猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的抗原性分析

猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的制备国内外都曾有过报道,但对用作诊断抗原的猪囊尾蚴排泄分泌蛋白的抗原性的研究较少。我们应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫电泳(IE)对猪囊尾蚴排泄分泌蛋白进行了分析,并用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)评价了其抗原性。(一)材料与方法1.材料:(1)粗制囊液抗原:从新鲜囊尾蚴中抽取,3500r/min离心30分钟,保留上清液,低温存放。(2)排泄分泌抗原:48、96、105、204小时的囊尾蚴孵育液:48、96、105的头节孵育液,均     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原研究——六钩蚴排泄分泌抗原、原头节、囊液及囊壁抗原的二维电泳分析

应用二维电泳、考马斯亮蓝G-250染色对细粒棘球绦虫六钧蚴排泄分泌抗原、原头节、绵羊及牦牛棘球蚴囊液以及囊壁抗原进行了初步分析。结果5种抗原分别显示多肽斑点108、64、85、124及83个;其中特异斑点分别为44、40、46、87及37个。对六钩蚴ES抗原多肽斑点的分析尚属首次。     

分泌抗细粒棘球蚴囊液抗原McAb杂交瘤细胞株的建立

用羊肝囊液纯化抗原免疫BALB/c鼠,取鼠脾细胞与SP2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化培养,获得3株分泌McAb的杂交瘤细胞株1D_3、3H_(11)和9E_(11)。3株McAb均属IgG_1亚类,能与人源和羊源的细粒棘球蚴囊液抗原反应,不与细颈囊尾蚴、肝片吸虫、脑包虫或弓形虫抗原反应。腹水中抗体的IHA最高效价可达2~(-13)。杂交瘤细胞经冻存、复苏和连续传代培养,分泌抗体性质稳定。     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节、囊壁、囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头绦虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律。结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达到峰值，一直持续到试验结束；免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试验结束时抗体效价仍维持在较高水平。原头节可溶性抗原免疫组和原头节ＥＳ抗原免疫组血清抗体总体水平要高于囊壁和囊液抗原免疫组，原头节ＥＳ抗原和原头节层析纯化抗原的敏感性、特异性要高于囊壁和囊液层析抗原。试验表明，以上４种抗原可用于ＥＬＩＳＡ检测绵羊免疫及感染后的抗体应答反应。     

弓形虫速殖子排泄分泌抗原的SDS－PAGE分析

弓形虫速殖子排泄分泌抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析马军武，杜重波，张德林，李惠萍（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）弓形虫速殖子排泄分泌抗原（Ｅ／ＳＡ）是虫体在入侵宿主细胞及细胞内外增殖游离过程中向血液、体液或培养上清液释放的可溶性抗原成份（Ｃｈ...     

猪囊虫特异抗原的提取和应用的研究

将细颈囊尾蚴和棘球蚴的粗抗原超免家兔,从抗两种粗抗原的兔血清中提取γ球蛋白与CNBr活化的Sepharose 4B偶联制成免疫吸附柱进行亲和层析,排除猪囊虫粗抗原中与细颈囊尾坳和棘球蚴的共同抗原,得到纯化的猪囊虫特异抗原SACC。用SACC进行斑点试验(DIA)诊断猪囊虫病,结果表明,SACC不仅具有较强的特异性(99.62％),而且其敏感性(98.30％)与粗抗原的敏感性(98.86％)比较也没有明显降低。经免疫电泳分析也证明SACC是猪囊虫的特异性抗原。     

减压分馏提纯囊液抗原

为了提高囊虫病猪的诊断符合率和降低错诊率,曾采用硫酸铵盐析法、葡聚糖凝胶过滤法、电泳分离法和液氮冷冻法提纯囊液抗原,但在炭凝诊断上均未取得满意效果。而减压分馏法(真空分馏法)提纯的囊液抗原,其炭凝反应的敏感性、特异性都有显著提高。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立——体外免疫法制备免疫脾细胞

作者用纯化弓形虫速殖子可溶性抗原体外免疫BALB/C小鼠的正常脾细胞与小鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ABC—ELISA和IHA筛选和3次克隆化培养后获得了1株分泌抗弓形虫单克隆抗体的杂交瘤细胞(E5)。E5杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体经琼脂双扩散免疫试验确定为IgGl亚类抗体。单克隆抗体的抗原吸收试验结果证明E5单克隆抗体为抗弓形虫特异性抗体。E5杂交瘤细胞的染色体数目为92～108,经连续30代传递培养和4个月冻存复苏试验证明其分泌特异性单克隆抗体的性能相当稳定。初步证实E5单克隆抗体针对一种弓形虫的共同抗原成份。     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原研究——六钩蚴排泄分泌抗原的免疫原性

