FSH受体在雌性山羊肠系膜后神经节中的分布

为了探讨卵泡刺激素(FSH)是否可以通过影响腹腔肠系膜后神经节的活动调节雌性山羊的生殖活动,采用免疫组织化学染色法研究了雌性山羊肠系膜后神经节中FSH受体的分布特点。结果显示,在肠系膜后神经节中,FSH受体免疫阳性产物在雌性山羊肠系膜后神经节中分布广泛,神经细胞、支持细胞、施万细胞以及过路纤维中均有分布,但主要分布在神经细胞中;在神经细胞中,FSH受体免疫阳性产物主要存在于细胞膜和细胞质中,而细胞核中分布较少,呈弱阳性。表明雌性山羊肠系膜后神经节神经元对FSH具有反应性,提示FSH可能通过肠系膜后神经节发出的交感节后神经这一途径调节生殖系统的机能活动。     

刚地弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达

采用PCR技术从刚地弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3(MIC3)基因,并克隆到pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)后进行PCR、酶切及测序鉴定.将重组质粒转染BHK-21细胞.间接免疫荧光染色证明,质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达.Western-blot分析证实,细胞裂解液及上清样品中有1条约39.2 ku的条带,可被山羊抗刚地弓形虫超免疫血清所识别,大小与预测值相符.表明,真核表达质粒pcDNA3-MIC3中的MIC3基因在BHK-21细胞中获得表达且表达产物具有抗原性.     

GnRH受体在山羊颈中神经节的分布特点

为了证实GnRH受体在山羊颈中神经节是否存在,取雄性和雌性成年山羊的颈中神经节各5对,经免疫组织化学SP法染色后,观察GnRH受体在颈中神经节的分布特点。结果表明,山羊颈中神经节的神经元、血管内皮细胞、神经纤维及卫星细胞均有不同程度的阳性染色。神经元中GnRH受体强阳性产物分布于胞膜上,中等阳性产物分布于整个胞质中;血管内皮细胞有中等阳性产物;神经纤维、卫星细胞和施万细胞有弱阳性产物分布。证实,GnRH受体在山羊颈中神经节中分布广泛,提示颈中神经节可能受GnRH调节,这为研究GnRH非生殖调节功能及颈中神经节的神经内分泌调节机制提供了形态学依据。     

山羊角膜缘干细胞的分离培养

采用分散酶Ⅱ(dispaseⅡ)联合胰蛋白酶二步法分离培养山羊角膜缘干细胞,观察其体外培养特性,通过免疫细胞化学、RT-PCR法鉴定分离培养的细胞。结果显示,获取的细胞形态为多角形,体外培养能传20多代,经免疫组织化学和分子生物学鉴定,细胞表达角膜缘干细胞标志物p63、PCNA、ABCG2和角膜上皮细胞标志物K3/K12和Cx43。本试验建立了山羊角膜缘干细胞的体外培养方法,可为角膜缘干细胞的研究提供方法学基础。     

狂犬病病毒SRV-9株对小鼠脑神经原代细胞的感染及毒力观察

为建立一种狂犬病病毒(RV)感染原代神经细胞的体外培养方法,分离培养了新生小鼠脑神经原代细胞,并进行了RV感染试验,利用免疫荧光技术和免疫细胞化学试验检测了神经细胞中的RV及其对被感染细胞的影响.结果显示,RV可感染分离的原代神经细胞,并可以检测到针对RV的特异性荧光.表明,建立了可培养RV的原代神经细胞的制备方法,并...     

绵羊肺炎支原体免疫组织化学及间接免疫荧光检测方法的建立

以病理组织学观察为基础,建立检测绵羊肺炎支原体的间接免疫组织化学和间接免疫荧光方法,以绵羊肺炎支原体标准血清为一抗,分别以家兔抗山羊Ig G-HRP和家兔抗山羊Ig G-FITC为二抗,对绵羊肺炎支原体阳性肺组织切片及阴性对照组切片进行HE染色、免疫组织化学染色及间接免疫荧光染色,并优化染色条件,以确保组织切片在最佳的条件下进行鉴定。结果显示,本试验所建立的免疫组织化学方法与PCR方法对病样的检出率相符,且高于传统的分离培养法。结果表明,本试验建立的间接免疫组织化学方法和间接免疫荧光方法可用于对临床病例的组织样本检测,具有很强的特异性和可靠性,可直观地观察和探究该病原在机体内的定位、动态分布以及致病机理,以期为临床诊断提供更可靠的方法。     

