠绒毛中部到顶部的上皮细胞中,引起轻微病变。感染鹅仅出现轻度拉稀,未发生死亡。结果表明,多斑艾美球虫对家鹅致病性较小。     

雏鸡感染巨型艾美耳球虫后肠道T淋巴细胞和上皮间淋巴细胞的变化

对１２日龄雏鸡初次感染巨型艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｍａｘｉｍａ）后，盲肠扁桃体中Ｔ淋巴细胞数量显著增加，肠上皮间淋巴细胞（ＩＥＬ）在球虫内生性发育末期明显增多；再次感染后ＩＥＬ迅速增多。表明肠道淋巴组织的局部细胞免疫机制可能在机体抗球虫免疫中有重要意义。     

柔嫩艾美耳球虫穿孔素样蛋白基因的原核表达与亚细胞定位

为了研究柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)穿孔素样蛋白(Et PLP)在球虫感染中与宿主相互作用关系,首次成功获得EtPLP1(1 932 bp)和EtPLP2(4 215 bp)2个目的基因。通过表达纯化得到2个大小分别为37和67ku的目的蛋白,Western-blot结果显示其反应原性良好。通过免疫荧光技术,观察到EtPLP1定位在子孢子顶端。m RNA转录水平检测结果显示,EtPLP1在子孢子阶段的表达量最高,其次是第1代裂殖子阶段,EtPLP2m RNA水平在第1代裂殖子阶段表达量最高,其次是第2代裂殖子阶段;它们在其他阶段表达量极低或不表达。结果表明EtPLP1和EtPLP2可能参与虫体入侵与逸出宿主细胞,为EtPLPs蛋白功能研究奠定了基础。     

堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子的纯化试验

堆型艾美耳球虫早熟减毒株裂殖子的纯化试验１）秦建华赵月兰张明勇２）（张家口农业高等专科学校０７５１３１）球虫的裂殖子是进行球虫生理生化、体外培养及免疫学研究的基础材料。裂殖子存在于感染鸡的肠道内，为了提取和纯化裂殖子我们进行了如下试验。１材料与方法１...     

复方敌球灵对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子生殖及致病力的影响

复方敌球灵对鸡柔嫩艾美耳球虫孢子生殖及致病力的影响１）胡庭俊梁纪兰党萍樊斌堂刘大义（中国农业科学院中兽医研究所兰州７３００５０）鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的寄生虫病，病原体为艾美耳属球虫。近年来，中国农业科学院中兽医研究所研制出了抗鸡球虫中药制剂敌...     

鸡柔嫩艾美球虫DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2对其他球虫的交叉保护力

将柔嫩艾美球虫DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2以50μg分别对14日龄和21日龄雏鸡进行胸部肌肉注射免疫,28日龄对各未免疫组与免疫组鸡分别口服接种柔嫩艾美球虫、巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾美球虫孢子化卵囊,36日龄剖杀,分析比较免疫保护效果.结果显示,柔嫩艾美球虫攻毒免疫试验组与柔嫩艾美球虫攻毒未免疫对照组比较,增重、盲肠病变记分、OPG值差异显著(P＜0.05),免疫保护效果明显,抗球虫指数(ACI)达186.50;而巨型艾美球虫、堆形艾美球虫和毒害艾美球虫攻毒免疫试验组的ACI分别为147.85、142.71和153.82,增重、盲肠病变记分、OPG值和ACI与相应的攻毒未免疫对照组比较,均有不同程度改善,免疫保护效果不明显.表明,该DNA疫苗对柔嫩艾美球虫的攻击具有完全免疫保护作用,而对巨型艾美球虫、堆形艾美球虫、毒害艾美球虫的攻击具有部分交叉保护力.     

