Asia 1 型口蹄疫病毒多表位基因的设计及其在毕赤酵母中的表达

为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VPl基因的5个抗原表位.采用Insight Ⅱ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求.将合成的多表位基因按设计的酶切位点进行酶切连接,构建了Asia 1型FMDV VP1双拷贝基因重组质粒(pMD18-dVP1Asia).从该重组质粒获得dVP1Asia基因,与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-dVP1Asia.用BglⅡ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌.经筛选、鉴定,成功获得了表达FMDV多表位VP1蛋白的阳性重组酵母茵.该阳性重组酵母茵经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白.Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别Asia 1型FMDV抗体,且具有很好的反应原性.     

从“物必自腐而后虫生”谈起

“物必自腐而后虫生”，是一条具有深刻哲理的古训。以疾病为例，人体生病固然是由于病菌、病毒的作用，但更是因为自身肌体出现了问题。病菌、病毒是客观存在，而且十分厉害，但在抗茵、抗毒能力强的肌体中它们却很难生存。相反，如果肌体免疫力、抵抗力降低．病菌、病毒便会乘虚而入、滋生繁衍，从而导致疾病的发生。     

广东省新兴县鸭圆环病毒感染的PCR诊断及序列分析

根据已发表的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)序列,合成了1对检测引物.利用此对引物对广东省新兴县发生的疑似圆环病毒感染的患病番鸭的肝、胰腺、心、肾、脾、肺、血液、腔上囊、胸腺、哈氏腺、粪便和羽毛进行了PCR扩增.结果显示,获得了与预期619 bp大小相符的DNA片段,经测序确认其为DuCV特异序列,证实鸭群感染了鸭圆环病毒.然后,再设计了2对引物从鸭组织提取的DNA中扩增出2条片段,拼接校对后获得了全基因组序列,并对其进行了分析.结果表明,在感染鸭体内各组织器官中都有DuCV存在,该株病毒基因组序列全长为1 988 bp,与部分已登录GenBank的DuCV同源性高达97.0%以上.     

传染病成部分嫌犯“护身符”

扶弱是中华民族的传统美德。但在弱势群体中有这么一类人,他们把身患艾滋病、肺结核、病毒性肝炎等传染病视为＂护身符＂,以司法部门不宜对其羁押为由逃避法律制裁,甚至肆无忌惮地传播病毒。由于现行机制的不健全,司法机关在追究这一特殊群体的犯罪行为时往往束手无策。     

China Goes All Out to Ward off H1N1 Flu

AFTER its debut in late March, A/H1N1 flu soon spread from Mexico and the .U.S. to more than 30 coun-tries and regions worldwide, including China＇s mainland and Hong Kong, causing global alarm and prompting a flurry of precautions. By April 27 the World Health Organization had raised its pandemic alert level from Phase 3 to 4, and only two days later, to the second place register on the scale.     

猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法.用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应.该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验.用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%.另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%.表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重.     

PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR鉴别方法的建立

根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法.用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性.应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、14、21 d分别采集全血,检测结果均为阳性.证实,本试验所建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株.     

与禽流感病毒赛跑

2008年11月28日,当中科院院士饶子和等人的论文寄到英国<自然>杂志社时,19岁的福建女孩黄燕清还在北京打工.虽然生活拮据,但她是个爱美的姑娘. 论文在两个月后刊出了.此时,黄燕清的生命已经逝去,"凶手"是一场突如其来的疾病--禽流感.恶名昭著的H5Nl高致病性禽流感病毒,从一只鸭子,进入黄燕清体内.     

传染性腔上囊病病毒与禽腺病毒混合感染的分子鉴定

应用设计的分别针对传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2蛋白基因高变区(vVP2)和Ⅰ群禽腺病毒(FAV)六邻体(hexon)蛋白基因的特异性PCR引物,对临床疑似IBD病例的2只鸡的腔上囊样品和泄殖腔拭子样品分别进行IBDV和FAV的分子检测.结果显示,通过巢式PCR从2份腔上囊样品中均扩增出了471 bp的IBDV vVP2特异性目的片段;Ssp Ⅰ和Sac Ⅰ的酶切分析以及序列测定分析证实,该目的片段属超强毒IBDV(very virulent IBDV,vvIBDV)的特征性序列,与常用疫苗株的亲缘关系较远.从2份泄殖腔拭子样品中均扩增出了900 bp的FAV特异性目的片段;序列测定和遗传进化分析表明,该片段在分子水平上属于血清l型FAV(FAV-1).结果表明,该病例同时感染了vvIBDV和FAV-1.     

猪脑心肌炎病毒SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了l对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green I real-time PCR方法.检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%.应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性.表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析.