大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct值的线性关系,并建立推断早期死亡时间的线性回归方程。结果随死亡时间的延长,3种组织内β-actin mRNA的水平均发生了显著的下降,心肌和肾组织中β-actin mRNA死后24h内的降解速率更显著,而脑组织中β-actin mRNA的降解速率变化不明显。各组织的Ct值变化与死亡时间之间存在一定的线性关系。结论大鼠死亡早期脑、心肌和肾组织内β-actin mRNA降解明显,可以通过其降解规律来推断早期死亡时间。     

大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的 研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标.方法 大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct...     

大鼠死后视网膜细胞mRNA降解与死亡时间的关系研究

目的检测死后大鼠视网膜细胞mRNA的降解和死亡时间(PM I)的关系,为死亡时间推断提供新方法。方法应用复合荧光RT-PCR技术,检测死后不同时间(2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28h)大鼠视网膜细胞β-actin、Pgk1和Rp l 4 mRNA水平,以立即处死大鼠作为对照。方差检验比较组间差异,并对所得数据进行回归分析。结果死后28h内,大鼠视网膜细胞β-actin、Pgk1、Rp l 4 mRNA水平均随死亡时间的延长而下降。3个管家基因mRNA的降解与死亡时间的线性拟合回归方程分别为:Yβ-actin=-4436.205Xβ-actin+127581.7(r2=0.976),YPgk1=-1993.884XPgk1+57651.54(r2=0.973),YRp l 4=-1189.791XRp l 4+34533.46(r2=0.955)。结论大鼠死后视网膜细胞mRNA的含量随着死亡时间的延长而逐渐降解,与死亡时间具有相关性。     

根据mRNA稳定性推断死亡时间的研究

目的检测大鼠肺、胸肌β肌动蛋白(β-actin)mRNA在死后不同时间的表达,为死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠断颈处死后于21℃温度控制系统模拟死后改变,在不同时间点抽提相应组织总RNA,利用RT-PCR技术检测β-actinmRNA的表达水平变化并对扩增产物进行半定量分析。结果大鼠肺β-actinmRNA于死后12d仍可检出,胸肌在死后8d的检测呈阴性。β-actinmRNA在肺脏和胸肌的稳定性呈现器官差异性和时间差异性。结论观察死后肺、胸肌β-actinmRNA的变化,可为死亡时间推断提供客观依据。     

应用RNA分析技术推断现场血痕形成时间

目的检测血痕中β-actin mRNA和18S rRNA在人体死后8～15d期间的表达残留,为推断血痕形成时间寻找新的客观依据。方法在上述时段内每天抽提血痕总RNA,利用实时定量RT-PCR技术监测18S rRNA和β-actin mRNA的扩增状况并对产物进行定量分析,通过检测18S rRNA与β-actin mRNA含量在各个时间点的变化趋势来推测血痕形成时间。结果死后8～15 d时段内18S rRNA与β-actinmRNA量的比值呈明显升高趋势,显示出两种不同类型RNA降解的时间差异性。结论一定时段内18SrRNA与β-actin mRNA量的相对变化,可作为推测血痕形成时间的参考指标。     

死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性研究

目的研究死亡大鼠看家基因mRNA时序性降解的组织差异性,评价其用于死亡时间推断的价值。方法SD大鼠20只分为死后0、1、3、5、7d共5组,脊椎脱臼法处死大鼠,提取大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织,在相应时间段提取RNA,应用一步法RT-PCR技术检测各组织中看家基因GAPDHmRNA和β-actinmRNA的水平,Vilber凝胶图像分析系统测定扩增产物IOD值,SPSS10．0统计软件对数据进行方差分析。结果GAPDHmRNA、β—actinmRNA扩增产物相对灰度与积分光密度值随死后经过时间的延长而逐渐减小,且与死亡时间显著相关,大鼠脾脏和脑组织GAPDHmRNA和β-actinmRNA在死后5d内可检出,心脏和肾脏在死后3d内可检出,而肝脏和肺脏GAPDHmRNA和β-actin mRNA降解较快,仅在死后1d内可检出。结论脑组织和脾脏中mRNA稳定性较好,适用于PMI特别是晚期PMI的推断。除环境温度外,环境湿度也是死亡时间推断中的重要影响因素。     