本实验应用体外培养方法制备细粒棘球绦虫六钩蚴排泄分泌(ES)抗原,将其与弗氏不完全佐剂乳化后免疫绵羊2次,最后一次免疫后2周每只试验绵羊攻击1000枚虫卵,攻击后7个月剖杀试验羊观察肝肺包囊寄生情况。结果表明六钩蚴ES抗原具有很好的免疫原性,诱导的免疫保护力(减囊率)达96.04％;混合抗原为93.39％,囊液抗原为76.21％,囊壁抗原为30.62％。免疫后试验羊的抗体滴度与免疫保护力之间存在正相关关系。     

羊脑多头蚴抗原的二维电泳分析

对自然感染绵羊的脑多头蚴原头节可溶性抗原、囊壁可溶性抗原和囊液抗原经二维电泳分析，原头节可溶性抗原共显示７９个多肽斑点，其中酸性多肽斑点２６个，中性多肽斑点５个，碱性多肽斑点４８个；囊壁可溶性抗原共显示５９个多肽斑点，其中酸性多肽斑点２０个，中性多肽斑点４个，碱性多肽斑点３５个；囊液抗原共显示５５个多肽斑点，其中酸性多肽斑点２４个，中性多肽斑点５个，碱性多肽斑点２６个。三种脑多头蚴抗原共同多肽斑点３个，原头节可溶性抗原和囊壁可溶性抗原共同多肽斑点１４个，原头节可溶性抗原和囊液抗原共同多肽斑点５个，囊壁可溶性抗原和囊液抗原共同多肽斑点５个     

伊氏锥虫排泄分泌抗原特异性成分分析

伊氏锥虫排泄分泌抗原特异性成分分析谢超孙恩贵刘俊华王祥生（解放军农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）伊氏锥虫排泄分泌抗原（ＥＳＡ）是伊氏锥虫在繁殖阶段所释放的代谢产物。近年来的研究表明，锥虫ＥＳＡ在抗感染中起着重要作用，而且在一定程度上对宿主有免...     

马立克氏病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得分泌抗鸡马立克氏病病毒(MDV)gE囊膜糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,将pGEX-6P-1表达的重组蛋白gE作为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,共筛选获得4株能够稳定分泌抗MDV gE蛋白抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚型鉴定结果表明,4株均为IgG1型,轻链为κ链。间接免疫荧光结果显示,4株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能特异性识别MDV,并具有一定的中和活性。本研究对MDV诊断、抗原表位分析及鉴定等具有重要的应用价值。     

人工感染猪囊尾蚴的组织结构观察

为了解成熟猪囊尾蚴的组织结构,进一步研究其特异性抗原定位,对猪带绦虫病患者用槟榔、南瓜子驱虫,采集虫卵,人工感染猪,收集新鲜猪囊尾蚴,石蜡切片,HE染色后进行了光镜观察,并用胆汁法翻出头节,超薄切片,进行了透射电镜观察.光镜观察表明,囊尾蚴有2个囊腔,较小的囊腔包括头节和颈节,较大的囊腔包括囊壁和囊液,囊壁外层具有绒毛,并有宿主结缔组织的成分;电镜观察表明,翻出头节的囊尾蚴除与已报道的未翻出头节的囊尾蚴结构相同外,最突出的特点是神经索和排泄管并行,石灰小体呈板层状.     

应用凝胶盘状电泳和ELISA分析肌旋毛虫抗原

本试验是应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE),分析肌旋毛虫抗原的组分,并用ELISA检测盘状电泳蛋白带的抗原活性,制备纯化的蛋白质抗原,实验结果证明,PAGE纯化分离的主要血清学相应抗原为Ag-OI,经ELISA检测水平达到0.7微克/毫升,比Ag-O(粗制)抗原的灵敏度提高7倍,比Ag-G(经Sephadex G200柱层析提取)抗原的灵敏度提高3倍。为寻求诊断用的敏感特异的抗原成份,提供了实验依据。     

