用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲型标准毒株（ＡＴＣＣＶＲ－２３３２）的ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７的序列,设计合成了一对引物２６３７４ＰＳ／２６３７５ＰＲ,用反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术对６株ＰＲＲＳＶ北京分离株进行了检测。结果该引物对６株病毒均能扩增出与预期大小相符的ＲＴＰＣＲ产物,并与ＡＴＣＣＶＲ２３３２株扩增产物的大小相当,而欧洲型标准毒株（ＬＶ株）未获扩增片段。进一步用限制性内切酶进行酶切分析,发现这６株病毒及ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的ＰＣＲ产物皆出现相同的限制性酶切图谱,证实６株病毒均为ＰＲＲＳＶ。     

逆转录-聚合酶链反应诊断IBDV的免疫后感染

用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对5个养鸡场的13份病死鸡腔上囊、腺胃标本进行了检测,诊断为免疫后感染传染性腔上囊病毒(IBDV),经检测这些病例多为超强毒株和变异株的感染.     

致羔羊脑炎粪肠球菌PCR检测方法的建立和应用

根据肠球菌的保守tuf基因设计引物,以致羔羊脑炎粪肠球菌基因组DNA为模板,扩增出了与设计大小相一致的112 bp的基因片段,成功地建立了检测致羔羊脑炎肠球菌的PCR方法.确立的PCR反应最佳条件为:复性温度55℃,Mg2+浓度2.5 μmol/L,最佳反应模式为95℃5 min;94℃30 s,55℃30 s,72℃30 S,35个循环;最后72℃延伸10 min,于4℃结束反应.该方法能检测DNA的最小量为10 fg.应用该方法对分离的致羔羊脑炎粪肠球茵、由肠球菌导致发病或死亡羔羊脏器以及人工感染死亡小鼠的主要脏器进行扩增,均能得到特异性的DNA条带;对其他7种病原菌,马腺疫链球菌C群、G群链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌、羊源李氏杆菌、绵羊布氏杆菌、绵羊肺炎支原体不能扩增出特异的DNA条带.     

牛CD14结构基因的PCR扩增及序列分析

在用牛肺巨噬细胞构建了ｃＤＮＡ基因文库的基础上，参照人和小白鼠ＣＤ１４的基因序列设计一对引物，用ＰＣＲ方法成功地扩增出编码牛ＣＤ１４的特异性ＤＮＡ片段，并进行了序列分析。结果表明，牛ＣＤ１４基因的核苷酸在相同区域内与人ＣＤ１４的同源性为７９％，推导氨基酸序列的同源性为７３％；而与小白鼠的核苷酸和氨基酸的同源性分别为７５％和７１％。无论在核苷酸还是氨基酸水平上，牛ＣＤ１４基因与人ＣＤ１４的同源性都要高于与小白鼠的同源性。     

鹌鹑源性成分PCR检测方法的建立

根据GenBank中的鹌鹑线粒体DNA(mtDNA)12sRNA基因保守序列,用Primer5.0软件设计了1对针对鹌鹑的特异性扩增引物,建立了一种检测鹌鹑动物源性成分的PCR方法.通过聚合酶链式反应(PCR)从鹌鹑肉和鹌鹑肉骨粉样品中扩增到了235 bp的目的片段,而参考物种鸽、鸡、鸭、鹅、鸵鸟、鹧鸪、牛、羊、马、驴、鱼和空白对照则无目的片段,说明该引物只对鹌鹑有特异性.测序结果表明,鹌鹑组织PCR产物的核苷酸序列与GenBank中检索到的相应序列相吻合;该方法的检测灵敏度为1 g/kg.     

云南大麻DNA的提取及检测初步研究

目的探讨云南大麻DNA的提取及检测方法。方法运用改进的SDS微量法提取大麻总DNA,对所得DNA进行PCR检测。结果用所筛选到的大麻引物检测了云南大麻的DNA遗传标记特征,图谱清晰,结果稳定。结论本方法能有效提取并检测大麻DNA,为实现大麻的品种鉴定、遗传多态性研究及来源追踪提供有价值的科学依据。     

死后不同时间大鼠心肌膈肌β肌动蛋白mRNA的检测

目的探讨死后不同时间心肌和膈肌β肌动蛋白mRNA(β-actin mRNA)的降解变化。方法大鼠断颈处死后置于21℃的温度控制系统,采用RT-PCR技术检测大鼠心肌和膈肌组织-βactin mRNA在死后即刻至12d的变化,并对电泳图像进行半定量分析。结果在死后即刻,以及保存2,4,6,8,10,12d的大鼠心肌组织样本中均可检测到β-actin mRNA,而膈肌组织仅在死后即刻和保存2,4,6d的样本中检测到-βactin mRNA;-βactin mRNA的扩增产物在死后12d内呈下降趋势。结论RT-PCR技术检测大鼠心肌和膈肌组织中的β-actin mRNA,其在死后12d内的降解呈现一定规律。     

利用aroA基因建立鸡传染性鼻炎PCR诊断方法

利用aroA基因设计了1对引物,分别对10株标准副鸡嗜血杆菌(HPG)菌株、14株分离的HPG菌株进行PCR扩增,结果均得到了与预期大小一致的片段,而对10株非HPG菌株和3株病毒进行扩增则无相应片段产生;该PCR能检测出10个菌细胞.与常规PCR方法相比,aroA-PCR的敏感性更高.