新型粉末状荧光502熏显手印荧光波段研究

目的运用新型粉末状荧光502可一步显现非渗透性光滑客体表面潜手印。为了选择最佳的激发光源和滤光镜来观察熏显后荧光效果,本文对该粉末的荧光性能进行研究。方法使用荧光光谱仪对新型粉末状荧光502进行激发光谱和发射光谱的测试,进而选择合适的激发光源及滤光镜来进行观察和拍照。结果新型粉末状荧光502的光谱范围较宽,在波长为235nm~580nm范围内均可进行激发,具有广谱性,其中对波长在530nm附近的激发光具有最大峰值,即荧光强度最大,对450nm和360nm附近的光也具有很高的吸收峰值,斯托克斯偏移量为45nm。宏观验证实验表明,在仪器分析所得的范围内,显现出的手印效果均较好。结论运用该粉末在熏显手印后可以在紫外、紫光、蓝光、黄光、绿光范围内进行激发,斯托克斯偏移大,荧光亮度高,在观察荧光效果时能够很好的消除背景荧光的干扰,也便于选择滤光镜。手印荧光效果除了受到熏显物质荧光性能的影响外,还与激发光源的品质、滤光片的透过性能以及检材固有的发光特点、客体表面性质有关。     

AChE、BChE、PON-1和FOS mRNA在甲拌磷急性中毒致死大鼠脏器中的表达

目的通过对甲拌磷急性中毒致死大鼠脏器中乙酰胆碱(ACh E)、丁酰胆碱(BCh E)、对氧磷酶1(PON-1)和原癌基因蛋白(FOS)m RNA的表达研究,筛选出表达变化有统计学意义的脏器和中毒相关基因,探讨其在死亡原因推断中的价值。方法健康成年雌性SD大鼠,随机分为空白对照组和急性中毒死亡组,分别取心、肝、肺、脑和肠,提取总RNA,加入目的基因ACh E、BCh E、PON-1、FOS和内标基因β-肌动蛋白(β-actin)引物逆转录成c DNA后,利用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测各组c DNA的相对表达量的变化,并对各组结果进行统计学分析。结果肝脏中ACh E、BCh E和FOS m RNA的表达均上调(P0.05),ACh E m RNA在肺和脑中的表达均下调(P0.05)。结论肝脏和ACh E分别可以作为甲拌磷急性中毒致死的靶器官和基因表达标志,能为今后急性甲拌磷中毒的临床诊断与死亡推断提供依据。     

荧光免疫标记抗体法测定血痕ABO血型

目的探讨采用荧光免疫标记抗体法测定血痕血型的可行性和优点。方法根据抗原抗体特异性结合的原理,首先对抗A、抗B单克隆抗体进行荧光标记,然后使荧光标记抗体与相应抗原(血痕)在最佳条件下结合,最后荧光显微镜镜检,判定血痕的血型。结果采用该方法测定血痕的血型结果准确、灵敏度高、操作简单、检验时间短。结论该方法可以作为一种测定血痕血型的检验方法使用。     

陈旧性骨骼DNA提取技术的研究

对陈旧性骨骼建立一个高回收率并能除去 PCR 反应抑制物的提取 DNA 的方法。采用 CTAB 法提取 DNA。结果显示,该方法不但能有效去除 PCR 抑制物,而且对水泡、火烧、土埋以及10年左右的骨骼所提取的 DNA 均能成功地进行荧光标记 STR 多基因座扩增检验。实验表明,该方法稳定,重复性好,适合陈旧骨骼标本的 DNA 提取。     

猪PD-1分子及其配体的实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据猪程序性死亡因子PD-I及其配体PD-LI和PD-L2的基因序列,分别设计了特异性引物和TaqMan探针,以10倍系列稀释的重组质粒pMD-PD-1、pMD-PD-L1和pMD-PD-L2为标准品,对实时荧光定量PCR的条件进行优化,以建立定量检测这3个基因的方法.结果表明,建立的方法在1×10~2～1×10~8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系(r~2>0.99),扩增效率均高于96%,可检测至少100 copies的阳性标准品.利用该方法对猪外周血单核细胞中这3个基因的表达情况进行了检测,结果也表明该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可应用于临床样品的检测.     

串联型黄色荧光蛋白表达载体的构建及其在柔嫩艾美球虫中的瞬时表达

为了探索黄色荧光蛋白(YFP)在柔嫩艾美球虫子孢子中的瞬时表达情况,以柔嫩艾美球虫的组蛋白4(Histone4,H4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列为元件构建了串联型YFP重组转染载体pH4-YFP-YFP-ACT。将构建的载体经电穿孔法转染柔嫩艾美球虫子孢子,并在MDBK细胞中进行培养。结果显示,在荧光显微镜下可以观察到黄色荧光。提示,串联型YFP可以在柔嫩艾美球虫中瞬时表达。     

牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank中牛CD80和CD86基因的序列,在保守区设计并合成各自的特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立一种检测牛共刺激分子CD80和CD86的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将CD80基因和CD86基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,CD80基因、CD86基因和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108 copies/μL范围均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。证实,所建立的牛共刺激分子CD80和CD86荧光定量RT-PCR检测方法适用于临床样品的检测。     

脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞核因子κB的表达

通过研究脂多糖(LPS)诱导奶牛子宫内膜上皮细胞核因子κB亚单位P65蛋白mRNA的表达变化,从细胞水平深入探讨子宫内膜炎的发病机理。将奶牛子宫内膜上皮细胞传代培养,采用1、10、50、100、1000μg/mL五个浓度梯度的LPS刺激子宫内膜上皮细胞,MTT法筛选最佳刺激浓度;以上述最佳刺激浓度刺激细胞,于0、0.5、1、2、4h后收集细胞,荧光定量RT-PCR检测p65 mRNA的表达差异性。结果显示,100μg/mLLPS为最佳刺激浓度;LPS刺激1h组p65 mRNA的表达极显著(P0.01)高于其他时间组;2h组显著(P0.05)高于0、0.5和4h组;0.5和4h组显著(P0.05)高于0h组。结果表明,LPS可诱导奶牛子宫内膜上皮细胞NF-κB的激活,LPS介导的NF-κB信号通路存在于奶牛子宫内膜上皮细胞中,并参与子宫内膜炎发病机理的调控。     

猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立一种检测猪γ-干扰素(IFN-γ)的荧光定量RT-PCR方法,针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A(CyPA)的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针,以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18-T-CyPA为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR检测,并构建猪IFN一γ mRNA和CyPA的荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明,建立的方法在1×101～1×107copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数r2均高达0.999,扩增效率均高于99.0%;可检测至少为100 copies的阳性标准品.该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点,可应用于临床样品的检测.     

耐环丙沙星沙门菌marA、soxS和ramA基因以及外排泵基因acrA和acrB的表达水平分析

应用实时荧光定量PCR法对11株鸡源环丙沙星诱导耐药沙门菌和11株人源临床环丙沙星耐药沙门菌的调控基因marA、soxS、ramA和外排泵基因acrA、acrB的mRNA表达水平进行了检测和分析.结果表明,11株诱导株与诱导母株相比,marA、soxS、acrA和acrB的mRNA表达量均显著增加(P＜0.05),ramA表达量未增加;11株人源临床耐药株与标准菌株相比,marA、acrA和acrB的表达量显著增加(P＜0.05),soxS和ramA的表达量未增加.提示,鸡源诱导株AcrAB过表达与marA和soxS过表达相关;人源临床株AcrAB过表达与marA过表达相关,而与soxS和ramA表达不相关.