弓形虫排泄分泌抗原研究的新进展

简要介绍了弓形虫排泄分泌抗原的制备及其组分,对近几年国内外排泄分泌抗原在免疫功能及应用方面的研究进展加以综述,并对其在疫苗研制上的成果和前景进行了探讨,旨在为弓形虫病疫苗的研制提供参考。     

应用纯化抗原对流免疫电泳技术诊断马脑脊髓丝虫病的研究

马脑脊髓丝虫病是由指状丝虫(Setaria digitata)的童虫引起的疾病。本病对马匹危害严重。关于免疫学诊断方法,国外至今未见报道,国内已报道的方法有皮内试验和直接凝集试验等。但都出现不同程度的假阳性和假阴性结果。许多研究表明,在丝虫科各虫种之间及丝虫与其它线虫之间存在共同抗原成分。Dissanayake等应用牛腹腔指状丝虫成虫冷浸液提取物作为诊断人班氏丝虫病的抗原,高桥顺治等应用犬恶丝虫成虫冷浸液提取诊断人班氏丝虫病的特异抗原,都取得了满意结果。我们在应用对流免疫电泳技术诊断本病的研究中亦发现成虫冷浸抗原(粗抗原)能与许多健马血清发生反应,假阳性率高达     

反复接种甲醛或乙酰乙撑亚胺(AEI)灭活口蹄疫疫苗的牛对病毒感染相关(VIA)抗原的免疫反应

Cowan和Gravee(1966)曾描述过被口蹄疫病毒感染的组织中出现一种群特异性抗原。这种抗原可能是在感染过程中产生的,不是病毒的结构成份,故称之为VIA抗原。然而,Rowlands等学者(1966)报告说VIA抗原可能是病毒结构成份。     

三种绦虫蚴囊液抗原的SDS-PAGE分析

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对绵羊棘球蚴囊液和原头节抗原分析结果表明，前者共有多肽带１９条，其中６６和５９ｋｕ多肽带为主带；后者共有多肽带２９条，缺乏主带成分。这两种抗原在多肽组成和含量方面差异明显。绵羊细颈囊尾蚴囊液和脑多头蚴囊液抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，前者共有多肽带１５条，其中主带成分为６６，５９，４０和１２．５ｋｕ多肽带；后者共有多肽带１３条，其中６６，４０和１２．５ｋｕ多肽带为主带。三种绦虫蚴囊液抗原之间的共有成分为９４，６６，５９，４３和４０ｋｕ多肽带。棘球蚴囊液的４２，３４．５，３３和２４．５ｋｕ多肽带组分也为细颈囊尾蚴所共有，而５５，５２，４１，３９，３８．５，１４ｋｕ以及１条分子质量小于１０ｋｕ的多肽带为棘球蚴囊液的特异性组分     

绵羊绦虫蚴囊液的SDS─PAGE分析

由于绵羊棘球蚴囊液（EgCF）取材相对方便具有较强的抗原活性，是诊断棘球蚴病抗体的较好抗原，但因EgCF成分复杂，在免疫诊断中有时与其它绦虫蝴病抗体发生免疫交叉反应。为查明绵羊棘球蚴和其它绦虫蚴抗原组分的异同，本文在分子水平上比较了细粒棘球蚴囊液细颈囊尾蚴囊液（CtCF）和多头蚴囊液（CcCF）可溶性蛋白多肽的异同。（一）材料与方法1.样品的制备：（1）EgCF：无菌抽取自然感染绵羊肝脏棘球蚴包囊液，5000r／min离心20min，取上清，PEG浓缩至1／10，蒸馏水透析除盐，经紫外吸收法测定其蛋白含量为2.4mg／ml，分装，-20°…     

近年来衣原体研究的进展

随着分子生物学技术的迅速发展,研究者们开始从亚细胞及分子水平来研究衣原体,从而大大提高了人们对衣原体的认识。本文就近年来在衣原体研究中的进展情况作一简要介绍。 (一)单克隆抗体在衣原体抗原结构研究和诊断中的应用 1982年Stephens等建立了能分泌沙眼衣原体单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,并结合微量免疫荧光试验证实衣原体存在着属、种、亚种和型特异性抗原。在这些抗原特性的研究中发现:属特异性抗原的化学成份为脂多糖(LPS),对热稳定,用蛋白酶K处理不能破坏其与特异性抗体的反应,而用过碘酸钠处理则能阻止这种反应。种和亚种特异性抗原成