用多种探针药物评价穿心莲对鸡药物代谢酶活性的影响

采用咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗、奥美拉唑药物探针法,测定这些探针药物在鸡体内的消除半衰期,以探讨穿心莲超微粉对鸡的药物代谢酶的影响,结果显示,对照组和试验组的咖啡因t1/2β分别为632min、415 min,表明两组的t1/2β之间有显著差异(P<0.05).对照组与试验组的氨苯砜t1/2β分别为55.4 min、48.4 min,二者之间差异不显著(P>0.05).对照组和试验组的奥美拉唑t1/2β分别为16.5 min、7.6 min,表明两组的消除半衰期差异极显著(P<0.01);氯唑沙宗t1/2β分别为26.3 min、20.5 min,两组差异显著(P<0.05).结果表明,穿心莲超微粉对CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1和CYP2C19的活性都有诱导作用,但与对照组相比,对CYP3A4的诱导作用差异不显著,而对CYP2C19的诱导作用差异极显著.     

三种不同磺胺类药物对鲤鱼肝细胞色素P450酶系生化指标的影响

在冬季水温(10±1)℃下测定了磺胺嘧啶(SD)、磺胺二甲嘧啶(SM2)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)对鲤鱼的肝微粒体蛋白含量、肝细胞色素P450含量以及酶系活性的影响。采用超速离心法提取鲤鱼肝微粒体,Bradford法测肝微粒体蛋白含量,紫外分光光度法测定CYP450酶系的活性。结果显示,SD、SM2、SMM处理组的CYP450含量、AND活性、AH活性与对照组差异极显著。SD、SM2、SMM处理组会使肝微粒体蛋白含量明显降低,磺胺类药物对AND、AH活性具有显著的抑制作用;对CYPb5含量和ERND活性没有影响。上述研究结果为进一步研究磺胺类药物对探针药物在肝微粒体中代谢的影响提供了依据。     

采用特异性探针药物法对双峰驼CYP1A酶体外活性的测定

为探究双峰驼CYP1A酶体外活性及其对外源性药物代谢的影响,首先采用差速离心法制备双峰驼肝微粒体,并优化其体外孵育体系,然后采用高效液相色谱紫外检测法测定双峰驼肝微粒体孵育体系中CYP1A酶特异性底物非那西丁的代谢产物对乙酰氨基酚的动态含量,并借助Origin Pro8.6软件计算CYP1A酶的动力学参数。结果表明,双峰驼肝微粒体具有良好的酶活性,其蛋白质含量为1.652mg/g±0.341mg/g。经优化后孵育体系的最适宜底物的质量浓度为200μg/mL,最佳肝微粒体的质量浓度为4.95mg/mL,最适宜孵育时间为30min。双峰驼CYP1A酶体外孵育体系的最大反应速度为0.224 6nmol/(min·mg)±0.041 8nmol/(min·mg),米氏常数为5.577 9μmol/L±0.634 2μmol/L,内在代谢清除率为0.080 4(mL·min)/mg±0.023 1(mL·min)/mg。结果表明,本试验通过借助特异性探针药物动力学特征的研究,成功检测了双峰驼CYP1A酶的体外代谢活性。     

氟苯尼考对鲫鱼CYP2E1活性影响的药代动力学评价

采用以氯唑沙宗为底物探针的药代动力学方法研究氟苯尼考对鲫鱼细胞色素P450 2E1活性的影响。试验组鲫鱼每日经口给予氟苯尼考100 mg/kg(按体重给药,下同),连续5 d后,与对照组鲫鱼同时一次性腹腔注射氯唑沙宗10 mg/kg,用高效液相色谱法测定氯唑沙宗在鲫鱼体内不同时间点的血药浓度,并计算药代动力学参数。结果表明,氯唑沙宗在两组鲫鱼体内代谢的药时数据均符合二室模型;与对照组相比,试验组氯唑沙宗的半衰期增加了5倍(P<0.01),药时曲线下面积增加了3.3倍(P<0.01),总清除率减少了83.8%(P<0.01)。提示,氟苯尼考对鲫鱼CYP2E1具有显著的抑制作用。其他药物与氟苯尼考合用时,其有效性和安全性可能会受到影响。     