口疮病毒XC13株的分离鉴定

采用MDBK细胞对西昌市某山羊场疑似患有口疮的山羊病料进行分离培养,经动物回归试验、PCR、遗传进化分析等对分离毒株进行鉴定。结果表明,病料在MDBK细胞上产生致细胞病变;接种病料的山羊出现典型的传染性脓疱;PCR从分离毒株中扩增出F1L基因片段,该基因片段序列与口疮病毒(ORFV)参考株FJ-SL2、FJ-SL1的核苷酸序列的同源性分别为99.8%、99.5%,亲缘关系较近,遗传进化分析处于同一分支上。本研究从疑似口疮病料中成功分离鉴定出1株口疮病毒,遂将其命名为ORFV XC13。     

伪狂犬病病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞的增殖特性

体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,用伪狂犬病病毒感染骨髓间充质干细胞,通过细胞病变观察、毒力测定、PCR及间接免疫荧光试验,评估了伪狂犬病病毒在间充质干细胞内的增殖情况。结果显示,经体外分离培养并鉴定的间充质干细胞感染伪狂犬病病毒后,产生典型的细胞病变;经毒力测定细胞内伪狂犬病病毒的TCID50效价较高;经PCR从间充质干细胞内成功扩增出伪狂犬病病毒的特异性片段;间接免疫荧光试验显示间充质干细胞内分布有特异性荧光。表明,该细胞适应伪狂犬病病毒在其上增殖繁衍,具有作为伪狂犬病病毒致细胞病变机理、潜伏感染及致病等机制平台的潜质。     

类山羊传染性胸膜肺炎诊断和防治的研究——病原诊断

于1987年从甘肃省陇东类山羊传染性胸膜肺炎流行区采取临床可疑的山羊、绵羊病料,进行了一系列病原诊断研究,结果:排除了相关致病因素,如梅迪,维士那,山羊关节炎脑炎(CAE),衣原体及相关致病菌感染和寄生虫侵袭;最终从21例山羊6/6例绵羊病变肺组织中培养分离出支原体13株/4株,分菌率均在60％以上,分离株经初步鉴定后,经英国国际支原体鉴定中心(NCTC)最终鉴定均为绵羊肺炎支原体(M.ovipneumonia);以分离株人工感染健康山羊7只,绵羊3只,结果6/7的山羊,2/3的绵羊于接种后第14天始形成与自然病例相似的病变,并以7/7山羊,2/3绵羊病变肺组织中收回原接种物;以琼脂双扩散,试管凝集反应及间接血球凝集试验进行抗原性研究结果证明,分离株与绵羊肺炎支原体标准株(y—98)具有共同抗原性。从而不仅首次确证了该地本病是由绵羊肺炎支原体所致,且对山羊和绵羊都具有很高的感染率和较强的致病性。     

山羊Viperin基因的克隆与真核表达载体的构建

本研究分离山羊外周血单核细胞,设计引物,采用RT-PCR方法扩增出Viperin基因完整阅读框。经BLAST分析,该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中已有序列的最高同源性均为99%。同时将不同物种(山羊、猪、人、小鼠)的氨基酸序列进行比对分析,发现N端结构域在不同物种间是高变区。然后,将目的基因酶切克隆入真核表达载体pc DNA3.1中构建重组表达质粒。经PCR、酶切和测序鉴定正确的阳性质粒分别被命名为pcDNA-g Vi HA和pcDNA-HAg Vi。使用脂质体Lipofectamine 2 000将重组质粒转染BHK21细胞,使用HA抗体进行间接免疫荧光检测,发现重组蛋白均得到表达,荧光分布于细胞质中;Western-blot结果表明,两个质粒转染后均可检测到分子量约为43 ku的条带。使用内质网标志物Calnexin抗体进行共聚焦检测,发现表达的Viperin蛋白与内质网存在共定位。上述研究结果为进一步研究山羊Viperin的抗病毒作用及其机制奠定了基础。     

