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91.
为了分析评价细粒棘球绦虫重组蛋白EG95(rEG95)在血清抗体检测上的效果,以细粒棘球绦虫EG95重组质粒pGEM-EG95为模板,经PCR扩增后将目的片段亚克隆至pET-28a(+),构建重组表达载体pET-EG95,在大肠杆菌BL21中表达,SDS-PAGE分离和电洗脱纯化重组表达产物rEG95。建立重组蛋白间接ELISA方法,检测绵羊带绦虫蚴病血清抗体水平。结果表明,表达产物经SDS-PAGE测定分子质量为21ku左右。该蛋白可被棘球蚴病阳性血清特异性识别,表明该表达产物具有反应原性。应用该重组蛋白间接ELISA检测18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、20份棘球蚴感染绵羊血清,24份疫苗抗原rEG95免疫羊血清和来自棘球蚴病疫区的179份绵羊血清,其阳性检出率分别是66.67%、80.00%、100%、91.67%和58.2%,而14份健康羊血清反应为阴性,组间差异有一定统计学意义(P<0.05)。表明EG95蛋白可作为绵羊带绦虫蚴病共同保护性抗原和诊断抗原而加以应用。 相似文献
92.
为了在大肠杆菌中表达猪札幌病毒VP1基因,并以纯化的重组蛋白为抗原建立猪札幌病毒血清抗体ELISA检测方法。采用RT-PCR技术扩增VP1基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,再将所克隆的衣壳蛋白的编码序列亚克隆到表达载体pET-28a(+)中,将成功构建的原核表达质粒pETSAVCAP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。用纯化的VP1蛋白作为抗原建立了猪札幌病毒血清抗体间接ELISA检测方法并初步用于临床样品的检测。结果显示,猪札幌病毒VP1基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达,Western-blot分析表明该重组蛋白具有良好的反应原性。经对反应条件进行优化,确定间接ELISA的抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,且不与其他常见猪病的阳性血清发生交叉反应,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。通过对从多个省份收集的490份猪血清样品进行检测,阳性率为65.31%。表明,以大肠杆菌表达的猪札幌病毒VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可以用于猪札幌病毒抗体的检测。 相似文献
93.
为快速检测鸭疫里氏杆菌,以纯化的兔抗1型鸭疫里氏杆菌抗体作为捕获抗体,以纯化的鸭疫里氏杆菌单克隆抗体作为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法。最佳的方案为用184ng/孔纯化的多抗包被过夜,100mL/L小牛血清37℃封闭2h,检测抗原、单抗、酶标抗体均为37℃作用1h,显色20min后终止反应,D450nm值高于0.330且P/N>2.1判定为阳性。该方法特异性强,与禽源巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌无交叉反应,最低检测剂量为104 CFU/mL。与传统细菌分离方法相比,该方法的敏感性为100%,符合率为85.2%。本研究首次建立了检测鸭疫里氏杆菌的双抗体夹心ELISA方法,且特异、敏感。 相似文献
94.
免疫荧光及双抗体夹心ELISA在人狂犬病检测中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨免疫荧光和双抗体夹心ELISA在人狂犬病检测中的应用。方法4例临床诊断狂犬病死亡患者的大脑、小脑、脑干、海马,分别于冰箱和甲醛固定后保存,用上述方法检测。感染狂犬病毒CVS株的鼠脑组织和急性胰腺炎死者脑组织分别作为阳性和阴性对照。结果-70℃保存的人脑和阳性对照狂犬病毒均为阳性,甲醛固定的人脑和阴性对照均为阴性。结论免疫荧光和双抗体夹心ELISA可用于人狂犬病检测,但脑组织要低温保存,不能用甲醛固定。 相似文献
95.
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98.
99.
为建立一种能够区分口蹄疫疫苗免疫与野毒感染动物的快速检测方法,将纯化的口蹄疫病毒3AB非结构蛋白抗原包被在硝酸纤维素膜上,加入待检血清样品后,利用胶体金标记SPA显色。应用斑点免疫金渗滤技术(DIGFA)和ELISA方法同时对150份猪血清进行检测,结果DIGFA法的阳性率为6%(9/150),ELISA法的阳性率为5.3%(8/150),两者符合率达99.3%。DIGFA操作简单,耗时短,结果易于判断,且与口蹄疫免疫猪血清、猪细小病毒、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应。结果表明,该法适用于生猪和牛等口蹄疫病毒3AB抗体的快速检测。 相似文献
100.
采用Dot-ELISA检测猪瘟母源抗体消长规律和4种猪瘟免疫程序的免疫效果.结果,在7、14、21、28和35日龄时,猪瘟母源抗体阳性率分别为80.0%、60.0%、33.3%、13.4%和6.7%,其抗体效价几何平均值(GMT)分别为188、169、159、140和135.4种免疫程序的猪瘟抗体检测结果为,超前一次免疫和超前二次免疫2倍量猪瘟单价苗,在6月龄时,其抗体阳性率分别为85%和80%,GMT分别为1105和185.20日龄首免2倍量猪瘟单价苗后,60日龄二免2倍量猪瘟-猪肺疫-猪丹毒三联苗,在60日龄和6月龄时,抗体阳性率分别为90.0%和87.0%,GMT分别为1135和1103.28日龄首免猪瘟单价苗,70日龄加免三联苗,免疫1和2头份组在65日龄时,阳性率分别为78.0%和92.0%,6月龄时分别为73.0%和86.0%.结果表明,免疫2头份比1头份的效果好,4种免疫程序的效果都较理想. 相似文献