牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a( )中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。     

广东省新兴县鸭圆环病毒感染的PCR诊断及序列分析

根据已发表的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)序列,合成了1对检测引物.利用此对引物对广东省新兴县发生的疑似圆环病毒感染的患病番鸭的肝、胰腺、心、肾、脾、肺、血液、腔上囊、胸腺、哈氏腺、粪便和羽毛进行了PCR扩增.结果显示,获得了与预期619 bp大小相符的DNA片段,经测序确认其为DuCV特异序列,证实鸭群感染了鸭圆环病毒.然后,再设计了2对引物从鸭组织提取的DNA中扩增出2条片段,拼接校对后获得了全基因组序列,并对其进行了分析.结果表明,在感染鸭体内各组织器官中都有DuCV存在,该株病毒基因组序列全长为1 988 bp,与部分已登录GenBank的DuCV同源性高达97.0%以上.