大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白降解规律的初探研究

目的探讨大鼠死后心肌和肺脏微管蛋白（tubulin）的降解规律与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克处死后，置于RXZ智能型人工气候箱内，实验条件设定为：20℃恒温，湿度50％。分别于大鼠死后0、1、2、3、5和7d时剖取心肌和肺脏组织，应用Western-Blot法检测心肌和肺脏tubulin的含量，并对所得数据进行统计学分析。结果Tubulin在正常大鼠心肌和肺内高表达，死后1d时其含量已开始下降，至死后7d时仍可检测到微管蛋白的存在，但tubulin在肺脏内的降解速度快于心肌。两种组织内tubulin含量随PMI变化的回归方程及相关系数分别为：心肌Y=-1726．Ix＋14083，r=0．9684；肺脏Y=-1439．89x＋12041，r=0．9808。结论大鼠死后心肌和肺脏tubulin的含量逐渐减少，与PMI具有相关性。     

蛋白质降解与死亡时间推断的初步研究

目的观察大鼠肝脏肌动蛋白、微管蛋白在死后不同时间的降解情况,为死亡时间的推断寻找客观依据。方法大鼠麻醉致死后置于21℃温度控制系统模拟死后18d的改变,在不同时间点剪取肝脏组织抽提蛋白质,利用westernblot技术检测肌动蛋白、微管蛋白的降解变化并对产物进行半定量分析。结果大鼠肝脏肌动蛋白在死后8d尚可检测,死亡10d后检测不到;在死后2d,α微管蛋白已检测不到,但可检测到β微管蛋白,死亡4d后,β微管蛋白也检测不到。结论肌动蛋白、微管蛋白的死后降解存在差异,其在肝脏组织保存时间的不同可作为死亡时间推断的参数。     

大鼠死后肌动蛋白降解与死亡时间的相关性

目的观察大鼠死后不同时间心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌肌动蛋白（actin）的降解规律,为晚期死亡时间（postmortem interval,PMI）的推断寻找客观指标。方法28只SD大鼠随机分为7组,经机械性窒息致死后．分别置于20℃恒温箱内,于0、24、48、72、96、120和168h后剖取以上器官,应用免疫印迹技术检测各组织内actin的含量,SPSS11．5软件对所得数据进行方差分析。结果大鼠死后上述各器官actin含量均随PMI的延长而逐渐下降,与PMI相关,决定系数（R2）均在0．75以上。但actin在上述各器官内的降解速度有显著差异（P〈O．05）,在脑组织中降解速度最快,其余依次为肺、脾、肝、肾、心肌和骨骼肌。结论尽管大鼠死后心肌、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌actin的降解规律具有组织差异性,但是actin在上述组织中的含量变化与PMI相关．有助于较晚期PMI的推断。     

大鼠死后脑组织RNA降解与死亡时间推断的研究

目的探讨SD大鼠死后脑组织中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)mRNA、18s rRNA含量的比值与死亡时间(PMI)的关系。方法SD大鼠处死后分别置于15℃、20℃环境中,采用TRIzol试剂提取SD大鼠在死后即刻、1、2、3、5、7d时脑组织中的总RNA,采用RT-PCR方法与凝胶图像分析技术检测18s rRNA和GAPDH mRNA的含量,并将二者的比值(GAPDHmRNA/18s rRNA)与PMI进行统计学回归分析。结果SD大鼠死后脑组织中GAPDH mRNA在2d时降解不明显,但到3、5、7d时降解程度显著增加,且随着温度的升高,降解速度增加;而18S rRNA降解缓慢,直到7d仍无显著性降解变化,且降解速度几乎不受温度的影响。对GAPDHmRNA/18s rRNA值(Y)与PMI(X)进行回归相关分析:20℃时,Y=0.62-0.004X(R=-0.981,P<0.001);15℃时,Y=0.965-0.001X(R=-0.709,P<0.001)。结论SD大鼠死后脑组织中GAPDHmRNA和18s rRNA基因的相对稳定性即GAPDHmRNA/18s rRNA值与PMI存在明显相关性。     