波尔山羊卵母细胞和早期胚胎的端粒酶活性

利用端粒重复序列扩增(TRAP)法进行了山羊卵母细胞和附植前胚胎的端粒酶活性的测定;结果表明,山羊卵母细胞和早期胚胎的端粒酶活性都为阳性。TPG定量比较发现,卵母细胞的TPG最低,为25.348U;4-细胞的TPG为273.832U,至8-细胞时,TPG又降低到56.117U,随后快速升高,桑椹胚的TPG为251.111U;囊胚的端粒酶活性最高,TPG为519.46U。     

黄牛输卵管结构的组织学观察

采用冰冻切片HE染色方法对黄牛输卵管各部进行了组织学观察,以为生殖生理学和胚胎工程学等教学和研究工作提供基础资料。结果显示,黄牛输卵管伞和漏斗部为膜性结构,由两侧的假复层纤毛柱状上皮和中央的疏松结缔组织共同构成,没有肌层和外膜。壶腹部和峡部均由黏膜层、肌层和外膜构成。黏膜上皮为假复层纤毛柱状上皮,由柱状纤毛细胞、分泌细胞和基细胞共同构成,固有膜由疏松结缔组织构成,在峡部尚含有浆液性腺泡。黏膜层形成大小不等的初级纵行皱褶。漏斗部和壶腹部的大初级皱褶又分出数量不等的次级皱褶和三级皱褶;峡部只有初级皱褶,无次级皱褶和三级皱褶。肌肉层由内斜、外环两层平滑肌构成。外膜大部分为浆膜结构,在输卵管系膜侧为结缔组织的外膜。     

柔嫩艾美耳球虫DF-1细胞培养体系的建立及应用

为了建立柔嫩艾美耳球虫的鸡胚成纤维传代细胞(DF-1)培养体系,并应用于柔嫩艾美耳球虫子孢子的细胞入侵活力检测,将CFDA-SE标记的子孢子接入DF-1细胞,利用流式细胞仪测定子孢子的细胞入侵活力。比较了37℃和41℃培养温度下,子孢子对DF-1、MDBK、Vero、BHK、MDCK五种细胞的入侵活力。优化了在子孢子入侵活力检测时,DF-1细胞最佳培养条件。结果表明,柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞中可发育为第一代裂殖子。在不同培养温度下,子孢子对DF-1细胞的入侵活力均高于其他细胞。优化后的DF-1细胞培养体系的培养程序为:用含100mL/L胎牛血清的DMEM稀释DF-1细胞,以每孔1×105个细胞铺被24孔板,37℃、50mL/L CO2培养24h后,用含50mL/L胎牛血清的DMEM换液后,每孔接入3×105个子孢子,41℃、50mL/L CO2培养8～12h,收集细胞进行检测。     

绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察

以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织 4例和 3月龄绵羊胎肺 2例作为材料 ,对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液 ,进行了绵羊肺腺瘤病毒 (JSRV)的分离 ,同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明 ,自然感染绵羊肺腺瘤病的 4例病肺组织中都有散在的病毒粒子 ,其直径为 10 0～ 12 5nm ,接种病毒悬液的胎肺细胞从第 2代到第 9代均出现细胞病变 ,但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子 ,而超薄切片透射电镜观察发现了病毒样粒子     

鸭肿头出血症病毒在鸭胚原代成纤维细胞中增殖特性的研究

将鸭肿头出血症病毒(DSHDV)强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚,传3代,取第3代尿囊液接种鸭胚成纤维细胞(DEF),传代培养至有细胞病变出现,并对接毒细胞进行TCID50动态检测和透射电镜观察。结果显示,第1代接毒细胞培养至120 h出现变圆、脱落,并形成少量蚀斑,第2代培养至96~120 h,DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑,第3代培养至72~96 h,DEF出现典型蚀斑;此后可稳定适应于DEF,典型细胞病变出现于72~96 h。DSHDV在DEF上的TCID50值随传代次数的增加而增高,由第1代的102.75增加到第10代的106.82,最高毒价出现于96 h,该点是收获病毒的最佳时间。经透射电镜观察,可见DSHDV粒子呈球形或椭圆形,大小为60~75 nm,无囊膜,具有双层衣壳。结果证实,DSHDV强毒株已经适应了DEF,传代后可获得较高的病毒效价。     