鸡肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法的建立

为建立鸡肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系活性的测定方法,应用超速离心法提取了12只60日龄依莎公鸡的肝微粒体,采用Bradford法测定肝微粒体蛋白含量,紫外分光光度法测定CYP450酶系活性。结果显示,肝微粒体蛋白含量为11.32 mg/g±1.43 mg/g,CYP450含量为0.71 nmol/mg±0.08 nmol/mg,NADPH细-胞色素C还原酶活性为3.01 nmol/(min.mg)±0.26 nmol/(min.mg),AND活性为2.36 nmol/(min.mg)±0.18 nmol/(min.mg),ERND活性为1.21 nmol/(min.mg)±0.11 nmol/(min.mg),AH活性为0.25 nmol/(min.mg)±0.03nmol/(min.mg)。结果表明,建立的鸡肝微粒体CYP450酶系的检测方法灵敏可靠,重复性较好。     

抗菌新药与疫苗对猪霉形体肺炎的防治效果研究

用氟甲砜霉素等3种抗菌新药及猪霉形体肺炎疫苗对猪肺炎的临床使用方法与防治效果进行了比较.试验结果表明,氟甲砜霉素、普乐健、复方中草药及猪霉形体肺炎疫苗等均能提高试验猪的增重与饲料转化率;普乐健、复方中草药还能显著减轻病猪的症状与病理变化,其防治效果明显优于其他试验组药物.     

双峰驼CYP2J基因的克隆与原核表达载体的构建

CYP2J酶主要参与机体内源性物质代谢,尤其是对花生四烯酸和亚油酸代谢发挥着重要作用。本试验通过克隆CYP2J基因,构建其原核表达载体,为蛋白层面深入研究双峰驼CYP2J酶提供特异性抗体奠定基础。从双峰驼肾组织提取RNA,反转录后PCR扩增出双峰驼CYP2J基因,胶回收纯化后进行TA克隆,连接pMD18-T质粒并转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞中,提取质粒进行HindⅢ和KpnⅠ双酶切和PCR鉴定,并借助上述内切酶双酶切重组质粒pMD18-T-CYP2J后,连接于经同样双酶切处理的原核表达载体pET-32a,转化于大肠杆菌DH5α细胞中,并经HindⅢ和KpnⅠ双酶切、PCR鉴定及测序鉴定重组质粒。结果表明,在重组质粒pMD18-T-CYP2J和pET-32a-CYP2J双酶切电泳中均能得到约1500bp的特异性目的条带及两种质粒的特异性条带。以2种重组质粒为模板进行PCR扩增后电泳均能得到约1500bp的CYP2J特异性条带,测序结果与GenBank中公布的双峰驼CYP2J预测序列的相似度为99%。由此可见,本试验成功构建了双峰驼CYP2J基因原核表达载体pET-32a-CYP2J,为后续该基因的高效原核表达和蛋白层面的研究奠定了基础。     

二氟沙星在鸡体内的药物代谢动力学及生物利用度研究

将 30只艾维茵肉鸡随机分为 3组 ,进行了静脉注射、肌肉注射及内服二氟沙星的药物代谢动力学研究。血浆样品经甲醇沉淀血浆蛋白 ,高速离心 ,用反相高效液相色谱法测定鸡血浆中二氟沙星的浓度 ,MCPKP计算机程序处理血浆药物浓度 时间数据。结果 ,健康鸡静脉注射给药的药时数据适合二室开放模型 ,主要药物代谢动力学参数为 :t1/ 2α=0 .6 9h± 0 .4 3h ;t1/ 2 β=6 .11h± 1.5 0h ;V1=1.70L/kg±0 .33L/kg ;Vd(area) =3.10L/kg± 0 .6 7L/kg ;ClB=0 .37L/ (kg·h)±0 .10L/ (kg·h) ;AUC =2 9.16 μg/ (mL·h)± 8.0 4 μg/ (mL·h)。健康鸡肌肉注射及内服给药的药时数据适合一级吸收一室模型 ,前者的主要药物代谢动力学参数为 :t1/ 2Ka=0 .17h± 0 .12h ,t1/ 2Ke=5 .6 4h± 0 .74h ,tmax =0 .86h± 0 .4 0h ,Cmax =2 .5 1μg/mL± 0 .36 μg/mL ,AUC =2 2 .6 2μg/ (mL·h) ± 3.2 8μg/ (mL·h) ,F =77.0 %± 11.8% ;后者的药物代谢动力学参数为 :t1/ 2Ka=1.4 6h± 1.0 0h ,t1/ 2Ke=8.2 0h± 3.12h ,tmax=4 .34h± 2 .4 0h ,Cmax=1.0 0 μg/mL± 0 .2 1μg/mL ,AUC =15 .82 μg/ (mL·h) ± 3.6 7μg/ (mL·h) ,F =5 4.2 %± 12 .6 %。二氟沙星在健康鸡体内的主要药物代谢动力学特征为 :表观分布容积大     

