龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细包悬液,配制0．05g／mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0．15、0．25、0．5、1．0、2．0μL染色液,考察最佳染色浓度;争别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分驯佥测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果1001μL细胞悬液加入0．5止0．05g／mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫工色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无归显抑制（P〉0．05）。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法刚于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。     

应用微生物菌群鉴定阴道分泌液

目的探究特异性存在于阴道分泌液中的微生物菌群。方法收集阴道分泌液16份、唾液样本16份、粪便样本16份、精液样本8份、外周血样本8份、尿液样本5份及鼻腔分泌液样本4份,对卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、惰性乳杆菌和阿托波氏菌的16S r RNA基因进行扩增,PCR产物采用3130xl型遗传分析仪进行检测。结果卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、惰性乳杆菌和阿托波氏菌在阴道分泌液中的检出份数分别为15、5、8、14和3份。卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌特异性存在于阴道分泌液中。结论检测卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌对鉴定阴道分泌液具有潜在的应用价值。     

FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验

目的建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法。方法收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEPX SpectrumOrangeTMY SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增。结果荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞。捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%。随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低。30个精子检出率最高,为95%。结论激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验。     

运用微量DNA检验技术为侦查破案提供证据

随着社会的不断发展,犯罪形式呈现出了高科技、高素质的特点,现场物证微量DNA在案仕侦破中起着举足轻重的作用。微量DNA检验技术所具有的精确打击的特点可以给犯罪分子以强大震慑,同时也在实际侦查办案中起到了强有力的支撑作用。但是犯罪现场勘查中是否能发现具有关键价值的微量物证,微量物证发现后能否得到有效提取,检验人员是否能合理评估并选择正确的提取方法等,     

显微捕获技术结合低体积扩增技术在混合唾液斑检验中的应用

显微捕获技术联合应用低体积扩增技术,建立一种分离混合唾液斑的口腔上皮细胞,并获得DNA分型的方法。方法:制备模拟混合唾液斑,利用显微操作捕获细胞技术捕获口腔上皮细胞,将捕获的细胞直接放置到安利快得玻片反应位点上,加PK孵育,然后加入PCR反应混合物进行反应。结果:利用该方法捕获一个口腔上皮细胞12次,可以成功分离模拟混合唾液斑中的两名供者的DNA分型。得出显微捕获技术联合应用低体积扩增技术对混合唾液斑类检材有重要意义的结论。