RT-PCR检测不同时间大鼠皮肤切创TGF-β_1mRNA表达

目的 探讨TGF-β_1mRNA在不同时间的表达变化及其与伤后经过时间的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别对大鼠生前0.5h、1h、3h、6h、12h、48h、72h、96h、168h和死后0.5h、1h、3h的皮肤切创组织中的TGF-β_1mRNA表达变化进行检测,采用ID软件对凝胶扫描的数据进行密度分析。结果 TGF-β_1mRNA在生前皮肤切创后0.5h上升,3h开始急剧升高,48h含量达到峰值;死后皮肤切创未见TGF-β_1mRNA的表达。结论 大鼠皮肤切创TGF-β_1mRNA的表达具有时间相关性,RT-PCR是检测细胞因子在基因水平表达的灵敏方法。     

小鼠肝组织GAPDH mRNA降解与死亡时间关系

目的探讨小鼠在不同的死亡方式下肝组织管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)mRNA降解与死亡时间(postmortem interval,PMI)的关系。方法将60只NIH小鼠分别采用窒息法和断颈法处死,分别置于10℃和25℃温控系统内,利用两步法RT-PCR技术和核酸蛋白测定仪检测小鼠肝组织中GAPDH mRNA在死后0～48h的降解情况。结果在10℃温控系统内的小鼠死后0～48h及25℃温控系统内的小鼠死后0～36h肝组织均可检测到GAPDH mRNA,且其扩增产物呈规律性下降趋势。结论小鼠死亡后肝组织GAPDH mRNA降解与PMI呈负相关,可为PMI推断提供一种新的观测指标。     

电击死兔骨骼肌及心肌HSP70 mRNA和c-fos mRNA表达

目的 研究电击死兔骨骼肌与心肌HSP70 mRNA和c-fos mRNA-表达变化。探究生前电击与死后电击的鉴别方法。方法 15只新西兰兔,随机分电击死组、死后电击组和对照组,每组5只,用荧光RT-PCR技术检测骨骼肌与心肌热休克蛋白70（HSP70） mRNA与c-fos mRNA表达水平,对所得结果进行统计学分析。结果 生前电击兔骨骼肌及心肌HSP70 mRNA与c-fos mRNA表达高于死后即刻电击者（P〈0．05）。结论 检测骨骼肌及心肌HSP70 mRNA与c-fos mRNA表达变化有助于于生前电击与死后电击的鉴别。     

死后血浆和溶血样本中IgE的稳定性

目的探究死后血浆和溶血样本中免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)经过不同保存条件及冻融处理后的稳定性。方法选取39例死后48h内非冷冻尸体的心血样本,其中20例取血浆样本,19例取全血制成溶血样本。将样本置于-20℃、4℃、25℃条件下保存28d及-80℃条件下保存1年以探究IgE在不同保存条件下的稳定性。利用5次反复冻融处理样本探究死后血浆及溶血样本IgE的冻融稳定性。应用电化学发光法检测处理前后血浆和溶血样本中IgE的浓度。结果血浆样本中IgE在-20℃、4℃、25℃3种保存条件下的降解率接近,28d后降解率均值在15%左右,相同条件下溶血样本中IgE降解速度快于血浆(P<0.05),并且在25℃条件下降解率高于另外两种(P<0.05)。血浆样本于-80℃冷冻保存1年后的浓度与冷冻前相比差异无统计学意义(P>0.05),而溶血样本在-80℃冷冻保存1年后浓度有所降低(P<0.05)。死后血浆和溶血样本在反复冻融5次后检测结果与冻融前相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论死后血浆及溶血样本中IgE具有良好的冻融稳定性。IgE在死后血浆样本中的稳定性优于溶血样本,因此在实际案例中建议及早分离血浆保存待测。     

小鼠死后脑RNA降解与死亡时间的相关性

目的 探讨小鼠死后不同时间和温度下脑组织β-actin mRNA、18S rRNA的降解规律与死亡时间的关系.方法 将24只健康成年C57BL/6小鼠随机分为2组,每组12只,断颈法处死后分别置于不同的环境温度中(4℃、37℃),恒定环境湿度为80%.分别于死后即刻和0.5、2、6、24、48h取小鼠脑组织进行总RNA...     