沃尼妙林在猪体内的生物利用度及药代动力学研究

选用体重20kg左右的大×长二元健康阉公猪8头,按双周期、双交叉试验设计,进行静脉注射及内服沃尼妙林(10.5mg/kg)的药代动力学研究。采用液相色谱-串联质谱法测定猪血浆中沃尼妙林的浓度,用3P97药代动力学程序处理血浆药物浓度-时间数据。结果,健康猪静脉注射给药的药时数据适合一级吸收二室模型,主要药代动力学参数为:t1/2α=0.21h±0.07h,t1/2β=3.09h±1.09h,Vd=3.64L/kg±0.43L/kg,CLB=0.83L/(kg·h)±0.29L/(kg·h),AUC=12.93mg/L·h±4.57mg/L·h。健康猪内服给药的药时数据适合一级吸收一室开放模型,主要药代动力学参数为:t1/2ka=0.76h±0.05h,t1/2kel=2.19h±0.31h,tmax=1.70h±0.04h,Cmax=1.35μg/mL±0.06μg/mL,AUC=7.34mg/L·h±0.52mg/L·h,F=56.62%±3.75%。结果表明,沃尼妙林在健康猪体内的药代动力学特征是:内服吸收迅速,血药浓度达峰时间短,药物峰浓度高,绝对生物利用度较高,但有效血药浓度维持时间短,药物消除较快。     

环丙沙星在霉形体性肺炎猪体内的组织药代动力学研究

将21头健康杜洛克×长白×大白杂交猪复制成霉形体性肺炎模型后,分别肌肉注射环丙沙星(5.0 mg/kg)进行组织及血浆药代动力学研究。结果显示,环丙沙星在感染猪肺中的浓度-时间数据适合一级吸收二室开放模型,外观正常肺与外观实变肺的主要参数分别是:t1/2Ka为0.19和0.46 h,t1/2α为2.68和2.52 h,t1/2β为8.12和6.87 h,tmax为1.10和1.47 h,Cmax为6.00和4.46μg/g,AUC为38.65和33.33mg/(L.h),Tcp(ther)为57.10和50.59 h。气管、支气管组织中的药物浓度-时间数据适合一级吸收一室开放模型,主要参数分别是:t1/2Ka为0.56和0.38 h,t1/2ke为5.68和5.67 h,tmax为2.08和1.60 h,Cmax为3.73和2.62μg/g,AUC为39.44和26.10 mg/(L.h),Tcp(ther)为50.60和47.16 h。表明,环丙沙星对霉形体性肺炎猪呼吸道组织具有良好的穿透性,组织药物浓度明显高于血浆药物浓度,且消除缓慢。     

二甲苯对小鼠卵巢组织损伤的研究

为了研究二甲苯对小鼠卵巢组织的损伤作用,以健康成年SD雌性小鼠作为实验动物,分3个试验组(低、中、高剂量组)和1个对照组,试验组腹腔注射不同剂量(按体重0.125、0.25、0.5mL/kg)的二甲苯,对照组每天腹腔注射生理盐水。采用石蜡切片和HE染色技术观察二甲苯染毒后小鼠卵巢组织结构的变化;采用分光光度法测定小鼠卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,二甲苯染毒导致小鼠卵巢发生萎缩,中、高剂量组的卵泡内都有黑色颗粒,且随二甲苯剂量的增加其病理变化更加明显;中、高剂量组卵巢组织的SOD活性与对照组相比显著下降,而MDA含量显著升高。证实,二甲苯对卵巢组织具有明显的损伤作用,且表现出明显的剂量效应。     