地克珠利对柔嫩艾美耳球虫SAG4表达的影响

建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫感染鸡动物模型,收集获得柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子,采用PCR扩增柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子SAG4基因不含N端信号肽的编码序列,构建p ET-28a-SAG4表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备SAG4抗血清。用Real-time PCR检测SAG4 m RNA的表达,用Western-blot和免疫荧光技术检测SAG4蛋白的表达情况。结果显示,p ET-28a-SAG4表达的重组蛋白为可溶性蛋白,地克珠利显著降低了柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子SAG4基因m RNA和蛋白的表达。这提示SAG4基因可能与地克珠利抗球虫作用相关,这将为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供理论依据。     

不同日龄雏鸡对柔嫩艾美球虫早熟株卵囊的易感性及免疫力

对１,７和２５日龄鸡分别感染１０００个早熟柔嫩艾美球虫孢子化卵囊,感染１２０ｈ后,每２４ｈ收集粪便１次,进行卵囊计数,连续７ｄ,３种日龄鸡排卵囊总数分别为４６０．９,８０２．０和１４１７．７万个／只。感染后１４ｄ对１日龄和７日龄鸡的免疫组及相对应的２个不免疫对照组每只鸡攻击１００个柔嫩艾美球虫亲本株孢子化卵囊,攻毒１４４ｈ后,每２４ｈ收集粪便１次,进行卵囊计数,连续５ｄ,各组鸡的卵囊总量分别为４１．４,５．８和８９１．０,９７７．１万个／只。结果表明球虫卵囊对１日龄和７日龄雏鸡具有一定的感染力,分别占２５日龄雏鸡的３２．５％和５６．６％,与对照组相比,保护率分别为９５．４％和９９．４％。     

安徽省家畜家禽球虫种类调查

采集安徽省濉溪等１１个县市的１２种家畜家禽粪样，观察６１５６个球虫卵囊，共发现４属８４种球虫。其中艾美属（Ｅｉｍｅｒｉａ）７４种，等饱属（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）３种，泰泽属（Ｔｙｚｚｅｒｉａ）５种，温扬属（Ｗｅｎｙｏｎｅｌｌａ）２种。有５２种球虫为安徽省首次发现；法尔氏艾美球虫（Ｅ．ｆａｒｒａｅ）、热带艾美球虫（Ｅ．ｔｒｉｐｉａｌｉｓ）为国内新记录；艾氏泰泽球虫（Ｔ．ａｌｌｅｎｉ）为首次在家禽中发现。     

急性犬瘟热伴发寄生性肠炎的病理形态学观察

为从病理学方面调查急性犬瘟热与寄生性肠炎的关系,通过免疫组织化学、苏木精伊红和过碘酸雪夫氏染色等方法,对12例急性犬瘟热伴发腹泻的病例进行了病理组织学研究。结果表明,6例腹泻主要是由球虫引起的,2例由隐孢子虫所致。犬球虫主要存在于病犬的空肠和回肠黏膜的上皮细胞内,在脱落的肠上皮细胞和被破坏的肠绒毛所形成的黏液内,也能检出大量的球虫。最常见的球虫形态为滋养体和裂殖体,滋养体多位于上皮细胞内或细胞间,断面呈不整圆形,核位于中央,被苏木精深染,原生质淡染呈细网状,质膜明显;裂殖体多呈不整圆形,内有香蕉状的裂殖子,位于变性的肠上皮细胞内,含有较多的糖原颗粒,用过碘酸雪夫氏染色时呈红色。隐孢子虫主要位于肠上皮细胞和肠腺上皮细胞的纹状缘,引起微绒毛破坏和细胞脱落。用抗犬瘟热病毒核衣壳蛋白单抗染色检查,小肠黏膜上皮细胞、隐窝的腺上皮细胞、浸润在肠黏膜固有层的淋巴细胞、巨噬细胞和集合淋巴结的树突状细胞均呈强阳性反应。据此认为急性犬瘟热的寄生性腹泻是在犬瘟热病毒引起肠黏膜抵抗力降低的基础上发生的。     