失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白死后降解的检测

目的探讨失血性休克大鼠肝肾脾细胞微管蛋白含量变化与死亡时间（PMI）的关系。方法大鼠经切断股动脉致失血性休克死亡后，分别于死亡即刻和死后1、2、3、5和7d剖取脾脏、肝脏及肾脏组织，应用western—blot技术检测微管蛋白含量，SPSS11．5软件对结果进行统计学分析。结果大鼠肝肾脾细胞内微管蛋白含量随PMI的延长而逐渐降低，至死后7d仅可见很淡的微管蛋白印记谱带，其中微管蛋白在肝脏内降解速率最快。3种组织内微管蛋白含量变化的同归方程及相关系数（r）分别为：肝脏Y=-2221．1X＋14844，r=0．9823；脾脏Y=-1871．1X＋11344，r=0．9749；肾脏Y=-1878．1X＋13715，r=0．9629。结论大鼠死后肝肾脾细胞内微管蛋白降解规律与PMI之间具有相关性，并存在组织差异性。     

不同死因大鼠心肌内多种RNA相对表达量变化与PMI的关系

目的观察不同死因下大鼠心肌内多种RNA相对表达量随死亡时间（PMI）的变化。方法建立断颈死、窒息死和失血性休克死大鼠模型,提取心肌中总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde～3-phosphatedehydrogenase,GAPDH）,β-肌动蛋白（β-actin）、诱导型-氧化氮合酶（induciblenitricoxidesynthase。iNOS）、缺氧诱导因子-1（hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1）、肿瘤坏死因子-d（tumornecrosisfactor-d,TNF-a）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）tuRNA以及U6微核RNAfU6sreallnuclearRNA。U6snRNA）的循环阈值,观察各指标相对表达量随PMI的变化情况。结果U6snRNA表达稳定,可作为内对照。在死亡早期,CAPDH、HIF-1、iNOS、TNF-d和IL-6的相对表达量在窒息组和失血性休克组比断颈组呈现不同程度的增加,而β-actin在3个组皆呈现相对表达量下降趋势。在死亡晚期,随着RNA的不断降解,相对表达量持续下降。结论死后各RNA相对表达量的特征性变化可为不同死因下的PMI推断提供-定的参考。     

大鼠多器官能量物质变化与死亡时间的联系

目的检测大鼠死后不同器官能量物质的改变情况,探讨死后能量物质的变化规律.方法用高效液相色谱检测死亡发生24h内不同时间点大鼠腓肠肌、心肌、肝脏组织中ATP、ADP和AMP的含量.结果发现腓肠肌中ATP随死亡时间的延长迅速下降,到死后8h基本检测不到或微量检测出;心肌、肝脏中组织中ATP含量受死亡方式影响大.ADP在整个检测时间点均能检测到,AMP的含量变化无规律.结论通过高效液相对磷酸腺苷的检测,显示24h内大鼠腓肠肌、心肌和肝脏组织中的ATP含量变化与死亡时间的联系,可为法医学死亡时间推断提供一种新的、客观的参考依据.     

大鼠多器官能量物质变化与死亡时间的联系

目的检测大鼠死后不同器官能量物质的改变情况,探讨死后能量物质的变化规律.方法用高效液相色谱检测死亡发生24h内不同时间点大鼠腓肠肌、心肌、肝脏组织中ATP、ADP和AMP的含量.结果发现腓肠肌中ATP随死亡时间的延长迅速下降,到死后8h基本检测不到或微量检测出;心肌、肝脏中组织中ATP含量受死亡方式影响大.ADP在整个检测时间点均能检测到,AMP的含量变化无规律.结论通过高效液相对磷酸腺苷的检测,显示24h内大鼠腓肠肌、心肌和肝脏组织中的ATP含量变化与死亡时间的联系,可为法医学死亡时间推断提供一种新的、客观的参考依据.     

大鼠多器官能量物质变化与死亡时间的联系

目的检测大鼠死后不同器官能量物质的改变情况,探讨死后能量物质的变化规律。方法用高效液相色谱检测死亡发生24h内不同时间点大鼠腓肠肌、心肌、肝脏组织中ATP、ADP和AMP的含量。结果发现腓肠肌中ATP随死亡时间的延长迅速下降,到死后8h基本检测不到或微量检测出;心肌、肝脏中组织中ATP含量受死亡方式影响大。ADP在整个检测时间点均能检测到,AMP的含量变化无规律。结论通过高效液相对磷酸腺苷的检测,显示24h内大鼠腓肠肌、心肌和肝脏组织中的ATP含量变化与死亡时间的联系,可为法医学死亡时间推断提供一种新的、客观的参考依据。