乐果亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶浓度及细胞色素P450亚型表达量的影响

对6周龄雄性Wistar大鼠5次灌胃给予20%LD_(50)的乐果,观察给药后大鼠的毒性反应,每日测定实验鼠采食量、饮水量和体重。最后一次给药后第24 h,采用丁酰硫代胆碱法测定大鼠红细胞、血清和脑组织中的胆碱酯酶浓度,并采用定量RT-PCR法检测大鼠肝中细胞色素P450基因8个亚型的表达量。结果表明,大鼠用药后不同时间内出现了有机磷药物中毒的典型症状,其采食量、饮水量和体重明显下降,红细胞、血清和脑组织中胆碱酯酶浓度均明显低于对照组,肝细胞色素P450的8个亚型中CYP2B1/2的表达量明显高于对照组。     

高铜日粮对生长猪中脑和下丘脑中儿茶酚胺类含量的影响

选用断乳仔猪45头,随机分为3组,每组5个重复,每个重复3头,采用完全随机化设计进行生长试验,研究了不同添加水平(5、125、250mg/kg)的硫酸铜日粮对猪下丘脑及中脑儿茶酚胺类物质分泌的影响。结果,日粮中添加125mg/kg(P<0.01)、250mg/kg(P<0.05)硫酸铜均显著提高了中脑、下丘脑多巴胺含量,但是随着铜水平的提高,多巴胺含量呈下降趋势;中脑黑质去甲肾上腺素浓度在试验组与对照组之间有显著差异,并且随着铜浓度的提高有升高趋势。据此推断,高剂量铜可能通过调节中枢儿茶酚胺代谢,促进生长激素的分泌进而促进动物生长。     

巴马香猪超前免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的免疫效果评价

为了评价高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(JXA1-R)对仔猪超前免疫的免疫效果及安全性,给3头巴马香猪超前免疫弱毒疫苗JXA1-R 1头份/头,以3头同窝仔猪为对照组,接种等量疫苗稀释液,观察疫苗免疫后的临床表现,测定疫苗免疫后的抗体动态变化及排毒情况;免疫后第35天,采用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JXA1)攻毒,测定攻毒后的抗体变化、排毒情况及免疫保护作用。结果表明,巴马香猪超前免疫后第14天发生抗体阳转,鼻拭子样品、肛门拭子样品和血清样品中均检测到病毒核酸,同居的阴性对照组中有1头仔猪发生抗体阳转,提示该疫苗存在排毒现象。攻毒前免疫组和对照组的抗体阳性率分别为3/3和1/3;攻毒后免疫组和对照组的免疫保护率分别为3/3和1/3,表明该疫苗具有一定的免疫保护作用,但初生巴马香猪超前免疫后表现生长缓慢,被毛粗乱,提示该疫苗对仔猪具有一定的毒力,不适合用作超前免疫。     

姬松茸水溶性粗多糖对镉中毒小鼠血液指标的影响

为观察姬松茸水溶性粗多糖对镉中毒小鼠血液系统的影响,将60只SPF级雄性健康小白鼠随机分为对照组、模型组、试验组1、试验组2和试验组3共5组,模型组与3个试验组采用同一水平镉染毒,但同时对3个试验组给予不同剂量的姬松茸水溶性粗多糖溶液进行保护,试验日程为5周,试验结束时对各组小鼠采血,检测各项血液指标。结果显示,模型组小鼠的血液指标红细胞数(RBC)、血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比容(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血色素浓度(MCHC)显著低于对照组的相应指标;与模型组相比,给予高剂量姬松茸水溶性粗多糖的试验组3的血液指标RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC均显著提高,而白细胞数(WBC)、小型白细胞数(Lym)和中型白细胞数(Mid)则显著下降。证实,重金属镉能够损伤小鼠的血液系统,但高剂量姬松茸水溶性粗多糖对镉的损伤具有防止作用。     