贝氏隐孢子虫在鹌鹑与鸡体内发育比较的研究

本研究表明,鹌鹑是贝氏隐孢子虫的新宿主。贝氏隐孢子虫在鹌鹑体内和鸡体内的发育过程基本相同,潜在期均为3天,开放期分别为4～14天和4～24天,虫体的主要寄生部位为法氏囊、泄殖腔和呼吸道,发育的基本过程为3代裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖,很少见到薄壁型卵囊。虫体形态大小在二者体内无差别,首次出现时间差别不大。经口感染,贝氏隐孢子虫可引起鹌鹑的发病与死亡,发病率为13.3％,病死率为100％,病程为2～3天。发病后主要表现为伸颈、张口呼吸和翅下垂。剖检可见气管粘膜水肿、粘液增多。H.E.染色可见气管粘膜表面有大量嗜碱性虫体,有时有大量细菌寄生;轻者粘膜上皮细胞纤毛消失,重者粘膜上皮脱落;固有层充血水肿。嗉囊注射接种表明,贝氏隐孢子虫在鹌鹑体内不存在从消化道向气管的移行。     

重组鸡γ干扰素对柔嫩艾美球虫卵囊免疫鸡肠道免疫相关细胞数量的影响

分别给7日龄和14日龄雏鸡免疫柔嫩艾美球虫孢子化卵囊并同时肌肉注射5 000 U重组鸡γ干扰素(rChIFN-γ),21日龄再以5×104个同源柔嫩艾美球虫孢子化卵囊攻虫.分别取试验鸡各肠段制作组织切片,经HE和PAS染色后显微镜检查.发现21日龄时,rChIFN-γ加强免疫组鸡肠道黏膜上皮内淋巴细胞(IELs,9.8)和杯状细胞(GCs,26.2)数量显著高于免疫对照组(8.2、24.9);28日龄时,加强免疫组的IELs和GCs数量进一步增多(13.5、34.1)并显著高于免疫对照组(11.8、26.9).用改良甲苯胺蓝组织化学染色法检测发现,rhIFN-γ可增加十二指肠、空肠、回肠和盲肠黏膜上皮肥大细胞(MCs)数量.结果提示,rChIFN-γ可有效刺激试验鸡肠道黏膜IELs、GCs和MCs的分化与增殖,具有增强肠道黏膜非特异性免疫的作用.     

地克珠利对柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5表达的影响

建立地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染鸡动物模型,收集获得E. tenella第2代裂殖子,通过PCR扩增E. tenella第2代裂殖子丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5(serine/threonine protein phosphatase type 5,Et PP5)基因编码序列,构建pET-28a-Et PP5表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达融合蛋白,镍亲和层析柱法纯化表达蛋白并免疫BABL/c小鼠制备Et PP5抗血清。采用免疫荧光和Western-blot技术检测第2代裂殖子Et PP5蛋白的表达。结果显示,30℃时,用1 mmol/L的IPTG诱导pET-28a-Et PP5表达的融合蛋白大多以包涵体形式存在。Et PP5主要分布在E. tenella第2代裂殖子的细胞质中,细胞核也有少量分布。经地克珠利处理后,E. tenella第2代裂殖子Et PP5蛋白表达降低了47.65%(P0.01)。提示,地克珠利可能通过作用Et PP5发挥抗球虫作用,这为地克珠利抗球虫作用机理的阐述提供了理论依据。     

用柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚测定和评价抗球虫药的效力

用柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚测定和评价抗球虫药的效力１）张勤赵洪明２）张晋江３）李华风４）张华莹（河北省畜牧兽医研究所保定０７１０００）由于球虫对药物极易产生抗药性，所以大多数抗球虫药的使用期限都较短，这样就需要不断地研制新的抗球虫药。在抗球虫药的研究中...     

