用Y-STR单倍型推断男性个体来源的分析

目的 利用17个Y-STR单倍型数据,推断分析浙江绍兴地区男性个体来源,为Y-STR数据库的建设与应用提供依据.方法 采集绍兴地区6县(市)区,104个镇(乡),1240个村的138个姓氏家族的7384份男性个体血样.采用YfilerTM复合扩增试剂盒进行17个Y-STR分型,所得数据进行县(市/区)/镇(乡/街道)/村/姓氏的组合和县(市/区)/镇(乡/街道)/村/姓氏/单倍型组合分布情况统计分析.结果 在7384份男性样本中,获得2 486种县(市/区)/镇(乡/街道)/村/姓氏组合,4957种县(市/区)/镇(乡/街道)/村/姓氏/单倍型组合,3149种Y-STR单倍型.其单倍型出现的次数从1至52次不等,其中仅出现1次的有2 471种(78.47％).对出现频率为17～ 52次的单倍型数据进行姓氏分析,发现平均有71.0％ (42.9％ ～87.5％)的人员来自同一姓氏,且在地域上多数为相邻镇或村的同姓人员.结论 利用Yfiler系统的17个Y-STR基因座单倍型数据,可以推断浙江绍兴地区男性个体的地域或姓氏来源.     

单细胞检验技术用于混合上皮细胞的分离和检验

目的建立单细胞显微捕获联合低体积扩增技术,用于混合上皮细胞检材分离检验。方法取5名男性口腔上皮细胞拭子浸泡液30μL,分别滴加到5份含同一女性皮肤表皮细胞拭子上,制成5份混合上皮细胞样本为实验组,同时制备同样的5份样本为对照组。实验组样本采用显微捕获单个口腔上皮细胞,并使用低体积扩增技术进行扩增;对照组用M48纯化试剂盒提取DNA,Identifiler试剂盒复合扩增,扩增体系为10μL。所有产物均用ABI 3130遗传分析仪进行STR分型。结果 5份实验组样本均得到男性STR分型结果,5份对照组样本则均仅得到混合分型结果。将该方法应用于1例强奸杀人案例检验,取得了满意效果。结论单细胞显微捕获联合低体积扩增技术可用于混合上皮细胞样本的分离检验。     

激光捕获显微分离技术在DNA检验中的应用研究

目的建立一套显微细胞捕获技术用于法医学生物检材DNA检验方法。方法使用VeritasTM LCM激光捕获仪,采用紫外加红外的捕获方式,对框架覆膜玻片上经苏木素染色口腔上皮细胞进行捕获,采用改良硅珠法提取细胞DNA,使用Identifiler TM试剂盒在5μL体系中进行PCR扩增。结果成功获得20个口腔上皮细胞的13个以上完整STR基因座分型谱带。结论本研究建立的方法适合法医学生物检材制成的染色涂片上细胞的DNA检验。     

30个中低突变Y-STR基因座复合扩增体系的建立

目的建立30个中低突变Y-STR基因座的复合扩增体系,并对其性能进行评估。方法采用六色荧光标记技术,选择30个中低突变率、中高多态性的Y-STR基因座自行设计引物,进行复合扩增和毛细管电泳检测。检测该体系的准确性、特异性、灵敏度和耐受性,并观察其在混合检材的分型情况。结果采用本体系,分型结果准确稳定、特异性好、耐受性强,灵敏度达0.0625ng,混合检材在1:4的比例下,可获准确分型。结论本研究建立的30个Y-STR基因座的复合扩增体系分型结果良好,对于中国人群的法医Y-STR数据库建设和群体遗传学研究具有重要意义。     

中国汉族人群17个Y-STR基因座突变情况分析

目的 调查分析17个Y-STR基因座等位基因突变的情况.方法 收集中国汉族人群867对父子共1 649份男性血样本.采用YfilerTM复合扩增试剂盒进行17个Y-STR基因座分型,共检测出14 739次等位基因传递,统计各基因座发生等位基因突变的频率.结果 在17个基因座中发现涉及13个基因座共41次突变,其中一步突变40次(97.6％),两步突变1次(2.4％);突变共涉及40对父子,其中39对仅1个基因座发生突变(97.5％),1对同时有2个基因座发生突变(2.5％);平均突变率为2.8×10-3(95％CI 2.0～3.8×10-3).等位基因突变时获得重复单位数19次,丢失重复单位数22次,两者比例接近.结论 中国汉族人群Y-STR基因座突变可涉及多数基因座,突变率在2.8×10-3左右,在数据库的建立与应用中应重视,注意采用相关方法进行甄别.     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

PALM结合低体积扩增技术在混合斑检验中的应用

目的PALM系统联合应用低体积扩增技术,建立一种提取混合斑中精子DNA的分型方法。方法利用PALM切割捕获理想检材的精子细胞,将捕获的细胞直接放置到低体积扩增玻片的反应位点上,裂解细胞之后进行PCR扩增。结果20个精子细胞8次分型中,7次分型结果完全正确。10个精子细胞8次分型中,4次分型结果完全正确。1个精子细胞8次分型中,出现位点的基因座均在10个以上。将该方法应用于两例实际案例的混合斑检材,取得了满意效果。结论联合运用PALM系统和低体积扩增技术对混合斑检材中的精子细胞检验具有重要意义。     

DYS448基因座分型缺失分析

目的调查分析DYS448基因座分型缺失,为法医学提供有意义的数据。方法收集中国汉族5487名无关男性个体血样,其中4479份样本用Y-filerTM试剂盒,1008份样本应用Yfiler PlusTM试剂盒进行复合扩增,所有样本应用AGCU Y-24试剂盒复核;统计DYS448基因座出现基因分型缺失的概率。结果在5487名无关个体的Y-STR数据中,观察到35个个体的35种单倍型中DYS448基因座分型出现缺失,其中2个样本在其它基因座位同时出现多谱带。结论 DYS448基因座分型缺失率为0.637%,在Y-STR数据库与父系鉴定应用中应予以关注。     

龙胆紫染色法在显微捕获单细胞分离技术中的应用

目的建立用于显微捕获单细胞技术的龙胆紫染色法并评价其应用效果。方法制作20枚口腔拭子脱落细包悬液,配制0．05g／mL龙胆紫染液。取100μL口腔细胞悬液加入0．15、0．25、0．5、1．0、2．0μL染色液,考察最佳染色浓度;争别染色5、10、30、60min,考察最佳染色时间;用最佳条件染色后抓捕3个细胞,采用联合LV-PCR技术扩增并进行DNA分驯佥测,进行重复试验20次,并对同一检材未经染色的抓捕细胞进行检测,用于比对STR分型成功率。将龙胆紫染色法用于案例检材的口腔上皮细胞分离检验。结果1001μL细胞悬液加入0．5止0．05g／mL龙胆紫染液,染色5min,胞核呈紫工色,与胞浆对比明显;染色时间延长不影响染色效果及细胞分离检验结果。优化后的龙胆紫染色法对低体积扩增无归显抑制（P〉0．05）。应用此染色法于案例检材,胞核标识清晰,STR分型结果达同一认定标准。结论龙胆紫染色法刚于细胞核的发现,有助于提高显微捕获单细胞技术的检测效能。     

混合斑精子DNA分析的研究进展

对混合斑的检测分析．一直是法医学特别关注和急需解决的难题之一。文章综述了各种提取和扩展方法在混合斑检测中的应用进展、分析比较了诸多研究方法．并对混合斑中精子DNA分析的应用前景和结果评价进行了评议。