卵丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟及其后续发育的影响

观察了卵丘细胞共培养对小鼠生发泡期部分裸露(PNO)和裸卵(NO)成熟和发育能力的影响;分别用小鼠、大鼠、猪的卵丘细胞与小鼠PNO和NO进行了共培养。检测了小鼠PNO和NO的减数分裂能力、生发泡构型、受精和胚胎发育能力。结果,PNO、NO的减数分裂能力显著(P<0.05)低于卵丘完整复合体(COCs)的减数分裂能力。COCs中SN型卵母细胞比率显著高于PNO和NO中SN型卵母细胞比率(P<0.05),大部分PNO和NO的卵母细胞核型为NSN型。与对照组相比,与小鼠或大鼠卵丘细胞共培养的小鼠PNO和NO的减数分裂能力没有显著提高,但是与猪卵丘细胞共培养却可以提高小鼠PNO和NO的减数分裂能力。结果表明,猪卵丘细胞能促进小鼠卵母细胞的体外成熟,但并不影响小鼠卵母细胞的受精和胚胎发育。     

冬春季莱芜黑山羊松果体功能状态的免疫组织化学比较

应用5-HT免疫组织化学染色法,对冬春两季的莱芜黑山羊松果体进行了观察比较,以探讨松果体与下丘脑垂体-性腺轴的关系。结果显示,莱芜黑山羊松果体内存在大量5-HT阳性的松果体细胞及5-HT纤维;冬季松果体阳性细胞面积及阳性面积比都明显大于春季(P<0.01),平均光密度在冬、春季间无明显差异(P>0.05)。表明莱芜黑山羊松果体的功能活动呈现季节性变化,与羊的繁殖活动关系密切。     

促渗透剂在鸡胚胎免疫中应用的初步研究

选用氮酮和丙二醇作促渗透剂,观察2种渗透剂在气室膜对台盼蓝的促渗透作用及对鸡胚的毒性作用.结果表明,10、20和40 g/L氮酮均有明显的促渗透作用,且其间差异不显著,但随其浓度升高,对鸡胚的毒性作用增强.     

犊牛前脂肪细胞的培养及其增殖与分化模型的建立

选择犊牛小肠网膜、附睾脂肪垫、腹部皮下脂肪组织材料 ,应用原代消化细胞培养法培养细胞。结果 ,由小肠网膜培养出了成分均一、增殖旺盛、分化率高的梭形细胞。经形态学动态变化观察、生长曲线测定、油红O脂肪染色及对胰岛素反应的测定 ,证明为功能活跃的前脂肪细胞 ,并在体外重现了其增殖、肥大的全过程。结果显示 ,小肠网膜脂肪组织存在着功能活跃的可调控的前脂肪细胞     

山羊支气管肺炎的计算机断层扫描影像研究

为了研究山羊支气管肺炎的计算机断层扫描(CT)影像表现,将10只山羊随机分为2组。试验组、对照组各5只,试验组通过气管内注射血清A型多杀性巴氏杆菌标准菌(4×10^8CFU/mL)人工诱发山羊的支气管肺炎,对照组注射等体积无菌PBS;观察接种前、后各组山羊的临床症状、体温及全血白细胞数等指标,并同时在接种前和接种后第1、3、5天对胸部进行CT扫描,比较两组影像学差异,观察山羊肺部病理解剖学变化。结果显示:接种前后体温、全血白细胞数差异显著;对照组CT影像接种前后未见异常;试验组影像多见两侧肺叶中下部呈现大小不等的片状或结节状的类似软组织密度影,边缘不清,肺纹理紊乱且模糊,支气管壁增粗,支气管扩张,呈"树芽征"及"轨道征"。结果表明,经气管内接种巴氏杆菌能够成功诱发支气管肺炎,CT影像与山羊支气管肺炎的临床表现密切相关,对山羊支气管肺炎的诊断具有较好的敏感度,有利于鉴别,应成为其较早期诊断的依据之一。