柔嫩艾美耳球虫感染鸡的盲肠上皮间淋巴细胞表达白介素17的动态变化

以1×104个柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊感染10日龄AA肉鸡,于感染后第24、48及72小时分离鸡盲肠上皮间淋巴细胞(IELs)。提取鸡盲肠IELs总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-17的表达动态;然后用FITC标记的抗鸡CD4单抗和PE标记的抗小鼠IL-17单抗作为抗体对盲肠IELs进行荧光抗体染色,再进行流式细胞术分析,检测了表达IL-17的CD4+盲肠IELs在柔嫩艾美耳球虫感染后的动态变化。实时荧光定量PCR结果表明,鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后能够显著上调IL-17mR-NA的表达水平,流式细胞分析结果表明,在球虫感染后表达IL-17的CD4+细胞数量显著上升。这些结果表明,IL-17参与了宿主抵抗球虫感染的反应。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病，经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ ＧＩＢ） ，并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 株，ＨＡ 效价为２１２，ＥＩＤ５０ 为１０ －６．８１／０ ．２ ｍ Ｌ。病毒干扰试验中，ＩＢＶＪＢ９７０２ ＋ ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ 效价为２４～６ ，ＬａＳｏｔａ 接种鸡胚ＨＡ 效价为２１０～１１ ；用ＩＢＶ ＪＢ９７０２ 病毒液１∶１０ 稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ１２０ 弱毒疫苗免疫雏鸡，发病８／１０ ，死亡３／１０ 。     

广东山东和福建三省鸡卡氏住白细胞虫病流行病学调查

通过免疫琼脂扩散试验和血液涂片检查，对广东、山东和福建省的２３个鸡场进行了鸡卡氏住白细胞虫病调查。在抽样检查的４２５只鸡中，３１只鸡血液涂片查出该虫体裂殖子或配子体，２９只鸡血清抗体阳性，总检出率为１４．１％，广东、山东、福建省检出率分别为１０．３％，１２．６％和２４．５％。血液涂片检查结果，青年鸡的检出率（１０．７％）明显高于成年鸡（３．８％）；免疫琼脂扩散试验检测时，成年鸡的阳性率（１０．９％）则显著高于青年鸡（２．８％）。因此，进行鸡卡氏住白细胞虫病调查时，宜采用寄生虫学和血清学相结合的方法。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ、病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭｃＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ_（２ａ），后２株属于ＩｇＧ_１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。     

鸡堆形艾美球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其抗球虫免疫保护作用

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从堆形艾美球虫SH株子孢子中扩增3-1E基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E.质粒纯化后体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光技术和免疫组织化学技术检测3-1E蛋白在转染细胞中的表达情况.将构建的重组质粒以及空载体质粒分别于14、21日龄分2次经腿部肌肉注射免疫SPF雏鸡,28日龄除非免疫非感染对照组外各组攻击性感染5×104个堆形艾美球虫孢子化卵囊,观察真核表达质粒对球虫感染鸡的免疫保护作用并探讨其免疫保护机理.结果显示,与载体对照组相比,质粒pcDNA3.1(+)-3-1E 2次免疫后可显著提高脾CD8 T淋巴细胞亚型数量,并具有一定的抗球虫免疫保护作用,可显著减少每克粪便的卵囊排出量,降低十二指肠病变记分,减少增重下降等.     

两种β_2受体激动剂快速免疫检测方法

分别以偶氮方法和碳化二亚胺（ＥＤＣ）方法将β２受体激动剂克伦特罗（ＣＬ）和塞曼特罗（ＣＩＭ）连接到载体蛋白上，并以连接物免疫家兔，分别制备兔抗ＣＬ和ＣＩＭ抗血清，经间接ＥＬＩＳＡ和间接抑制ＥＬＩＳＡ检测抗血清效价和特异性，并在此基础上建立了ＣＬ和ＣＩＭ快速免疫检测方法。２种抗血清工作浓度分别为１∶１００００和１∶５０００。ＣＬ和ＣＩＭ免疫检测范围分别为１．９ｎｇ～１５．６μｇ和０．４７７ｎｇ～１．８５μｇ。２种β２受体激动剂快速免疫检测方法的建立为监督畜牧生产上滥用ＣＬ和ＣＩＭ，检测肉品ＣＬ和ＣＩＭ残留提供了一种简便、灵敏、特异的手段。