玉米赤霉烯酮对小鼠免疫器官的毒性作用

采用腹腔注射给药方式研究了玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对小鼠免疫器官的毒性作用。结果表明,连续6d注射25mg/kgZEA后,试验小鼠的胸腺指数与对照组相比显著降低(P0.05),胸腺明显萎缩,胸腺细胞出现典型的凋亡峰,脾指数降低但与对照组差异不显著(P0.05),脾淋巴细胞未见典型的凋亡峰;单次注射50mg/kgZEA48h后,胸腺细胞和脾淋巴细胞均发生细胞周期阻滞,均显著阻滞于细胞周期的G2/M期;连续3d注射50mg/kgZEA后,小鼠胸腺和脾出现病理性变化,表现为胸腺皮质减少,髓质增多,脾白髓萎缩,局灶性坏死等。证明ZEA对小鼠胸腺和脾有明显的毒害作用。     

胸膜肺炎放线杆菌感染对猪血液生化指标的影响

将24头健康DLY仔猪按性别、体重随机分为2组,采用鼻腔喷雾法分别接种生理盐水(对照组)和含3.8×107 CFU/mL胸膜肺炎放线杆菌(APP)的稀释液(试验组),研究了APP感染对猪血液生化指标的影响。血液生化指标由Airone-200RA全自动生化分析仪检测。结果显示,与对照组猪相比,试验组猪血清中TP含量略有升高(P>0.05),GLB含量极显著升高(P<0.01),ALB含量、A/G值极显著下降(P<0.01);ALT、AST活性升高,其中AST活性升高极显著(P<0.01),而LT/ST值下降显著(P<0.05);IBIL、TBIL浓度及IB/DB值极显著升高(P<0.01),DBIL浓度略有下降(P>0.05);BUN、CRE浓度均略有升高(P>0.05);GLU浓度、AKP活性极显著下降(P<0.01),Ca浓度及Ca/P值极显著下降(P<0.01),P浓度显著升高(P<0.05)。结果表明,胸膜肺炎放线杆菌感染引起了猪严重的肝功能代谢障碍,血糖和血钙显著下降,肾排泄负荷增加。     

豆类丝核菌次级代谢产物对小白鼠胎儿的致畸作用

将妊娠的雌鼠随机分为5组,分别灌胃给予生理盐水、10 mg/kg环磷酰铵(CP)及高、中、低剂量豆类丝核菌次级代谢产物(苦马豆素含量分别为56.62、14.15、3.54 mg/kg),临产前剖腹取出胎鼠,将1/2胎鼠用茜素红染色做骨骼畸形观察,另1/2胎鼠用Bouins染色做内脏畸形检查,研究豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠胎儿的致畸作用。结果显示,3个剂量组孕鼠增重、外观畸形率、骨骼畸形率、内脏畸形率与空白对照组均差异不显著(P>0.05),而与CP阳性对照组均差异极显著(P<0.01)。表明,在此剂量和条件下,豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠无明显母体毒性,对胎鼠无发育毒性和致畸作用。     

应用BALB/c小鼠评价口蹄疫灭活疫苗的免疫效力

用不同剂量的口蹄疫灭活疫苗免疫3组雌性BALB/c小鼠,同时设空白对照组,每组8只。免疫后每7 d采血一次,用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)检测血清抗体水平;第28 d用800LD50同源强毒攻击,攻毒后36 h,每组随机选取3只BALB/c小鼠,采全血,分别用每只BALB/c小鼠全血注射12只乳鼠,每组共注射36只乳鼠,以乳鼠试验判定BALB/c小鼠的病毒血症和攻毒保护情况。结果表明,免疫组BALB/c小鼠均可产生特异性抗体,保护率分别为75.0%、63.9%、36.1%;对照组小鼠血清抗体为阴性。提示,BALB/c小鼠可以用来评价口蹄疫灭活疫苗的免疫效力。